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1、实验七、线粒体的活体染色和观察实验七、线粒体的活体染色和观察盛军庆南昌大学生命科学与食品工程学院实验七、线粒体的活体染色和观察实验七、线粒体的活体染色和观察一、实验目的：了解线粒体在细胞中的分布及形态、掌握研究方法。二、实验原理：健纳绿B（Janus Green B）对线粒体具有专一性染色、毒性最小的碱性染料，由于线粒体中细胞色素酶系的作用，使它始终保持氧化状态，并呈现蓝绿色，在线粒体周围的细胞质中的染料被还原为无色的色基。三、实验材料：常规解剖器、大白鼠肝细胞四、步骤及方法1、鼠肝边沿较薄组织小块，放入盛有Ringer氏液的培养皿内，洗去血液。2、将1/5000Janus Green B 染
2、液倒入另一培养皿中，将肝组织移入其内，但不可将组织块完全淹没，要让组织上面部分半裸露在染液外面，这样，细胞内的线粒体的酶系可充分得到氧化，线粒体才易染色，一般染30-40分钟（组织块边缘染成蓝绿色即可）。3、染色后，用两根解剖针，同时用左右两手，用一手的针压住组织块，然后用另一手的针稍稍用力拉肝组织块边缘，就会有一些细胞或细胞群和组织块分离。4、用吸管将分离的细胞吸起，放在载玻片中央的Ringer氏液中。垫两根头发，盖上盖玻片，液体不要太多。5、油镜观察：观察时，不断地上下微调节螺旋，使盖玻片上下稍稍移动，这样所观察到的材料总得到充足的氧气，线粒体的染色才显示得非常清楚。6、结果：油镜下，可见肝细胞质中线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状或线条状，在细胞核周围分布得特别多。1、Ringer氏溶液的配方：NaCl 8.5/6.5克 CaCl2 0.12克 重碳酸钠 0.2克 氯化钾 0.14克 磷酸氢二钠 0.01克 葡萄糖 2.0克 水 1000ml2、1%1/5000浓度的健那绿B染液 称取0.5克Janus Green B溶于50mlRinger氏溶液中，微热（30-40）使之很快溶解。用滤纸过滤后即为1%原液。取1%原液1ml加入49mlRinger氏液中，即成1/5000工作液。装入滴瓶中备用。