维生素类药物分析讲义.ppt

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1、维生素类药物分析讲义维生素：维生素：是维持人体正常代谢机能所必需的是维持人体正常代谢机能所必需的 微量营养物资。微量营养物资。人体不能合成维生素。人体不能合成维生素。脂溶性脂溶性 VitA、D、E、K1 等等 水溶性水溶性 VitB族族(B1、B2、B6、B12)VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺、叶酸、烟酸、烟酰胺VitPP-H 维生素维生素A醇醇-COCH3 维生素维生素A醋酸酯醋酸酯-COC15H31 维生素维生素A棕榈酸酯棕榈酸酯R:第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析一、结构与性质一、结构与性质具有共轭多烯醇侧链的环己烯具有共轭多烯醇侧链的环己烯123456789v 具有具有UVUV吸

2、收吸收v 存在多种立体异构化合物存在多种立体异构化合物v 易易发生脱氢、脱水、聚合反应发生脱氢、脱水、聚合反应v 易被氧化易被氧化性质性质VitA紫外线、紫外线、O2、氧化剂、氧化剂环氧化物环氧化物OVitA醛或酸醛或酸维生素维生素A 全反式全反式 325.5 100%新维生素新维生素Aa 2-cis 328 75%新维生素新维生素Ab 4-cis 320.5 24%新维生素新维生素Ac 2，4-dicis 310.5 15%异维生素异维生素Aa 6-cis 323 21%异维生素异维生素Ab 2,6-dicis 324 24%相对生物效价相对生物效价结构结构去氢去氢脱水脱水VitA2VitA

3、3聚合聚合鲸醇鲸醇VitA环氧化物环氧化物VitA醛醛VitA酸酸（一）三氯化锑反应（一）三氯化锑反应CHCl3二、鉴别试验二、鉴别试验条件条件 无水、无醇无水、无醇VitASbCl3蓝色蓝色紫红色紫红色（二）（二）UV法法BPVitA无水乙醇无水乙醇HCl去水去水VitAmax为为326nm一个吸收峰一个吸收峰max为为350390nm三个吸收峰三个吸收峰VitA去水去水VitA（VitA3）BP、USP 对照品法对照品法 显色剂显色剂 磷钼酸磷钼酸（三）（三）TLC法法三、含量测定三、含量测定（一）（一）UV法法立体异构体立体异构体氧化产物及光照产物氧化产物及光照产物合成中间体合成中间体去

4、氢维生素去氢维生素A（VitA2）去水维生素去水维生素A（VitA3）三点校正法三点校正法VitA的含量表示的含量表示-生物生物效价（效价（IU/g）1IU=0.344ug全反式全反式VitA醋酸酯醋酸酯=0.300ugVitA醇醇VitA醋酸酯醋酸酯VitA醇醇1IU0.344ug0.300ug效价效价（1IU/g）2.907 1063.33 1061900328nm1530325nm18201830(换算因子换算因子)International Unit结果计算公式为：结果计算公式为：效价效价=换算因子换算因子第一法第一法 等波长差法等波长差法 测定对象测定对象 VitA醋酸酯醋酸酯 32

5、8-316 =340-328第二法第二法 等吸收度法等吸收度法(皂化法皂化法)测定对象测定对象 VitA醇醇6/7A1=A2=A3波长的选择波长的选择三点校正法三点校正法三点校正法三点校正法 第一法第一法 等波长差法等波长差法 316328340第二法等吸收比法A2=A3=6/7A1测定方法测定方法1 1、第一法、第一法 维生素维生素A醋酸酯醋酸酯按表中各波长分别测定吸收度，计算按表中各波长分别测定吸收度，计算Ai/A328规定吸收度比值规定吸收度比值判断方法判断方法（1 1）若）若max=326329nm,max=326329nm,(Ai/A328)测测-规定值规定值 0.02 0.02 则

6、用则用A328处的测得值计算。处的测得值计算。供试品中效价（供试品中效价（IU/g）=19001900（2 2）若）若max=326329nm,max=326329nm,有有(Ai/A328)测测-规定值规定值 0.020.02 则用校正公式校正后计算则用校正公式校正后计算f f值再判断：值再判断：A328（校正）（校正）=3.52（2A328-A316-A340）若若f f值在值在3%3%以内，仍以未校正的以内，仍以未校正的A328计算。计算。若若f f值在值在-15%-15%-3%-3%以内，用校正后的以内，用校正后的A328（校正）（校正）计算。计算。供试品中效价（供试品中效价（IU/g

7、）=19001900若若f f值值3%3%或或 0.73，则用色谱法测定。，则用色谱法测定。（二）三氯化锑比色法（二）三氯化锑比色法 标准曲线法标准曲线法优点优点 简便简便 快速快速max 618nm620nm缺点缺点呈色不稳定呈色不稳定（5 10s内）内）水分干扰水分干扰与标准曲线温差与标准曲线温差1专属性差专属性差三氯化锑有腐蚀性三氯化锑有腐蚀性（三）（三）HPLCRP-HPLCRP-HPLC同时测定人血清中同时测定人血清中Vit AVit A和和Vit EVit E含量含量色谱条件色谱条件 色谱柱：色谱柱：C18C18 流动相：甲醇流动相：甲醇-水水 流速：流速：1.2ml/min 检测

8、波长与检测波长与AUFS：08min(330nm,0.25AUFS);8min后后(292nm,0.05AUFS)内标：内标：VitVit A A 酯酯Vit AVit E苯并二氢吡喃环，带有脂肪侧链苯并二氢吡喃环，带有脂肪侧链R1、R2和乙酰化和乙酰化酚羟基，又称生育酚醋酸酯。酚羟基，又称生育酚醋酸酯。一、结构与性质一、结构与性质第二节第二节 维生素维生素E E的分析的分析CH3CO*OR1OR2CH3名称名称R1R2相对活性相对活性-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1性质：性质：1 1、苯环、苯环-UV-UV法法2

9、、酯键、酯键-易水解，水解产物生育酚易被氧化。易水解，水解产物生育酚易被氧化。3、有手性碳原子、有手性碳原子-有立体异构体。天然产品一有立体异构体。天然产品一般是般是d型（右旋），合成品是消旋体（型（右旋），合成品是消旋体（dl型）型）Vit E(dl-Tocopheryl Acetate)7515（一）硝酸反应（一）硝酸反应橙红色橙红色二、鉴别试验二、鉴别试验VEHNO3生育红生育红生育酚生育酚HNO3生育红（橙红色）生育红（橙红色）（二）三氯化铁联吡啶反应（二）三氯化铁联吡啶反应VEKOH生育酚生育酚Fe3+对对-生育醌生育醌Fe2+2，2-联吡啶联吡啶血红色血红色生育酚生育酚Fe3+对对

10、-生育醌生育醌红色红色（三）（三）UV法法0.01%无水乙醇中无水乙醇中max=284nm min=254nm =41.045.5维生素维生素EUV图图薄层板薄层板 硅胶硅胶G展开剂展开剂 环己烷环己烷-乙醚（乙醚（4 ：1）显色剂显色剂 硫酸（硫酸（105 5）VitE Rf =0.7TLC法法（四）（四）无水乙醇无水乙醇2Ce4+2Ce3+利用生育酚的易氧化性利用生育酚的易氧化性原理原理（一）（一）三、杂质检查三、杂质检查VitE醋酸酯中生育酚的检查：醋酸酯中生育酚的检查：铈量法铈量法滴定剂：硫酸铈滴定液滴定剂：硫酸铈滴定液 Ce(SO4)2（0.01mol/L）终点指示：二苯胺（亮黄终点

11、指示：二苯胺（亮黄灰紫）灰紫）二氢吡啶类药物二氢吡啶类药物：邻二氮菲：邻二氮菲-亚铁亚铁吩塞嗪类药物吩塞嗪类药物：自身指示法：自身指示法 取本品取本品0.10g，加无水乙醇，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯溶解后，加二苯胺试液胺试液1滴，用硫酸铈液（滴，用硫酸铈液（0.01mol/L）滴定，消耗）滴定，消耗硫酸铈液（硫酸铈液（0.01mol/L）不得过）不得过 1.0ml。例例2.15规定限量规定限量若硫酸铈液浓度不是若硫酸铈液浓度不是0.01000mol/L，应重新计算硫，应重新计算硫酸铈的消耗量酸铈的消耗量（二）注意（二）注意设：应消耗硫酸铈液设：应消耗硫酸铈液 V ml0.011.0 实际

12、浓度实际浓度 V四、含量测定四、含量测定GC法法 加校正因子内标法加校正因子内标法 ChP（一）（一）1、1 1、VitE测定的色谱条件测定的色谱条件载气：载气：N2固定相：硅烷化硅藻土上涂布硅酮（固定相：硅烷化硅藻土上涂布硅酮（OV-17）柱温：柱温：265检测器：氢火焰离子化检测器检测器：氢火焰离子化检测器(FID)内标：内标：正三十二烷正三十二烷 n 500 R2内标物内标物是样品中不存在的物质是样品中不存在的物质与被测组分峰靠近与被测组分峰靠近能与各组分完全分离能与各组分完全分离与被测组分的量接近与被测组分的量接近ChP和和BP 内标内标 正三十二烷正三十二烷USP 内标内标 十六酸十

13、六醇酯十六酸十六醇酯2 2 测定测定供试液：样品供试液：样品+内标内标对照液：对照对照液：对照+内标内标（1）系统适用性试验）系统适用性试验 对照液（对照对照液（对照+内标）进样内标）进样 理论塔板数理论塔板数N应不低于应不低于500，VE与内标峰分离度与内标峰分离度应大于应大于2。tR N=5.54 W1/2H()2 R=2(tR1-tR2)Wb1+Wb2（2）校正因子的测定）校正因子的测定 对照液（对照对照液（对照+内标）进样内标）进样（3）样品测定）样品测定 供试液（样品供试液（样品+内标）进样内标）进样 f =As/ms Ar/mr f =As/ms Au/mumu=f Au As/m

14、ss-内标内标r-对照对照样品：样品：dl生育酚生育酚固定相：十八烷基硅烷键合硅胶固定相：十八烷基硅烷键合硅胶流动相：甲醇流动相：甲醇-水（水（49 ：1）检测波长：检测波长：292nm（二）（二）RP-HPLC法法（外标法）（外标法）JP用峰高计算含量：用峰高计算含量：W生育酚生育酚 =W对对 H对对H样样（三）（三）FLD同步荧光扫描法同步荧光扫描法血清中维生素血清中维生素E E的测定：的测定：维生素维生素E E和溶剂的拉曼光谱重叠和溶剂的拉曼光谱重叠激发波长激发波长295nm295nm氨基嘧啶环氨基嘧啶环氨基嘧啶环氨基嘧啶环CHCH2 2 噻唑环噻唑环噻唑环噻唑环(季铵碱季铵碱季铵碱季铵

15、碱)第四节第四节 维生素维生素B B1 1的分析的分析一、结构与性质一、结构与性质HClCl-1、共轭双键：共轭双键：UV（max=246nm）性质性质:可与酸成盐；非水碱量法可与酸成盐；非水碱量法4 4、嘧啶环、嘧啶环N N原子原子可与生物碱沉淀剂反应（鉴别和硅可与生物碱沉淀剂反应（鉴别和硅钨酸重量法）钨酸重量法）3、碱性碱性N N原子原子：嘧啶环上伯氨基嘧啶环上伯氨基 噻唑环上季铵噻唑环上季铵2、噻唑环含噻唑环含S S原子：硫色素荧光法原子：硫色素荧光法 分解产物与分解产物与Pb(AC)Pb(AC)2 2反应反应荧光消失荧光消失蓝色荧光蓝色荧光硫色素硫色素正丁醇提取正丁醇提取NaOHVit

16、B 1（一）硫色素反应（一）硫色素反应 ChPK3Fe(CN)6+4NaOHH+3K4Fe(CN)6 +Na4Fe(CN)6+O2+2H2O二、鉴别试验二、鉴别试验K3Fe(CN)6硫色素硫色素(O)-2HH+H+H+H+（二）沉淀反应（二）沉淀反应VitB1S元素反应元素反应Cl-反应反应（三）其他反应（三）其他反应VitB1NaOHNa2SPb(AC)2PbS(黑色黑色)三、含量测定三、含量测定加入醋酸汞消除盐酸盐的干扰。加入醋酸汞消除盐酸盐的干扰。指示剂：喹那啶红亚甲蓝（紫红指示剂：喹那啶红亚甲蓝（紫红天蓝）天蓝）（一）非水溶液滴定法（一）非水溶液滴定法 ChP BP（二）（二）UV法法

17、中国药典中中国药典中VitB1片剂和注射液均采用本法测定含量。片剂和注射液均采用本法测定含量。max=246nmmax=246nm（三）硅钨酸重量法（三）硅钨酸重量法 ChP（90年版）以前用年版）以前用1 1 原理原理2C12H17ClN4OSHCl+SiO2 12WO326H2OH+(C12H17ClN4OS)2SiO2(OH)212WO34H2O+HCl+4H2O白色白色 2337.273479.22VitB1%=W沉淀沉淀 0.1939W供供100%2VitB1硅钨酸硅钨酸（VitB1)2硅钨酸硅钨酸 换算因数换算因数=2MVitB1M沉淀沉淀=2 337.273479.22=0.19

18、39 取本品约取本品约50mg，精密称定，加水，精密称定，加水50ml溶解后，溶解后，加盐酸加盐酸2ml，煮沸，立即滴加硅钨酸试液，煮沸，立即滴加硅钨酸试液4ml，继，继续煮沸续煮沸2分钟，用分钟，用80恒重的垂熔玻璃坩埚滤过，恒重的垂熔玻璃坩埚滤过，沉淀先用煮沸的盐酸溶液（沉淀先用煮沸的盐酸溶液（120）20ml分次洗涤，分次洗涤，再用水再用水10ml洗涤洗涤1次，最后用丙酮洗涤次，最后用丙酮洗涤2次，每次次，每次5ml，在，在80干燥至恒重，精密称定，所得重量与干燥至恒重，精密称定，所得重量与0.1939相乘，即得相乘，即得2 2、测定方法测定方法（1 1）硅钨酸用量：过量硅钨酸用量：过量

19、 VB1:硅钨酸硅钨酸=1:8=1:8（2 2）沉淀反应在沉淀反应在HCl中进行，增大沉淀颗粒中进行，增大沉淀颗粒实验条件：实验条件：（3 3）煮沸：煮沸：2-32-3分钟。太长，沉淀易附着于器壁分钟。太长，沉淀易附着于器壁而损失。而损失。（4 4）洗涤：热的稀洗涤：热的稀HCl、水、丙酮洗。、水、丙酮洗。（5 5）干燥：干燥：80 80 保持保持4 4个个H H2 2O O（四）硫色素荧光法（四）硫色素荧光法1、原理原理2、方法、方法+NaOH+铁氰化钾铁氰化钾+异丁醇异丁醇+NaOH+异丁醇异丁醇Sd（空白）（空白）对照液对照液供试液供试液+NaOH+铁氰化钾铁氰化钾+异丁醇异丁醇+NaO

20、H+异丁醇异丁醇b（空白）（空白）AC样样A-bC对对=S-dC样样=C对对 A-bS-d(五五)高效液相色谱法高效液相色谱法例如：甲硫氨酸维例如：甲硫氨酸维B1 注射液中甲硫氨酸和维注射液中甲硫氨酸和维B1的含量测定的含量测定方法：色谱柱：方法：色谱柱：C18流动相：流动相：(A)0.005 molL 庚烷磺酸钠溶液庚烷磺酸钠溶液(磷酸调磷酸调pH 至至3.0)与与(B)乙腈为流乙腈为流动相，梯度洗脱动相，梯度洗脱检测波长为检测波长为210 nm;甲硫氨酸甲硫氨酸VB1(六六)流动注射化学发光法流动注射化学发光法 维生素维生素 B1在碱性介质中在碱性介质中被铁氰化钾氧化，产生微弱被铁氰化钾氧

21、化，产生微弱化学发光化学发光,罗丹明罗丹明B 可快速吸可快速吸收反应释放的能量而跃迁至收反应释放的能量而跃迁至激发态，以光辐射的形式返激发态，以光辐射的形式返回基态，十六烷基三甲基溴回基态，十六烷基三甲基溴化铵化铵(CTMAB)可敏化其发可敏化其发光强度，使光强度大大增强。光强度，使光强度大大增强。A 样品样品+CTMAB B 罗丹明罗丹明BC 铁氰化钾铁氰化钾+NaOH P 蠕动泵蠕动泵 F 流通池流通池1、罗丹明、罗丹明B-CTMAB化学发光法化学发光法可用于测定维生素可用于测定维生素B1 片和注射液片和注射液V 进样阀进样阀 PMT 光电倍增管光电倍增管 VB1 和和KIO4 在酸性介质

22、中的反应为常规的氧化在酸性介质中的反应为常规的氧化-还原反应还原反应,不产生化学发光。反应剩余的不产生化学发光。反应剩余的KIO4 注入到注入到Luminol流路中流路中,KIO4 与与Luminol 在混合管中发生化学发光反应在混合管中发生化学发光反应,但因反应灵敏但因反应灵敏,在未到达检测器之前反应已经完成在未到达检测器之前反应已经完成,故此发光强度未被检测故此发光强度未被检测,然后然后剩余的剩余的Luminol 继续与继续与Na2 SO3发生化学发光反应而在发光流通发生化学发光反应而在发光流通池中被检测池中被检测,其发光强度与维生素其发光强度与维生素B1 的浓度在一定的范围内呈的浓度在一

23、定的范围内呈良好的线性关系。良好的线性关系。2、FI-化学发光法间接测定化学发光法间接测定（七）分光光度法（七）分光光度法 维生素维生素B1 在在pH 2的盐酸溶液中以分子状态存在的盐酸溶液中以分子状态存在,稳定性良稳定性良好好,但但pH大于大于5时时,将会分解。在将会分解。在pH 7 时维生素时维生素B1 完全分解。完全分解。利用光谱差异测定。测定波长：利用光谱差异测定。测定波长：249nm1、差示分光光度法、差示分光光度法2、动力学光度法、动力学光度法 在氢氧化钠介质中在氢氧化钠介质中,维生素维生素B1能灵敏催化高碘酸钾氧化苯能灵敏催化高碘酸钾氧化苯并红紫并红紫4B 使之褪色使之褪色,在一

24、定范围内在一定范围内,苯并红紫苯并红紫4B 褪色程度与维褪色程度与维生素生素B1浓度成正比浓度成正比3、酸性染料比色法、酸性染料比色法 利用维生素利用维生素B1 与酸性染料溴麝香草酚蓝成盐与酸性染料溴麝香草酚蓝成盐,在在420 nm波长波长处测定吸收度处测定吸收度(八八)Fe()-2,2 联吡啶分光光度法联吡啶分光光度法(九九)电位滴定法电位滴定法 用银电极为指示电极用银电极为指示电极,甘汞电极为参比电极甘汞电极为参比电极,AgNO3 标准标准溶液为滴定剂溶液为滴定剂第五节第五节 维生素维生素C的分析的分析L抗坏血酸抗坏血酸一、结构与性质一、结构与性质*1、多羟基化合物：具糖的性质、多羟基化合

25、物：具糖的性质 性质性质:2、2 2，3-3-烯二醇结构：强还原性烯二醇结构：强还原性氧化还原滴定法氧化还原滴定法3 3、C3-OH:酸性酸性,一元酸，可与一元酸，可与Na2CO3成盐成盐(O)5、水解反应、水解反应：与碱反应与碱反应6、UV特征特征4 4、手性、手性C原子（原子（C4、C5）：具旋光性，）：具旋光性，L(+)L(+)抗抗坏血酸活性最强坏血酸活性最强max=243nmmax=243nm（一）与氧化剂的反应（一）与氧化剂的反应二、鉴别试验二、鉴别试验Cu2O（红色）（红色）VitCAgNO3Ag（黑色）（黑色）2，6-二氯靛酚钠二氯靛酚钠兰色消失兰色消失KMnO4紫红色褪去紫红色

26、褪去Felling试剂试剂（三）（三）UV BP0.01mol/L HCl（二）糖类的反应（二）糖类的反应 USPVitC三氯醋酸三氯醋酸或盐酸或盐酸戊糖戊糖脱水脱水糠醛糠醛吡咯吡咯50 max=243 nm=545-585蓝色蓝色指示剂指示剂 淀粉指示液淀粉指示液原理原理1、三、含量测定三、含量测定H+（一）碘量法（一）碘量法 ChP（1）溶解：加新沸的冷）溶解：加新沸的冷H2O，减少水中溶解氧对，减少水中溶解氧对测定的影响测定的影响（2）酸性环境：）酸性环境：HAC，减慢，减慢VitC被被O2氧化速度氧化速度（3）立即滴定：减少）立即滴定：减少O2的干扰的干扰（4）附加剂干扰的排除）附加剂

27、干扰的排除片剂片剂 滑石粉滑石粉 过滤过滤注射剂注射剂 抗氧剂抗氧剂 丙酮丙酮甲醛甲醛Na2SO3,NaHSO3，Na2S2O3,Na2S2O52、讨论讨论（二）（二）2 2，6-6-二氯靛酚钠滴定法二氯靛酚钠滴定法 USP、JP原理原理1、VitC+去氢去氢VitC+（玫瑰色）（玫瑰色）（无色）（无色）自身指示终点法自身指示终点法以出现玫瑰色为终点以出现玫瑰色为终点缺点：缺点：滴定液不稳定，需经常标定滴定液不稳定，需经常标定干扰多干扰多 氧化力较强氧化力较强（三）（三）HPLC法法HPLC法测定制剂、生物样品、果汁中维生素法测定制剂、生物样品、果汁中维生素C方法方法 离子交换色谱法离子交换色

28、谱法 离子对色谱法离子对色谱法 分配色谱法（正、反相）分配色谱法（正、反相）血、尿、组织、细胞等血、尿、组织、细胞等检测器：紫外、安培检测器检测器：紫外、安培检测器例如：例如：RP-HPLC测定多维软咀嚼片中维生素测定多维软咀嚼片中维生素C 含量含量色谱柱色谱柱:Hypersil C18柱柱;流动相流动相:0.005molL-1磷酸二氢钾溶液磷酸二氢钾溶液(用磷酸调用磷酸调pH 至至3.6);检测波长检测波长:246nm。1、2,4-二硝基苯肼比色法二硝基苯肼比色法（四）分光光度法（四）分光光度法例如：不同产地枸杞子中维生素例如：不同产地枸杞子中维生素C 含量测定含量测定2、胶束增溶分光光度法

29、、胶束增溶分光光度法 维生素维生素C 还原氯化硝基还原氯化硝基四氮唑蓝四氮唑蓝(NBT)为蓝色化合为蓝色化合物物,蓝色化合物被溴代十六蓝色化合物被溴代十六烷基吡啶烷基吡啶(CPB)在水溶液中在水溶液中形成的胶束增溶形成的胶束增溶,使显色反使显色反应灵敏度显著提高。应灵敏度显著提高。3、紫外分光光度法、紫外分光光度法4、邻二氮菲分光光度法、邻二氮菲分光光度法 利用抗坏血酸与利用抗坏血酸与0.05%Fe()-1,10-二氮杂菲溶液在二氮杂菲溶液在pH=26的盐酸介质中生成的盐酸介质中生成Fe(),Fe()与啉菲罗啉形成与啉菲罗啉形成有色络合物有色络合物,其吸光值与抗坏血酸的浓度成正比其吸光值与抗坏

30、血酸的浓度成正比,测定药剂中测定药剂中维生素维生素C 含量。含量。5、流动注射光度法、流动注射光度法（五）荧光法（五）荧光法快速循环伏安法快速循环伏安法 采用采用L-赖氨酸修饰玻碳电极，以磷酸盐缓冲溶液赖氨酸修饰玻碳电极，以磷酸盐缓冲溶液 为支持为支持电解质电解质（六）电极法（六）电极法第五节第五节 维生素维生素D的分析的分析胆甾醇7-脱氢胆甾醇维生素 D3麦角甾醇维生素 D2 维生素维生素D2 维生素维生素D3 溶解性溶解性 不稳定性不稳定性 旋光性旋光性 显色反应显色反应 紫外吸收紫外吸收二、鉴别三、杂质检查1 1、麦角醇的检查、麦角醇的检查9090乙醇溶解后，加洋地黄皂苷溶液，放置乙醇溶

31、解后，加洋地黄皂苷溶液，放置18h18h，不得发生浑浊。不得发生浑浊。2 2、前维生素、前维生素D D的光照产物的光照产物280nm320nm四、含量测定四、含量测定（一）（一）NP-HPLC Ch.P 2005u 固定相：硅胶硅胶u 流动相：正己烷正戊醇（正己烷正戊醇（997：3）u 检测波长：254nm第一法：第一法：用于无维生素用于无维生素A A醇及其他干扰的供试品醇及其他干扰的供试品第二法：第二法：(1)皂化提取皂化提取;(2);(2)净化用色谱柱系统分离净化用色谱柱系统分离收集维生素收集维生素D D，得供试品溶液，得供试品溶液B;(3)B;(3)按第一法进行测按第一法进行测定。定。第

32、三法：第三法：当样品经皂化提取及净化用色谱系统分当样品经皂化提取及净化用色谱系统分离收集后，前维生素离收集后，前维生素D D峰仍受干扰时，采用此法。峰仍受干扰时，采用此法。（二）（二）RP-HPLC例如：钙加维生素例如：钙加维生素D 胶丸中维生素胶丸中维生素D3的含量测定的含量测定 由于胶丸中含有植物油由于胶丸中含有植物油,通常采用的前处理方法为皂化后通常采用的前处理方法为皂化后提取测定，操作不但繁琐提取测定，操作不但繁琐,而且在皂化及提取中有部分损而且在皂化及提取中有部分损失失,因而影响结果。因而影响结果。本法则采用正己烷本法则采用正己烷2乙醇乙醇(6 3)混合溶剂混合溶剂,可以同时溶解维生

33、可以同时溶解维生素素D3 和植物油和植物油,无须皂化和提取无须皂化和提取色谱条件色谱条件Diamond C18 色谱柱色谱柱;流动相流动相:甲醇甲醇2水水(90 10);检测波长检测波长:265 nm。思思 考考 题题 根据根据VB1的结构的结构,综述其性质综述其性质,设计鉴别试验方设计鉴别试验方法和含量测定方法。法和含量测定方法。HClCl-硫色素硫色素(O)-2H蓝色荧光蓝色荧光1 1、维生素、维生素B1 1的分析的分析2 2、维生素、维生素C的分析的分析3 3、维生素、维生素D的分析的分析4 4、复方制剂中多种维生素的分析、复方制剂中多种维生素的分析作作 业业要求：要求：7-8人人/组，准备组，准备PPT，下次课堂讲授，每组不超，下次课堂讲授，每组不超过过30分钟。分钟。内容包括：结构、性质与分析方法；鉴别试验方法；内容包括：结构、性质与分析方法；鉴别试验方法；药典含量测定方法及原理等；其他方法及原理或方法药典含量测定方法及原理等；其他方法及原理或方法进展等进展等谢谢观赏！2020/11/589