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1、专题专题(zhunt)(zhunt)二微生物的培养与应用二微生物的培养与应用课题课题(kt)3(kt)3分解纤维素的微分解纤维素的微生物的分离生物的分离*第一页，共38页。一一.基础知识基础知识.纤维素与纤维素酶纤维素与纤维素酶1.1.纤维素纤维素 纤维素是一种纤维素是一种(y zhn)由葡萄糖首尾由葡萄糖首尾相连而成相连而成的高分子化合物，是含量最丰富的多糖类的高分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质。物质。第二页，共38页。思考：纤维素是地球上含量最丰富的多思考：纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质糖类物质(wzh)(wzh)，植物每年产生的纤，植物每年产生的纤维素超过维素超过7070亿吨，
2、但却不会在地球上大亿吨，但却不会在地球上大量的积累，为什么？量的积累，为什么？纤维素能被土壤中某些微生物分解纤维素能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们利用，这是因为它们(t men)能够产生纤维素酶。能够产生纤维素酶。棉花是自然界中纤维素含量最高的天然棉花是自然界中纤维素含量最高的天然(tinrn)产物。产物。第三页，共38页。2.2.纤维素酶纤维素酶 纤维素酶是一种纤维素酶是一种(y zhn)(y zhn)复合酶，一般认为复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即它至少包括三种组分，即C1C1酶酶(外切酶外切酶)、CXCX酶酶(内切内切酶酶)和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二和葡萄
3、糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。纤维二糖纤维二糖C C1 1酶、酶、CxCx酶酶葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶葡萄糖葡萄糖纤维素纤维素一一.基础知识基础知识.纤维素与纤维素酶纤维素与纤维素酶第四页，共38页。能分解纤维素的微生物，有各种能分解纤维素的微生物，有各种(zhn)细菌、真菌和少数放线菌。细菌、真菌和少数放线菌。一一.基础知识基础知识.纤维素与纤维素酶纤维素与纤维素酶3.3.纤维素的分解纤维素的分解(fnji)(fnji)：第五页，共38页。一一.基础知识基础知识.纤维素分解纤维素分解(fnji)(fnji)细菌的筛选：
4、细菌的筛选：1.1.方法方法(fngf)(fngf)：刚果红染色法。刚果红染色法。第六页，共38页。刚果红可以与纤维素形成红色复合物，刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生心的透明圈，我们可以通过是否产生(chnshng)(chnshng)透明圈来筛选纤维素分解菌。透明圈来筛选纤维素分解菌。2.2.原理原理(yunl)(yunl)：一一.基础知识基础知识.纤维素分解细菌纤维素分解细菌(xjn)(xjn)的筛选：的筛选：第七页，共38
5、页。该方法可以通过该方法可以通过(tnggu)颜色反应直颜色反应直接筛选。接筛选。一一.基础知识基础知识.纤维素分解细菌纤维素分解细菌(xjn)(xjn)的筛选：的筛选：3.3.优点优点(yudin)(yudin)：第八页，共38页。第九页，共38页。二二.实验设计与操作实验设计与操作(cozu)(cozu).实验设计：实验设计：土壤土壤(trng)取样取样选择选择(xunz)培养培养梯度稀释梯度稀释将样品涂布到鉴别将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培纤维素分解菌的培养基上养基上挑选产生透明圈挑选产生透明圈的菌落的菌落第十页，共38页。分布分布(fnb)(fnb)环境环境1 1、土壤、土壤(trn
6、g)(trng)取样：取样：富含纤维素的环境富含纤维素的环境(hunjng)(hunjng)中中操作步骤操作步骤由于由于生物适应一定的环境，环境对生物有选择生物适应一定的环境，环境对生物有选择作用作用，在富含纤维素的环境中，纤维素分解，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土样中获得菌的含量相对提高，因此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于普通环境。目的微生物的几率要高于普通环境。原因原因第十一页，共38页。实例：树林中多年落叶形成的腐殖土，实例：树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累多年积累(jli)(jli)的枯枝败叶等。的枯枝败叶等。讨论讨论:如果找不到如果找不到(
7、b do)(b do)合适的环境，合适的环境，可以将滤纸埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中可以将滤纸埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋在土壤中多有什么作用？你认为滤纸应该埋在土壤中多深？深？答：将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解答：将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对集中，实际上是人工设置纤维素菌相对集中，实际上是人工设置纤维素分解菌生存分解菌生存(shngcn)(shngcn)的适宜环境。一的适宜环境。一般应将滤纸埋于深约般应将滤纸埋于深约10cm10cm左右的土壤中。左右的土壤中。第十二页，共38页。2 2、选择、选择(xunz)(xunz)培养培养 增加纤维素分解菌的浓度增加
8、纤维素分解菌的浓度(nngd)(nngd)，以，以确保能够从样品中分离所需要的微生物。确保能够从样品中分离所需要的微生物。目的目的(md)(md)：阅读书本阅读书本P29 P29 纤维素分解菌的选择培养基纤维素分解菌的选择培养基配方，回答问题。配方，回答问题。第十三页，共38页。答：用牛肉膏蛋白答：用牛肉膏蛋白(dnbi)胨培养基与之对胨培养基与之对照。或者将纤维素改为葡萄糖。照。或者将纤维素改为葡萄糖。2 2、选择、选择(xunz)(xunz)培养培养制备制备(zhbi)选择培养基：选择培养基：A A A A、旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？、旁栏中的配方是液体培养基还是固体
9、培养基？为什么？、旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？、旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？答：是答：是液体液体培养基，原因是配方中培养基，原因是配方中无凝固剂无凝固剂（琼脂）（琼脂）B B、这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，、这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，、这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，、这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，是如何进行选择的？是如何进行选择的？答：有选择作用，本配方中以答：有选择作用，本配方中以纤维素作为纤维素作为唯一碳源唯一碳源，只有能分解纤维素的微生物可以，只有能分解纤维素的微生物可以大量繁殖。
10、大量繁殖。C C C C、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用第十四页，共38页。称取土样称取土样20 g20 g，在无菌条件下加入装有，在无菌条件下加入装有30 mL30 mL培培养基的摇瓶中。将摇瓶置于摇床上，在养基的摇瓶中。将摇瓶置于摇床上，在30 30 下振下振荡培养荡培养1 12 d2 d，至培养基变混浊。吸取一定的培养，至培养基变混浊。吸取一定的培养液（约液（约5 mL5 mL），转移至另一瓶新鲜），转移至另一瓶新鲜(xn xin)(xn xin)的选的选择培养基中，以同样的方法培养到培养液变浑浊。择培养基中，以同样的方法培养到
11、培养液变浑浊。操作操作(cozu)：2 2、选择、选择(xunz)(xunz)培养培养第十五页，共38页。提示：在选择培养的条件提示：在选择培养的条件(tiojin)下，下，可以使那些能够适应这种营养条件可以使那些能够适应这种营养条件(tiojin)的微生物得到迅速繁殖，而那的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件些不适应这种营养条件(tiojin)的微生的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩浓缩”的作用。的作用。旁栏思考题为什么选择旁栏思考题为什么选择(xunz)培养能够培养能够“浓缩浓缩”所需的微生物？所需的微生物？第十六页，共38页。按照课题按照课题1
12、 1的稀释的稀释(xsh)(xsh)操作方法，操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀将选择培养后的培养基进行等比稀释释(xsh)101(xsh)101107107倍。倍。3.3.梯度梯度(t d)(t d)稀释稀释第十七页，共38页。4.4.将样品涂布到鉴别将样品涂布到鉴别(jinbi)(jinbi)纤维素分解菌的培养纤维素分解菌的培养基上基上制备制备(zhbi)(zhbi)鉴别培养基鉴别培养基:配方见书本配方见书本(shbn)29(shbn)29页。操作过程见页。操作过程见课题课题1 1（2 2）涂布平板：将稀释度为）涂布平板：将稀释度为10104 410106 6的菌悬的菌悬液各取液各取
13、0.1ml0.1ml涂布到平板培养基上，涂布到平板培养基上，3030倒置倒置培养。培养。第十八页，共38页。5.5.刚果红染色法刚果红染色法方法一：先方法一：先 ，再加入刚果红进行，再加入刚果红进行(jnxng)(jnxng)颜色反应。颜色反应。方法二：在方法二：在 时就加入刚果红。时就加入刚果红。培养培养(piyng)(piyng)微微生物生物倒平板倒平板(pngbn)第十九页，共38页。旁栏思考题这两种方法各有哪些优点旁栏思考题这两种方法各有哪些优点(yudin)与不足？与不足？染色法染色法优点优点缺点缺点方法一方法一方法二方法二颜色颜色(yns)(yns)反应基本上是反应基本上是纤维素分
14、解菌纤维素分解菌的作用的作用操作繁琐操作繁琐刚果红会使菌落之间发生刚果红会使菌落之间发生(fshng)(fshng)混杂混杂操作简便不操作简便不存在菌落混存在菌落混杂问题杂问题1.1.产生淀粉酶的微生物也产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈产生模糊透明圈2.2.有些微生物能降解色素，有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。形成明显的透明圈。第二十页，共38页。在产生明显的透明圈的菌落，挑取在产生明显的透明圈的菌落，挑取并接种到纤维素分解菌的选择培养并接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在基上，在300C300C 370C 370C培养，可获得培养，可获得(hud)(hud)纯化培养。纯化培养。6
15、6、纯化、纯化(chn hu)(chn hu)培养培养第二十一页，共38页。提示：课题提示：课题2 2是将土样制成的菌悬液直接是将土样制成的菌悬液直接(zhji)(zhji)涂布在以尿素为惟一氮源的选涂布在以尿素为惟一氮源的选择性培养基上，直接择性培养基上，直接(zhji)(zhji)分离得到分离得到菌落。菌落。本课题先通过选择培养，使纤维素分解本课题先通过选择培养，使纤维素分解菌得到增殖后，再将菌液涂布在鉴别培菌得到增殖后，再将菌液涂布在鉴别培养基上。其他步骤基本一致。养基上。其他步骤基本一致。旁栏思考题本实验的流程与课题旁栏思考题本实验的流程与课题2 2中的中的实验流程有哪些实验流程有哪些
16、(nxi)(nxi)异同？异同？第二十二页，共38页。第二十三页，共38页。.操作过程：操作过程：1.1.土壤取样：土壤取样：采集土样时，应选择富含纤维素的环采集土样时，应选择富含纤维素的环境。若找不到合适环境，可将滤纸埋在土境。若找不到合适环境，可将滤纸埋在土壤中一个月左右，也会有能分解纤维素的壤中一个月左右，也会有能分解纤维素的微生物生长。微生物生长。旁栏思考题为什么要在富含纤维素的旁栏思考题为什么要在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌？环境中寻找纤维素分解菌？答：生物适应一定环境，环境对生物具有答：生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用，只有在纤维素含量丰富的环境选择作用，只有在纤维素
17、含量丰富的环境中纤维素分解菌的含量才会高于其它普通中纤维素分解菌的含量才会高于其它普通环境，从而提高获得环境，从而提高获得(hud)(hud)目的微生物的目的微生物的几率。几率。旁栏思考题将滤纸埋在土壤中有什么旁栏思考题将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋进土壤多深？作用？你认为滤纸应该埋进土壤多深？答：人工设置适宜环境，使纤维素分解菌答：人工设置适宜环境，使纤维素分解菌相对聚集。将纸埋于深约相对聚集。将纸埋于深约10cm10cm的腐殖土壤的腐殖土壤中。中。第二十四页，共38页。2.2.选择培养选择培养.选择培养的目的：选择培养的目的：增加纤维素分解菌的浓度，以确保增加纤维素分解菌的浓
18、度，以确保(qubo)(qubo)能够从样品中分离到所需要的微生物。能够从样品中分离到所需要的微生物。第二十五页，共38页。选择培养：选择培养：将土样加入装有将土样加入装有30ml30ml选择培养基的锥形瓶中，选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下震荡培养将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下震荡培养1 12 2天，直至天，直至(zhzh)(zhzh)培养液变浑浊。也可重复培养液变浑浊。也可重复选择培养。选择培养。第二十六页，共38页。课题课题(kt)成果评成果评价价（一）培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛（一）培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落选出菌落(jn
19、lu)：对照的培养基在培养过程中没有菌落对照的培养基在培养过程中没有菌落(jnlu)生长生长则说明培养基制作合格。如果观察到产生透明圈的菌则说明培养基制作合格。如果观察到产生透明圈的菌落落(jnlu)，则说明可能获得了分解纤维素的微生物，则说明可能获得了分解纤维素的微生物（二）分离的结果是否一致：（二）分离的结果是否一致：由于在土壤中细菌的数量远远高于真菌和放线菌的由于在土壤中细菌的数量远远高于真菌和放线菌的数量，因此最容易分离得到的是细菌。但由于所取土数量，因此最容易分离得到的是细菌。但由于所取土样的环境不同，学生也可能得到真菌和放线菌等不同样的环境不同，学生也可能得到真菌和放线菌等不同的分
20、离结果。的分离结果。第二十七页，共38页。1.培养流感病毒时，应选用培养流感病毒时，应选用()A固体培养基固体培养基B含有多种无机盐的培养液含有多种无机盐的培养液C活的鸡胚活的鸡胚D无菌的牛肉汤无菌的牛肉汤2微生物（除病毒外）需要从外界微生物（除病毒外）需要从外界(wiji)吸收营养物质并吸收营养物质并通过代谢来维持正常的生长和繁殖。下列有关微生物营养的通过代谢来维持正常的生长和繁殖。下列有关微生物营养的说法正确的是说法正确的是()A乳酸菌与硝化细菌所利用的碳源物质是相同的乳酸菌与硝化细菌所利用的碳源物质是相同的B微生物生长中不可缺少的一些微量的无机物称为生长因微生物生长中不可缺少的一些微量的
21、无机物称为生长因子子C培养基中的营养物质浓度越高对微生物的增殖越有利培养基中的营养物质浓度越高对微生物的增殖越有利D生长因子一般是酶或核酸的组成成分，微生物本身合成生长因子一般是酶或核酸的组成成分，微生物本身合成这些生长因子的能力往往不足这些生长因子的能力往往不足CD第二十八页，共38页。3在接种操作的过程在接种操作的过程(guchng)中，不正确的是中，不正确的是()A要将接种环灼烧灭菌要将接种环灼烧灭菌B取下棉塞后要将试管口灼烧灭菌取下棉塞后要将试管口灼烧灭菌C将接种环伸入试管内，先接触长菌多的部位将接种环伸入试管内，先接触长菌多的部位D接种后还要将管口灭菌加塞接种后还要将管口灭菌加塞4高
22、压蒸气灭菌的原理是高压蒸气灭菌的原理是()A高压使细菌高压使细菌DNA变性变性B高压使细菌蛋白质凝固变性高压使细菌蛋白质凝固变性C高温烫死细菌高温烫死细菌D高温使细菌高温使细菌DNA变性变性CB第二十九页，共38页。5在在105稀释度下，平板稀释度下，平板(pngbn)上生长的平均菌落数为上生长的平均菌落数为50则每克样品中的菌落数是则每克样品中的菌落数是()A5107B50C5108D5036下列属于菌落特征的是下列属于菌落特征的是()菌落的形状菌落的形状菌落的大小菌落的大小菌落的多少菌落的多少隆起程度隆起程度颜色颜色有无荚膜有无荚膜ABCD7能排除培养基是否有杂菌污染的方法是能排除培养基是
23、否有杂菌污染的方法是()A将未接种的培养基放在实验桌上培养将未接种的培养基放在实验桌上培养B将未接种的培养基放在窗台上培养将未接种的培养基放在窗台上培养C将未接种的培养基放在恒温箱中培养将未接种的培养基放在恒温箱中培养D将已接种的培养基放在恒温箱中培养将已接种的培养基放在恒温箱中培养ABC第三十页，共38页。8、(20分分)某化工厂的污水池中，某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难于降解的含有一种有害的、难于降解的有机化合物有机化合物A。研究人员用化合。研究人员用化合物物A、磷酸盐、镁盐以及微量元、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解化合物到能
24、高效降解化合物A的细菌的细菌(xjn)(目的菌目的菌)。实验的主要步。实验的主要步骤如图所示。请分析回答问题：骤如图所示。请分析回答问题：(1)培养基中加入化合物培养基中加入化合物A的目的的目的(md)是筛选是筛选，这种培养基属于，这种培养基属于培养基。培养基。目的目的目的目的(md)(md)菌菌菌菌 选择性选择性选择性选择性 第三十一页，共38页。某化工厂的污水池中，含有一某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难于降解的有机化种有害的、难于降解的有机化合物合物A。研究人员用化合物。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能制的培养基，成功
25、地筛选到能高效降解化合物高效降解化合物A的细菌的细菌(目的目的菌菌)。实验的主要步骤如图所示。实验的主要步骤如图所示。请分析回答问题请分析回答问题(wnt)：（北：（北京卷）京卷）(2)“目的菌目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的的，实验，实验(shyn)需要振荡培养，由此推需要振荡培养，由此推测测“目的菌目的菌”的代谢类型是的代谢类型是。化合物化合物A异养需氧异养需氧第三十二页，共38页。某化工厂的污水池中，含有一某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难于降解的有机化种有害的、难于降解的有机化合物合物A。研究人员。研究人员(rnyun)用用化合物化合物
26、A、磷酸盐、镁盐以及微、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解化合物筛选到能高效降解化合物A的细的细菌菌(目的菌目的菌)。实验的主要步骤。实验的主要步骤如图所示。请分析回答问题：如图所示。请分析回答问题：(3)培养若干天后，应选择培养若干天后，应选择(xunz)培养瓶中培养瓶中化化合物合物A含量含量的培养液，接入新的培的培养液，接入新的培养液中连续培养，使养液中连续培养，使“目的菌目的菌”的的数量数量。减少(jinsho)增加增加 第三十三页，共38页。某化工厂的污水池中，含有某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难于降解一种有害的、难于降解(ji
27、nji)的有机化合物的有机化合物A。研究人员用化合物研究人员用化合物A、磷酸、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能的培养基，成功地筛选到能高效降解高效降解(jinji)化合物化合物A的细菌的细菌(目的菌目的菌)。实验的主。实验的主要步骤如图所示。请分析回要步骤如图所示。请分析回答问题：答问题：(4)转为固体培养转为固体培养(piyng)时，常采用时，常采用方法接种，获得单菌落后继续筛选。方法接种，获得单菌落后继续筛选。划线(hu xin)第三十四页，共38页。某化工厂的污水池中，含有一种某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难于降解的有机化合物有害的、难于
28、降解的有机化合物A。研究人员用化合物。研究人员用化合物A、磷酸、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解养基，成功地筛选到能高效降解化合物化合物A的细菌的细菌(目的目的(md)菌菌)。实验的主要步骤如图所示。请分实验的主要步骤如图所示。请分析回答问题：析回答问题：(5)若研究若研究“目的菌目的菌”的生长的生长(shngzhng)规律，将规律，将单个菌落进行液体培养，可采用的方法进行计数，单个菌落进行液体培养，可采用的方法进行计数，以时间为横坐标，以以时间为横坐标，以为纵坐标，为纵坐标，绘制生长绘制生长(shngzhng)曲线。曲线。细菌细菌(xj
29、n)数目数目的对数的对数第三十五页，共38页。某化工厂的污水池中，含有一某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难于降解的有机种有害的、难于降解的有机(yuj)化合物化合物A。研究人员用。研究人员用化合物化合物A、磷酸盐、镁盐以及、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解化合物地筛选到能高效降解化合物A的细菌的细菌(目的菌目的菌)。实验的主要。实验的主要步骤如图所示。请分析回答问步骤如图所示。请分析回答问题：题：(6)实验实验(shyn)结束后，使用过的培养结束后，使用过的培养基应该进行基应该进行处理后，才能倒掉。处理后，才能倒掉。灭菌(mi jn)第
30、三十六页，共38页。v根据用途分根据用途分v选择培养基选择培养基在培养基中加入某种化学物质在培养基中加入某种化学物质,以抑以抑制不需要的微生物的生长制不需要的微生物的生长,促进促进(cjn)(cjn)所需要的微生所需要的微生物的生长物的生长v鉴别培养基鉴别培养基在培养基中加入某种指示剂或化学药在培养基中加入某种指示剂或化学药品品,用以鉴别不同种类的微生物。用以鉴别不同种类的微生物。v例如：伊红和美蓝例如：伊红和美蓝,和大肠杆菌的代谢产物结合和大肠杆菌的代谢产物结合,使菌使菌落呈黑色（老教材说法：深紫色落呈黑色（老教材说法：深紫色,带有金属光泽）带有金属光泽）,鉴别大肠杆菌鉴别大肠杆菌第三十七页
31、，共38页。85.每一年，我都更加相信生命的浪费是在于：我们没有献出爱，我们没有使用力量，我们表现出自私的谨慎，不去冒险，避开痛苦，也失去了快乐。约翰B塔布 86.微笑，昂首阔步，作深呼吸，嘴里哼着歌儿。倘使你不会唱歌，吹吹口哨或用鼻子哼一哼也可。如此一来，你想让自己烦恼都不可能。戴尔卡内基 87.当一切毫无希望时，我看着切石工人在他的石头上，敲击了上百次，而不见任何裂痕出现。但在第一百零一次时，石头被劈成两半。我体会到，并非那一击，而是前面的敲打使它裂开。贾柯瑞斯 88.每个意念都是一场祈祷。詹姆士雷德非 89.虚荣心很难说是一种恶行，然而一切恶行都围绕虚荣心而生，都不过是满足虚荣心的手段。
32、柏格森 90.习惯正一天天地把我们的生命变成某种定型的化石，我们的心灵正在失去自由，成为平静而没有激情的时间之流的奴隶。托尔斯泰 91.要及时把握梦想，因为梦想一死，生命就如一只羽翼受创的小鸟，无法飞翔。兰斯顿休斯 92.生活的艺术较像角力的艺术，而较不像跳舞的艺术；最重要的是：站稳脚步，为无法预见的攻击做准备。玛科斯奥雷利阿斯 93.在安详静谧的大自然里，确实还有些使人烦恼.怀疑.感到压迫的事。请你看看蔚蓝的天空和闪烁的星星吧!你的心将会平静下来。约翰纳森爱德瓦兹 94.对一个适度工作的人而言，快乐来自于工作，有如花朵结果前拥有彩色的花瓣。约翰拉斯金 95.没有比时间更容易浪费的,同时没有比
33、时间更珍贵的了，因为没有时间我们几乎无法做任何事。威廉班 96.人生真正的欢欣，就是在于你自认正在为一个伟大目标运用自己；而不是源于独自发光.自私渺小的忧烦躯壳，只知抱怨世界无法带给你快乐。萧伯纳 97.有三个人是我的朋友爱我的人.恨我的人.以及对我冷漠的人。爱我的人教我温柔；恨我的人教我谨慎；对我冷漠的人教我自立。JE丁格 98.过去的事已经一去不复返。聪明的人是考虑现在和未来，根本无暇去想过去的事。英国哲学家培根 99.真正的发现之旅不只是为了寻找全新的景色，也为了拥有全新的眼光。马塞尔普劳斯特 100.这个世界总是充满美好的事物，然而能看到这些美好事物的人，事实上是少之又少。罗丹 101
34、.称赞不但对人的感情，而且对人的理智也发生巨大的作用，在这种令人愉快的影响之下，我觉得更加聪明了，各种想法，以异常的速度接连涌入我的脑际。托尔斯泰 102.人生过程的景观一直在变化，向前跨进，就看到与初始不同的景观，再上前去，又是另一番新的气候。叔本华 103.为何我们如此汲汲于名利，如果一个人和他的同伴保持不一样的速度，或许他耳中听到的是不同的旋律，让他随他所听到的旋律走，无论快慢或远近。梭罗 104.我们最容易不吝惜的是时间，而我们应该最担心的也是时间；因为没有时间的话，我们在世界上什么也不能做。威廉彭 105.人类的悲剧，就是想延长自己的寿命。我们往往只憧憬地平线那端的神奇【违禁词，被屏
35、蔽】，而忘了去欣赏今天窗外正在盛开的玫瑰花。戴尔卡内基 106.休息并非无所事事，夏日炎炎时躺在树底下的草地，听着潺潺的水声，看着飘过的白云，亦非浪费时间。约翰罗伯克 107.没有人会只因年龄而衰老，我们是因放弃我们的理想而衰老。年龄会使皮肤老化，而放弃热情却会使灵魂老化。撒母耳厄尔曼 108.快乐和智能的区别(qbi)在于：自认最快乐的人实际上就是最快乐的，但自认为最明智的人一般而言却是最愚蠢的。卡雷贝C科尔顿 109.每个人皆有连自己都不清楚的潜在能力。无论是谁，在千钧一发之际，往往能轻易解决从前认为极不可能解决的事。戴尔卡内基 110.每天安静地坐十五分钟倾听你的气息，感觉它，感觉你自己
36、，并且试着什么都不想。艾瑞克佛洛姆 111.你知道何谓沮丧-就是你用一辈子工夫，在公司或任何领域里往上攀爬，却在抵达最高处的同时，发现自己爬错了墙头。坎伯 112.伟大这个名词未必非出现在规模很大的事情不可；生活中微小之处，照样可以伟大。布鲁克斯 113.人生的目的有二：先是获得你想要的；然后是享受你所获得的。只有最明智的人类做到第二点。罗根皮沙尔史密斯 114.要经常听.时常想.时时学习，才是真正的生活方式。对任何事既不抱希望，也不肯学习的人，没有生存的资格。阿萨赫尔帕斯爵士 115.旅行的精神在于其自由，完全能够随心所欲地去思考.去感觉.去行动的自由。威廉海兹利特 116.昨天是张退票的支
37、票，明天是张信用卡，只有今天才是现金；要善加利用。凯里昂 117.所有的财富都是建立在健康之上。浪费金钱是愚蠢的事，浪费健康则是二级的谋杀罪。BC福比斯 118.明知不可而为之的干劲可能会加速走向油尽灯枯的境地，努力挑战自己的极限固然是令人激奋的经验，但适度的休息绝不可少，否则迟早会崩溃。迈可汉默 119.进步不是一条笔直的过程，而是螺旋形的路径，时而前进，时而折回，停滞后又前进，有失有得，有付出也有收获。奥古斯汀 120.无论那个时代，能量之所以能够带来奇迹，主要源于一股活力，而活力的核心元素乃是意志。无论何处，活力皆是所谓“人格力量”的原动力，也是让一切伟大行动得以持续的力量。史迈尔斯 1
38、21.有两种人是没有什么价值可言的：一种人无法做被吩咐去做的事，另一种人只能做被吩咐去做的事。CHK寇蒂斯 122.对于不会利用机会的人而言，机会就像波浪般奔向茫茫的大海，或是成为不会孵化的蛋。乔治桑 123.未来不是固定在那里等你趋近的，而是要靠你创造。未来的路不会静待被发现，而是需要开拓，开路的过程，便同时改变了你和未来。约翰夏尔 124.一个人的年纪就像他的鞋子的大小那样不重要。如果他对生活的兴趣不受到伤害，如果他很慈悲，如果时间使他成熟而没有了偏见。道格拉斯米尔多 125.大凡宇宙万物，都存在着正、反两面，所以要养成由后面.里面，甚至是由相反的一面，来观看事物的态度。老子 126.在寒冷中颤抖过的人倍觉太阳的温暖，经历过各种人生烦恼的人，才懂得生命的珍贵。怀特曼 127.一般的伟人总是让身边的人感到渺小；但真正的伟人却能让身边的人认为自己很伟大。G.K.Chesteron 128.医生知道的事如此的少，他们的收费却是如此的高。马克吐温 129.问题不在于：一个人能够轻蔑、藐视或批评什么，而是在于：他能够喜爱、看重以及欣赏什么。约翰鲁斯金 第三十八页，共38页。