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1、细胞生物学实验细胞生物学实验 实验实验2 细胞活体染色细胞活体染色l目的要求目的要求l观察活细胞内线粒体的形态、数量与分布。观察活细胞内线粒体的形态、数量与分布。l掌握细胞活体染色技术及观察方法。掌握细胞活体染色技术及观察方法。实验原理实验原理l活体染色是指对细胞或组织在活体状态下进行的一活体染色是指对细胞或组织在活体状态下进行的一种无毒害的染色方法，可以显示出活细胞内的某种种无毒害的染色方法，可以显示出活细胞内的某种天然结构存在的真实性，不影响细胞的生命活动和天然结构存在的真实性，不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化。产生任何物理、化学变化。l一般的生物材料不能穿透细胞膜，只有当细胞
2、被固一般的生物材料不能穿透细胞膜，只有当细胞被固定后，细胞膜被破坏，染料才能进入细胞内部。但定后，细胞膜被破坏，染料才能进入细胞内部。但是，有一些染料（称是，有一些染料（称“活体染料活体染料”）却能进入活细）却能进入活细胞，它们是一些无毒或毒性很小的染色剂，能使细胞，它们是一些无毒或毒性很小的染色剂，能使细胞中某些特定结构着色。活体染料基本上不影响或胞中某些特定结构着色。活体染料基本上不影响或很少影响细胞的生命活动。很少影响细胞的生命活动。实验原理实验原理l活体染色的机制是染料的堆集。利用染料的活体染色的机制是染料的堆集。利用染料的“电化学电化学”特性起作用。由于染料特性起作用。由于染料(碱性
3、染料碱性染料)的胶粒表面带有阳的胶粒表面带有阳离子，酸性染料的胶粒表面带阴离子，而被染部分本离子，酸性染料的胶粒表面带阴离子，而被染部分本身具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间发生吸身具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间发生吸引作用，染料就被堆集下来。引作用，染料就被堆集下来。l活体染料多为碱性染料活体染料多为碱性染料,如中性红、詹纳斯绿如中性红、詹纳斯绿B、次甲、次甲基蓝、甲苯胶蓝、亮焦油紫等。活体染料一般具有专基蓝、甲苯胶蓝、亮焦油紫等。活体染料一般具有专一性，例如，中性红染液泡，詹纳斯绿染线粒体。如一性，例如，中性红染液泡，詹纳斯绿染线粒体。如中性红为弱碱性染料，对液泡中性红为弱碱性
4、染料，对液泡(高尔基体高尔基体)的染色有专的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能与液泡中某些蛋白质有关。胞质完全不着色，这可能与液泡中某些蛋白质有关。詹纳斯绿可专一性地对对线粒体进行活染詹纳斯绿可专一性地对对线粒体进行活染,这是由这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态保持氧化状态(即有色状态即有色状态)，呈蓝绿色。，呈蓝绿色。材材 料料 l人口腔上皮细胞人口腔上皮细胞 试试 剂剂 l（1）Ringer溶液：在溶液：在100mL蒸馏水中分别
5、溶解蒸馏水中分别溶解氯化钠氯化钠0.85g(变温动物用变温动物用0.65g)、氯化钾和氯化、氯化钾和氯化钙钙l（2）1/5000詹纳斯绿詹纳斯绿B溶液：先称取詹纳斯绿溶液：先称取詹纳斯绿B用用Ringer液配液配1%原液保存，取其原液保存，取其1mL加入加入49mL Ringer溶液，即成溶液，即成1/5000溶液，装入瓶中备用。溶液，装入瓶中备用。最好现配现用，以保持充分的氧化能力。最好现配现用，以保持充分的氧化能力。器器 具具l显微镜，恒温水浴锅，载玻片，盖玻片，牙签，显微镜，恒温水浴锅，载玻片，盖玻片，牙签，吸水纸等。吸水纸等。实验步骤实验步骤（1）取）取2滴滴1/5000詹纳斯绿詹纳斯
6、绿B溶液于清洁的载玻片上。溶液于清洁的载玻片上。（2）用牙签宽头端在自己的口腔颊黏膜处稍用力刮）用牙签宽头端在自己的口腔颊黏膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的黏液状物放到染液滴中，载取上皮细胞，将刮下的黏液状物放到染液滴中，载玻片放在玻片放在37恒温水浴锅的金属板上染色恒温水浴锅的金属板上染色15min(注注意不可使染液干燥，必要时可再滴加意不可使染液干燥，必要时可再滴加1滴染液滴染液)，盖，盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液。上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液。(3)置显微镜下观察线粒体。置显微镜下观察线粒体。作作 业业l1、绘制口腔上皮细胞线粒体形态与分布。、绘制口腔上皮细胞线粒体形态与分布。