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1、疾病的基因治疗现在学习的是第1页，共54页基因治疗几个发展时期基因治疗几个发展时期1980-1989准备期准备期技术、宗教，伦理，法律技术、宗教，伦理，法律1990-1995 狂热期狂热期公众，媒体公众，媒体1996-至今至今 理性期理性期出现临床结果出现临床结果现在学习的是第2页，共54页人体基因治疗是一个多环节的复杂过程人体基因治疗是一个多环节的复杂过程基因导入靶器官、靶组织、靶细胞间的交流基因导入靶器官、靶组织、靶细胞间的交流基因表达水平和时空调控基因表达水平和时空调控基因表达产物生物活性基因表达产物生物活性载体安全性载体安全性还存在许多迷惑和问题还存在许多迷惑和问题现在学习的是第3页，
2、共54页早期期望值过高，目前理论研究和技术的早期期望值过高，目前理论研究和技术的发展水平均还不能满足成功临床试验的需要，发展水平均还不能满足成功临床试验的需要，安全性问题还一直没有彻底解决。然而，目安全性问题还一直没有彻底解决。然而，目前对许多疾病分子机制和对基因载体的研究前对许多疾病分子机制和对基因载体的研究取得了长足的进步，为基因治疗较大范围临取得了长足的进步，为基因治疗较大范围临床试验开展打下了坚实的基础。床试验开展打下了坚实的基础。现在学习的是第4页，共54页选择选择在治疗上合适的基因在治疗上合适的基因已知其在某已知其在某特定疾病中的病理、生理作用特定疾病中的病理、生理作用适当的基因导
3、入系统适当的基因导入系统病毒或非病毒病毒或非病毒载体载体临床前试验的有效性和安全性评价临床前试验的有效性和安全性评价临床实验的有效性检测手段临床实验的有效性检测手段现在学习的是第5页，共54页一、基因治疗主要病种：一、基因治疗主要病种：主要为对人类健康威胁严主要为对人类健康威胁严重的疾病。包括：遗传病（如血重的疾病。包括：遗传病（如血友病、囊性纤维病、家庭性高胆友病、囊性纤维病、家庭性高胆固醇血症等）、恶性肿瘤、心血固醇血症等）、恶性肿瘤、心血管疾病、感染性疾病（如管疾病、感染性疾病（如AIDSAIDS、类风湿等）类风湿等）。现在学习的是第6页，共54页aaaaaaClassicalSGTmo
4、delsandstrategiesadditionalpopularandemergingexamples:MorbusGaucher,MorbusParkinson,CriglerNjiar,OTCdeficiency,DuchennesMD,Restenosiscontrol现在学习的是第7页，共54页二、遗传病基因治疗二、遗传病基因治疗1.第一个基因治疗的遗传病第一个基因治疗的遗传病(1990):腺苷脱氨酶（腺苷脱氨酶（ADA）缺乏症。）缺乏症。ADA缺乏症是一种罕见的遗传病，患者缺乏症是一种罕见的遗传病，患者ADA基因缺陷，不能产生功能性基因缺陷，不能产生功能性ADA酶。酶。ADA缺乏
5、的孩子一出生就有严重的免疫缺乏的孩子一出生就有严重的免疫缺陷，十分容易受感染，需要在几乎无缺陷，十分容易受感染，需要在几乎无菌的环境中生存。菌的环境中生存。ADA缺乏症能用缺乏症能用PEG-ADA治疗，但这种药物十分昂贵治疗，但这种药物十分昂贵（60,000美元美元/年），而且必须通过持续年），而且必须通过持续静脉注射来维持疗效。静脉注射来维持疗效。现在学习的是第8页，共54页ADAADA缺乏症被选为第一个基因治疗试验有以缺乏症被选为第一个基因治疗试验有以下几点原因：下几点原因：单基因遗传病，功能清晰，基因小单基因遗传病，功能清晰，基因小基因调控简单，只要基因调控简单，只要“开启开启”状态状态
6、ADAADA酶量无需精确调控：很少量的酶也可酶量无需精确调控：很少量的酶也可使患者受益，酶量很多也能耐受。使患者受益，酶量很多也能耐受。现在学习的是第9页，共54页2 2、血友病、血友病B B基因治疗的实践与发展基因治疗的实践与发展 血友病血友病B B（Hemophilia BHemophilia B）是一种由于凝血因子是一种由于凝血因子IXIX基因基因（hFIXhFIX）发生突变而引起的出血）发生突变而引起的出血性疾病。其症状表现为自发性出性疾病。其症状表现为自发性出血，严重者可因关节出血导致关血，严重者可因关节出血导致关节变形和残废甚至死亡。该病为节变形和残废甚至死亡。该病为X X染色体连
7、锁，在男性中发病率大染色体连锁，在男性中发病率大约为约为1/100,0001/100,000。现在学习的是第10页，共54页血友病目前的临床治疗方法：血友病目前的临床治疗方法：蛋白替代法：输血、输凝血酶原、注射重组蛋白替代法：输血、输凝血酶原、注射重组FVIII，FIX，能有效地改善出血症状和延长生命，但，能有效地改善出血症状和延长生命，但是昂贵，且存在感染是昂贵，且存在感染HIV，HBV（乙肝），（乙肝），HCV（丙肝）风险（丙肝）风险现在学习的是第11页，共54页蛋白替代法可导致抑制物产生，从而使治疗失效蛋白替代法可导致抑制物产生，从而使治疗失效血友病血友病A有有10-40%的人群产生抑制
8、物的人群产生抑制物血友病血友病B有有5%的人群产生抑制物的人群产生抑制物这也是我们把治疗的目光投在比蛋白替代法可能更优越的这也是我们把治疗的目光投在比蛋白替代法可能更优越的基因治疗的原因之一！基因治疗的原因之一！现在学习的是第12页，共54页血友病是目前血友病是目前SGT最有希望达到最有希望达到理想疗效的遗传病病种理想疗效的遗传病病种现行血友病现行血友病B治疗手段、效果不理想治疗手段、效果不理想单基因遗传病单基因遗传病不需要精确的表达调控，无需所有细胞表达不需要精确的表达调控，无需所有细胞表达表达广谱表达广谱理想的动物模型（二个狗品系，理想的动物模型（二个狗品系，3个小鼠品系）个小鼠品系）疗效
9、易于评价疗效易于评价血友病血友病A：100-200ng/ml血友病血友病B:5000ng/ml现在学习的是第13页，共54页血友病血友病B基因治疗靶细胞选择基因治疗靶细胞选择exvivo:Invivo:皮肤成纤维细胞皮肤成纤维细胞 直接、连续注射直接、连续注射角质细胞角质细胞内皮细胞内皮细胞上皮细胞上皮细胞成肌细胞成肌细胞造血干细胞造血干细胞骨髓基质细胞骨髓基质细胞支持细胞支持细胞现在学习的是第14页，共54页尽管人体天然的尽管人体天然的FVIII和和FIX都是由肝都是由肝细胞产生的。然而，实验证明，由非肝细细胞产生的。然而，实验证明，由非肝细胞如胞如CHO产生的重组凝血因子与人体天然产生的重
10、组凝血因子与人体天然的凝血因子在活性和免疫原性上没有差别，的凝血因子在活性和免疫原性上没有差别，到目前为止没有发现非肝细胞产生的凝血到目前为止没有发现非肝细胞产生的凝血因子有不同寻常的翻译后修饰。因子有不同寻常的翻译后修饰。因此，肝细胞不一定是血友病基因治因此，肝细胞不一定是血友病基因治疗必然的靶细胞。疗必然的靶细胞。现在学习的是第15页，共54页1 1）19911991年，复旦大学反转录病毒介导年，复旦大学反转录病毒介导的的ex vivoex vivo途径临床试验取得了安全途径临床试验取得了安全有效的结果有效的结果现在学习的是第16页，共54页反转录病毒载体反转录病毒载体XLIX 5LTR
11、FIX cDNA Neo S Ori P Ori 3LTRN2CMVIX5LTR Neo CMV FIX cDNA 3LTR现在学习的是第17页，共54页现在学习的是第18页，共54页现在学习的是第19页，共54页现在学习的是第20页，共54页2）2003年，以年，以AAV-2/hFIX介导的直接介导的直接肌肉注射，基因治疗血友病肌肉注射，基因治疗血友病B方案已被批方案已被批准临床试验（国家药品监督管理局药物准临床试验（国家药品监督管理局药物临床批件，临床批件，2003L00403）现在学习的是第21页，共54页 ITR CMV hFIX minigene PA ITR ITR CMV mFI
12、X PA ITRpAVChFIXmpAVCmFIXpAVChFIXmR重组重组AAV载体载体 ITR CMV hFIX R338A PA ITR现在学习的是第22页，共54页TransientExpressionofpAAV-hFIXsinCellLines现在学习的是第23页，共54页In vitroExpressionofAAV/mFIXmFIX level(ng/106cells/24 h)现在学习的是第24页，共54页ExpressionofrAAV-hFIXR338AinMice:现在学习的是第25页，共54页ExpressionofmFIXinHemophiliaBMouse现在学
13、习的是第26页，共54页 血友病小鼠经血友病小鼠经rAAV基因治疗后基因治疗后,FIX凝血活性凝血活性提高提高,出血症状改善出血症状改善现在学习的是第27页，共54页3.240ulAPTT1007.550ulAPTT34BleedingAssay现在学习的是第28页，共54页采采用用Western Western dot-blotdot-blot分分析析表表明明，于于肌肌肉肉注注射射rAAV/hFIXrAAV/hFIX病病毒毒子子后后第第1515天天，小小鼠鼠血血液液中中即即开开始始出出现现抗抗hFIXhFIX抗抗体体，血血浆浆中中hFIXhFIX水水平平亦开始下降亦开始下降.经经Bethes
14、daBethesda分析分析,未发现抗小鼠未发现抗小鼠IXIX因子抗体因子抗体.0天天 3天天 15天天 27天天 39天天 阳性对照阳性对照抗抗IX因子抗体分析因子抗体分析现在学习的是第29页，共54页肌注肌注FIX后，抗体在后，抗体在7天后开始明显增加，天后开始明显增加，15天时达到最天时达到最高，约为正常对照的高，约为正常对照的8倍左右，到倍左右，到60天时抗体的量开始减天时抗体的量开始减少，为正常对照的少，为正常对照的5倍，此后到倍，此后到120天，抗体的量基本不天，抗体的量基本不变。变。抗抗AAV抗体检测抗体检测现在学习的是第30页，共54页建立了复制型建立了复制型AAV病毒检测的巢
15、式病毒检测的巢式PCR方法以及方法以及HSV病毒检测方法病毒检测方法,提高了灵敏度。提高了灵敏度。研究了肌肉注射重组研究了肌肉注射重组AAV在体内的分布，分散程度与在体内的分布，分散程度与注射剂量成比例，主要分布在注射肌肉组织注射剂量成比例，主要分布在注射肌肉组织,经过半定经过半定量量PCR发现肌肉中的载体数是其它组织的发现肌肉中的载体数是其它组织的1,00010,000倍。倍。鼠类使用鼠类使用AAV毒性研究毒性研究,病毒注射后血浆没有发现病毒注射后血浆没有发现血清肌氨酸激酶水平的上升，体重没有改变，未见血清肌氨酸激酶水平的上升，体重没有改变，未见血清的化学参数或血液参数的改变。仅发现少量由血
16、清的化学参数或血液参数的改变。仅发现少量由淋巴细胞浸润导致的感染淋巴细胞浸润导致的感染,无结构改变。无结构改变。安全性安全性现在学习的是第31页，共54页以高剂量以高剂量AAV病毒肌肉注射老鼠试验中，病毒肌肉注射老鼠试验中，未引起组织毒性未引起组织毒性,所有动物脾大小正常，未所有动物脾大小正常，未发现囊泡区的增生。在注射区的骨骼肌仅有发现囊泡区的增生。在注射区的骨骼肌仅有中等或轻微的慢性感染，感染仅限于肌束膜中等或轻微的慢性感染，感染仅限于肌束膜组织，无肌肉纤维解剖学上的改变。组织，无肌肉纤维解剖学上的改变。rAAV注射后注射后,小鼠体内小鼠体内AAV抗体滴度增高抗体滴度增高.rAAV病毒随机
17、整合问题病毒随机整合问题现在学习的是第32页，共54页现在学习的是第33页，共54页3）以其他载体系统进行血友病）以其他载体系统进行血友病B基因治疗基因治疗微小腺病毒载体介导微小腺病毒载体介导hFIX小基因离体表达小基因离体表达ELISA方法检测微小腺病毒方法检测微小腺病毒(miniAd)及第一代腺病毒及第一代腺病毒(firstAd)介导介导cFIX在血友病在血友病B小鼠血小鼠血浆中的表达浆中的表达现在学习的是第34页，共54页VSVG假型假型RV介导的介导的hFIXcDNA在血友病在血友病B小鼠中的基因治小鼠中的基因治疗疗VSVG假型假型RV滴度高，与传统滴度高，与传统RV比较抗补体灭活效应
18、高，不同剂比较抗补体灭活效应高，不同剂量病毒上清液腹腔注射新生血友病量病毒上清液腹腔注射新生血友病B小鼠，小鼠凝血功能改善，凝血活小鼠，小鼠凝血功能改善，凝血活性提高性提高3%以上，表达持续以上，表达持续120d以上。以上。现在学习的是第35页，共54页重组慢病毒载体介导人凝血重组慢病毒载体介导人凝血IX因子的表达及宫内基因治疗因子的表达及宫内基因治疗重组慢病毒载体重组慢病毒载体FUXWFAXW感染离体细胞感染离体细胞293T、L-02、BHK72h后的后的hFIX蛋白表达蛋白表达重组重组FAXW.FUXW病毒在血友病病毒在血友病B小鼠体内表达小鼠体内表达hFIX的时效曲线的时效曲线HIV是基
19、因组结构及基因调节是基因组结构及基因调节机制最为复杂的逆转录病毒之机制最为复杂的逆转录病毒之一一,基于基于HIV的重组反转录病的重组反转录病毒载体，能广泛感染各种非分毒载体，能广泛感染各种非分裂细胞裂细胞,也保留了能够整合在也保留了能够整合在宿主染色体上的特点宿主染色体上的特点.且免疫且免疫反应小反应小,重组重组HIV是一个很有是一个很有发展潜力的病毒载体发展潜力的病毒载体ABP肝特异性启动子肝特异性启动子指导人的凝血因子指导人的凝血因子IX的重组的重组HIV载体：重组载体：重组慢病毒载体质慢病毒载体质FUXW,FAXWD等等现在学习的是第36页，共54页宫内胎鼠基因治疗现在学习的是第37页，
20、共54页非病毒途径导入基因：尾静脉大容量快速注射法非病毒途径导入基因：尾静脉大容量快速注射法尾静脉大容量快速注射裸尾静脉大容量快速注射裸DNA能够介导外源基因在动物肝内高效表达，能够介导外源基因在动物肝内高效表达，我们以凝血因子我们以凝血因子（hF）为报告基因建立了尾静脉液压法裸质粒转移）为报告基因建立了尾静脉液压法裸质粒转移体系。体系。人人F在小鼠体内的表达在小鼠体内的表达小鼠尾静脉大容量快速注射小鼠尾静脉大容量快速注射10gCMV-hFIX质粒质粒DNA()，注射后不同时间采，注射后不同时间采血，通过血，通过ELISA检测血浆中检测血浆中hF的水平。的水平。示示Ringers液注射组。液注
21、射组。现在学习的是第38页，共54页血友病基因治疗进展与展望血友病基因治疗进展与展望进展进展展望展望新的新的AAV血清型血清型和慢病毒载体已成功和慢病毒载体已成功改进慢病毒改进慢病毒,gutlessAd和不同血清和不同血清用于用于FVIII、FIX生产研究生产研究型型AAV正在开展正在开展除了肝脏外，其他器官也可以用于产生除了肝脏外，其他器官也可以用于产生基因修复、基因修复、RNA修复（修复（Trans-FVIII、FIXslicing）提供新的方案设计思路）提供新的方案设计思路内源性因子合成和病毒载体引起的免疫内源性因子合成和病毒载体引起的免疫以外周内皮源细胞实施基因修饰的反应是血友病基以外
22、周内皮源细胞实施基因修饰的反应是血友病基因转移的潜在威胁因转移的潜在威胁可能具有发展前景可能具有发展前景血友病临床试验正在开展血友病临床试验正在开展以干细胞治疗实施的基因修饰将成以干细胞治疗实施的基因修饰将成（RV，AAV，或，或exvivo皮肤成纤维皮肤成纤维为可能为可能细胞细胞）现在学习的是第39页，共54页4）总结）总结血友病基因治疗需要安全、有效、无免疫原性的转移系统，血友病基因治疗需要安全、有效、无免疫原性的转移系统，并要求持续表达，且必须优于蛋白替代法。并要求持续表达，且必须优于蛋白替代法。血友病具有很好的的动物模型血友病具有很好的的动物模型,HemA,HemB均有均有小鼠和狗模型
23、，能模小鼠和狗模型，能模拟、预测临床症状、评价有效性和安全性，有助于临床前制定策略。拟、预测临床症状、评价有效性和安全性，有助于临床前制定策略。目前已开展病毒和非病毒转移系统研究，病毒的工作占多数，但非病毒目前已开展病毒和非病毒转移系统研究，病毒的工作占多数，但非病毒系统的工作可能更具魅力：系统的工作可能更具魅力：可在无细胞系统中装配可在无细胞系统中装配免疫原性小免疫原性小杂合非病毒载体系统杂合非病毒载体系统将病毒某些成分加入系统，以提高基因转移效率，对血友病基将病毒某些成分加入系统，以提高基因转移效率，对血友病基因治疗很有吸引力因治疗很有吸引力现在学习的是第40页，共54页三、肿瘤的基因治疗
24、三、肿瘤的基因治疗目前，进入临床试验的基因疗法有目前，进入临床试验的基因疗法有70%是针对是针对癌症的，虽然大多数尚未被肯定疗效，但代表了癌症的，虽然大多数尚未被肯定疗效，但代表了癌症治疗的方向。癌症治疗的方向。恶性肿瘤基因治疗方案中，所用的治疗基因恶性肿瘤基因治疗方案中，所用的治疗基因大致可归为三类：细胞因子类；杀伤性基因类，大致可归为三类：细胞因子类；杀伤性基因类，以疱疹病毒以疱疹病毒I型胸苷嘧啶激酶（型胸苷嘧啶激酶（HSV/TK）为代）为代表；以表；以p53为代表的抑癌基因及反义癌基因类。为代表的抑癌基因及反义癌基因类。现在学习的是第41页，共54页2003年年10月月16日，全世界第一
25、个基因治疗日，全世界第一个基因治疗药物药物p53腺病毒注射液由中国国家药品监腺病毒注射液由中国国家药品监督管理局颁发新药证书！督管理局颁发新药证书！现在学习的是第42页，共54页常见癌症治疗方案常见癌症治疗方案外源性基因替补疗法外源性基因替补疗法输注外源性抑癌基因输注外源性抑癌基因p53可抑制或杀灭癌细胞。可抑制或杀灭癌细胞。抗原基因导入疗法抗原基因导入疗法将组织相容复合体将组织相容复合体MHC基因转移给肿瘤细胞，基因转移给肿瘤细胞，MHCII型分型分子在肿瘤细胞表面大量表达，与肿瘤抗原结合形成复合抗原，子在肿瘤细胞表面大量表达，与肿瘤抗原结合形成复合抗原，从而暴露出从而暴露出“靶点靶点”被免
26、疫细胞识别和消灭被免疫细胞识别和消灭现在学习的是第43页，共54页反义基因疗法反义基因疗法以癌基因以癌基因DNA的有义链为模板合成出反义链，将其转入肿的有义链为模板合成出反义链，将其转入肿瘤细胞内，形成的双链核酸阻断癌基因表达和癌细胞增殖。瘤细胞内，形成的双链核酸阻断癌基因表达和癌细胞增殖。自杀基因疗法自杀基因疗法将自杀基因（又称前药转换酶基因如胸苷激酶将自杀基因（又称前药转换酶基因如胸苷激酶tk基因和基因和胞嘧啶脱氨酶胞嘧啶脱氨酶CD基因等基因等）,导入癌细胞内，使癌细胞死亡。导入癌细胞内，使癌细胞死亡。细胞因子基因导入疗法细胞因子基因导入疗法将白细胞介素将白细胞介素II、干扰素、肿瘤坏死因
27、子等细胞因子基因导入、干扰素、肿瘤坏死因子等细胞因子基因导入肿瘤细胞内，所产生的细胞因子可引起癌细胞死亡；也可将这些肿瘤细胞内，所产生的细胞因子可引起癌细胞死亡；也可将这些细胞因子基因导入肿瘤组织中淋巴细胞内，增强这些细胞的抗癌细胞因子基因导入肿瘤组织中淋巴细胞内，增强这些细胞的抗癌作用。作用。现在学习的是第44页，共54页我们的部分工作我们的部分工作腺病毒载体介导的腺病毒载体介导的TK/ACV对大鼠脑胶质瘤离体对大鼠脑胶质瘤离体/活体的杀伤作用活体的杀伤作用现在学习的是第45页，共54页目前癌症基因治疗的研究大多是在观察毒副反应目前癌症基因治疗的研究大多是在观察毒副反应为主的为主的期临床试验
28、，极少数进入期临床试验，极少数进入/期临床试验，期临床试验，结果有待进一步观察。目前的临床研究进程很慢，这结果有待进一步观察。目前的临床研究进程很慢，这与癌症复杂的发病机制和有效载体的研发有关，虽然与癌症复杂的发病机制和有效载体的研发有关，虽然动物实验的结果不断涌现，但并不能完全代表人类，动物实验的结果不断涌现，但并不能完全代表人类，只有临床试验具有决定性的作用。就目前的研究成果只有临床试验具有决定性的作用。就目前的研究成果来看，基因治疗可能会在手术、放疗和化疗以外，成来看，基因治疗可能会在手术、放疗和化疗以外，成为一种新的肿瘤治疗手段，特别可能对提高化疗、放为一种新的肿瘤治疗手段，特别可能对
29、提高化疗、放疗的敏感性，减少肿瘤复发和转移等方面有一定的、疗的敏感性，减少肿瘤复发和转移等方面有一定的、甚至更为重要的作用，成为肿瘤综合治疗中的一个较甚至更为重要的作用，成为肿瘤综合治疗中的一个较为重要的组成部分。为重要的组成部分。现在学习的是第46页，共54页四、传染病的基因治疗四、传染病的基因治疗现在学习的是第47页，共54页（1）病毒性肝炎的基因治疗）病毒性肝炎的基因治疗病毒性肝炎基因治疗研究虽然取得了一系病毒性肝炎基因治疗研究虽然取得了一系列的进展，但是，由于病毒性肝炎的发病机制列的进展，但是，由于病毒性肝炎的发病机制还没有完全了解清楚，目前基因治疗在病毒性还没有完全了解清楚，目前基因
30、治疗在病毒性肝炎治疗中的应用远未达到最高水平。病毒性肝炎治疗中的应用远未达到最高水平。病毒性肝炎的基因治疗一方面取决于基因治疗技术本肝炎的基因治疗一方面取决于基因治疗技术本身发展的速度和状态，另一方面也取决于病毒身发展的速度和状态，另一方面也取决于病毒性肝炎发病机制本身研究的深入程度。性肝炎发病机制本身研究的深入程度。现在学习的是第48页，共54页病毒性肝炎基因治疗病毒性肝炎基因治疗最近部分工作最近部分工作XuRetal”MoleculartherapeuticsofHBV”CurrGeneTher.2003Aug;3(4):341-55.病毒学杂志病毒学杂志.2003Mar;17(1):81
31、-4.DingCLetal“ExpressionofHBcAgineukaryoticcellsbyretroviralvectormediatedgenetransfer”中华实验和临床病毒学，中华实验和临床病毒学，2003Mar;17(1):81-4.KleinCetal“InhibitionofhepatitisBvirusreplicationinvivobynucleosideanaloguesandsiRNA”Gastroenterology.2003Jul;125(1):9-18HanJQetal“ApproachtotransforminghepatitisBvirusasag
32、enetherapeuticvector”中华肝脏病杂志中华肝脏病杂志2003,Jun;11(6):344-6.现在学习的是第49页，共54页（2）AIDS基因治疗基因治疗-近期一些工作近期一些工作ZhangDetal:“OptimizationofexvivoactivationandexpansionofmacaqueprimaryCD4-enrichedperipheralbloodmononuclearcellsforuseinanti-HIVimmunotherapyandgenetherapystrategies”JAcquirImmuneDeficSyndr.20031;32(3
33、):245-54.AnanthalakshmiPolurietal“GenetictherapyforHIV/AIDS”ExpertOpiniononBiologicalTherapy.2003,vol.3,no.6,pp.951-963FanningGetal“GenetherapyforHIV/AIDS:thepotentialforanewtherapeuticregimen”JGeneMed.2003Aug;5(8):645-53AkkinaRetal“siRNAs,ribozymesandRNAdecoysinmodelingstemcell-basedgenetherapyforH
34、IV/AIDS”AnticancerRes.2003May-Jun;23(3A):1997-2005.现在学习的是第50页，共54页（3）SARS基因治疗基因治疗反义技术？反义技术？在在“反义反义”技术领域潜心耕耘了技术领域潜心耕耘了23载的载的AVI公司一直不为外界所知，直到公司一直不为外界所知，直到非典出现，该公司一鸣惊人。事实上，非典出现，该公司一鸣惊人。事实上，AVI公司只花了几天时间，就把对付田公司只花了几天时间，就把对付田鼠冠状病毒和企鹅西尼罗河病毒的鼠冠状病毒和企鹅西尼罗河病毒的“反义反义”技术技术“改造改造”成了对付非典病毒的成了对付非典病毒的武器。武器。是否成功有待证明是否成
35、功有待证明但是，一些专家对但是，一些专家对AVI公司成功对付非典的可能性表示怀疑。纽约阿尔公司成功对付非典的可能性表示怀疑。纽约阿尔伯特伯特爱因斯坦医学院的赛爱因斯坦医学院的赛斯滕博士说，他要看更多的数据。这位被称斯滕博士说，他要看更多的数据。这位被称为为“反义反义技术之父技术之父”的博士还强调，他的领域充满了失败，的博士还强调，他的领域充满了失败，“我们的我们的了解不多，（这一技术）实在太复杂了解不多，（这一技术）实在太复杂”。“反义反义”技术之复杂在于，一是它除了能切断有害基因及其编码的技术之复杂在于，一是它除了能切断有害基因及其编码的蛋白质之间的信号传播，也会影响与疾病没有关系的其它基因
36、和蛋白蛋白质之间的信号传播，也会影响与疾病没有关系的其它基因和蛋白质；二是它有可能最终被证实不能切断信号传播。质；二是它有可能最终被证实不能切断信号传播。现在学习的是第51页，共54页目前临床试验成功的例子目前临床试验成功的例子AAV-HemophiliaBTreatmentofcertaintypesofcancerusingconditionallyreplicatingoncolyticvirusesTreatmentofvascularandcoronaryarterydiseaseusingviralvectorsthatexpressangiogenicfactorsp53forc
37、ancertreatmentDNAvaccineforcancerandinfectiousdiseases现在学习的是第52页，共54页六、我国基因治疗成就和存在问题六、我国基因治疗成就和存在问题（一）成就：（一）成就：1991年复旦大学进行了国际首例血友病年复旦大学进行了国际首例血友病B基因治基因治疗临床实验疗临床实验2000年四川大学首先提出利用异种同源分子作肿年四川大学首先提出利用异种同源分子作肿瘤基因治疗的策略瘤基因治疗的策略2002年上海市肿瘤研究所设计的非病毒基因导入年上海市肿瘤研究所设计的非病毒基因导入系统获得美国专利系统获得美国专利2003年，世界上第一个基因治疗药物在中国诞
38、年，世界上第一个基因治疗药物在中国诞生生我国已有我国已有14个基因治疗方案进入临床试验个基因治疗方案进入临床试验现在学习的是第53页，共54页（二）存在问题：（二）存在问题：大多重复国外同类实验；大多重复国外同类实验；缺乏创新性，各自为政缺乏创新性，各自为政,规模小规模小,资金投入有限资金投入有限,缺缺乏中心的辐射作用；乏中心的辐射作用；一哄而上一哄而上,一哄而下一哄而下,缺乏基因治疗正确认识缺乏基因治疗正确认识.缺乏孵化和转化机制缺乏孵化和转化机制,更缺乏风险基金；更缺乏风险基金；基因治疗研究和相关研究如基因组学基因治疗研究和相关研究如基因组学,病毒学病毒学,免免疫学疫学,转基因动物转基因动物,临床医学的结合不够；临床医学的结合不够；初级初级人才流失人才流失,高级人才匮乏；高级人才匮乏；过于强调商业价值过于强调商业价值,忽视科学价值和样板作用忽视科学价值和样板作用现在学习的是第54页，共54页