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1、关于高效液相色谱法(4)第一页，讲稿共四十五页哦2022/9/27第一节第一节 概概 述述一、概述1 1、从、从GCGC的高速、高效和高灵敏度得到启发，的高速、高效和高灵敏度得到启发，2020世世纪纪7070年代迅速发展。年代迅速发展。不挥发的有机物约占四分之三以上。不挥发的有机物约占四分之三以上。2 2、8080年代以来，年代以来，HPLCHPLC飞跃飞跃 发展发展文献量文献量 21%（89年）年）仪器销售量仪器销售量 25%(12亿）（亿）（89年）年）应用领域应用领域 拓展：化工、环保、临床、药品、生拓展：化工、环保、临床、药品、生命等。命等。第二页，讲稿共四十五页哦2022/9/27
2、二、特点二、特点 1.高压：一般可达高压：一般可达15035010 5Pa。2.高速：一般可达高速：一般可达110 ml/min。3.高效：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。高效：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。4.高灵敏度：如荧光检测器灵敏度可达高灵敏度：如荧光检测器灵敏度可达10-11 g。另外，用样量小，。另外，用样量小，一般几个微升。一般几个微升。5.适应范围宽：适应范围宽：第三页，讲稿共四十五页哦2022/9/27三、三、HPLC与经典液相色谱与经典液相色谱主要区别：固定相差别，输液设备和检测手段主要区别：固定相差别，输液设备和检测手段1经典经典LC：仅做为
3、一种分离手段：仅做为一种分离手段 柱内径柱内径13cm，固定相粒径，固定相粒径100m 且不均匀且不均匀 常压输送流动相常压输送流动相 柱效低（柱效低（H，n）分析周期长分析周期长 无法在线检测无法在线检测2HPLC：分离和分析：分离和分析 柱内径柱内径26mm，固定相粒径，固定相粒径10m（球形，匀浆装柱）（球形，匀浆装柱）高压输送流动相高压输送流动相 柱效高（柱效高（H，n）分析时间大大缩短分析时间大大缩短 可以在线检测可以在线检测第四页，讲稿共四十五页哦2022/9/27四、四、HPLC与与GC相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测 主要差别：分
4、析对象的差别和流动相的差别主要差别：分析对象的差别和流动相的差别1分析对象分析对象 GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及 高聚物的样品不可检测高聚物的样品不可检测 占有机物的占有机物的20%HPLC：溶解后能制成溶液的样品，：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发性和热稳定性的限制不受样品挥发性和热稳定性的限制 分子量大、难气化、热稳定性差及高分子分子量大、难气化、热稳定性差及高分子 和离子型样品均可检测和离子型样品均可检测 用途广泛，占有机物的用途广泛，占有机物的80%第
5、五页，讲稿共四十五页哦2022/9/272流动相差别流动相差别GC：流动相为惰性气体流动相为惰性气体组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用 HPLC：流动相为液体：流动相为液体流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、改善分离度增加了因素，对分离起很大作用改善分离度增加了因素，对分离起很大作用流动相种类较多，选择余地广流动相种类较多，选择余地广流动相极性和流动相极性和pHpH值的选择也对分离起到重要作用值的选择也对分离起到重要作用 选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相选用不同比例的两种或两种以上液
6、体作为流动相 可以增大分离选择性可以增大分离选择性第六页，讲稿共四十五页哦2022/9/273操作条件差别操作条件差别 GC：加温操作：加温操作 HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小）：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小）第七页，讲稿共四十五页哦2022/9/27第二节第二节 高效液相色谱仪高效液相色谱仪 采用高压输液泵、高效固定相和高灵敏度检测器等装置的采用高压输液泵、高效固定相和高灵敏度检测器等装置的液相色谱仪称为高效液相色谱仪。液相色谱仪称为高效液相色谱仪。主要由高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、主要由高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、微机控制及数据处理系统组成。
7、微机控制及数据处理系统组成。第八页，讲稿共四十五页哦2022/9/27一、高压输液系统一、高压输液系统由储液灌、高压输液泵、梯度洗脱装置等部件组成，其中由储液灌、高压输液泵、梯度洗脱装置等部件组成，其中核心部件核心部件为高压输液泵。为高压输液泵。1.1.储储液灌液灌用于存放溶剂，一般由不锈钢、玻璃或聚四氟乙烯衬里为材料，用于存放溶剂，一般由不锈钢、玻璃或聚四氟乙烯衬里为材料，容积一般为容积一般为0.5 2 L。溶剂使用前必须进行脱气。溶剂使用前必须进行脱气。2.2.高高压输压输液液泵泵高压输液泵是高效液相色谱仪的重要部件，它将流动相输入到柱系统，高压输液泵是高效液相色谱仪的重要部件，它将流动相
8、输入到柱系统，使试样在柱系统中完成分离过程。使试样在柱系统中完成分离过程。输液泵应具备：恒定流量、足够的输送压力、能抗溶剂、耐酸、耐输液泵应具备：恒定流量、足够的输送压力、能抗溶剂、耐酸、耐碱腐蚀和小的死体积。碱腐蚀和小的死体积。第九页，讲稿共四十五页哦2022/9/27(1)往复式柱塞泵 恒流泵恒流泵 第十页，讲稿共四十五页哦2022/9/27(2)(2)气动放大泵气动放大泵 恒压泵恒压泵第十一页，讲稿共四十五页哦2022/9/27 2.梯度淋洗装置 梯度洗提，就是载液中含有两种（或更多）不同极性的溶剂，在分离过程中梯度洗提，就是载液中含有两种（或更多）不同极性的溶剂，在分离过程中按一定的程
9、序连续改变载液中溶剂的配比和极性，通过载液中极性的变化来改变按一定的程序连续改变载液中溶剂的配比和极性，通过载液中极性的变化来改变被分离组分的分离因素，以提高分离效果。被分离组分的分离因素，以提高分离效果。梯度洗提可以分为两种：梯度洗提可以分为两种：a.低压梯度（也叫外梯度）低压梯度（也叫外梯度）：在常在常压下，预先按一定程序将两种或多压下，预先按一定程序将两种或多种不同极性的溶剂混合后，再用一种不同极性的溶剂混合后，再用一台高压泵输入色谱柱。台高压泵输入色谱柱。第十二页，讲稿共四十五页哦2022/9/27b.高压梯度高压梯度(或称内梯度系统或称内梯度系统)：利用两台高压输液泵，将两种利用两台
10、高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按按设定的比例送入梯度混合室，混合后，不同极性的溶剂按按设定的比例送入梯度混合室，混合后，进入色谱柱。进入色谱柱。第十三页，讲稿共四十五页哦2022/9/27二、进样系统二、进样系统(1)注射器进样装置：注射器进样装置：进样所用微量注射器及进样方式与进样所用微量注射器及进样方式与 GC法一法一样。进样压力样。进样压力150105Pa时，必须采用停流进样时，必须采用停流进样（无法取得精确保留时间，峰型差）。（无法取得精确保留时间，峰型差）。(2)高压定量进样阀：高压定量进样阀：与与GC法用的六通阀相似，能法用的六通阀相似，能在高压下进样。其结构如图在高压下进样。其
11、结构如图所示：所示：第十四页，讲稿共四十五页哦2022/9/27三、分离系统三、分离系统色谱柱是整个色谱系统的心脏，它的质量优劣直接影响分离效果。色谱柱是整个色谱系统的心脏，它的质量优劣直接影响分离效果。液相色谱柱的分离效能，主要取决于柱填料的性能，作为高效液相液相色谱柱的分离效能，主要取决于柱填料的性能，作为高效液相色谱法的固定相必须具有粒径较小且分布均匀、机械强度高耐压、色谱法的固定相必须具有粒径较小且分布均匀、机械强度高耐压、传质速度快及化学性质稳定等特点。传质速度快及化学性质稳定等特点。第十五页，讲稿共四十五页哦2022/9/27四、检测系统四、检测系统 检测器是高效液相色谱仪的三大关
12、键部件之一，其作用是将色谱检测器是高效液相色谱仪的三大关键部件之一，其作用是将色谱洗脱液中组分的量或浓度转变为电信号的大小，用于定性和定量分析。洗脱液中组分的量或浓度转变为电信号的大小，用于定性和定量分析。1.紫外光度检测器 是一种选择型浓度型检测器，它的作用原理是基于被分析试样组分是一种选择型浓度型检测器，它的作用原理是基于被分析试样组分对特定波长紫外线的选择性吸收，组分浓度与吸光度的关系遵守比尔定对特定波长紫外线的选择性吸收，组分浓度与吸光度的关系遵守比尔定律。律。特点：特点：a.灵敏度高；灵敏度高；b.线性范围宽；线性范围宽；c.流通池可做的很小（流通池可做的很小（1mm 10mm，容积
13、，容积 8L）；）；d.对流动相的流速和温度变化不敏感对流动相的流速和温度变化不敏感,可用于梯度洗脱；可用于梯度洗脱；e.波长可选波长可选,易于操作。易于操作。第十六页，讲稿共四十五页哦2022/9/27缺点:对紫外光完全不吸收的试样不能检测；同时溶剂的选择受到限制。对紫外光完全不吸收的试样不能检测；同时溶剂的选择受到限制。第十七页，讲稿共四十五页哦2022/9/272.光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器 紫紫外外检检测测器器的的重重要要进进展展；阵阵列列由由1024个个光光电电二二极极管管阵阵列列，各各检检测测一一窄段波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。窄段波长，计算机快速处
14、理，三维立体谱图，如图所示。第十八页，讲稿共四十五页哦2022/9/27第十九页，讲稿共四十五页哦2022/9/27第二十页，讲稿共四十五页哦2022/9/273.荧光检测器荧光检测器 高灵敏度、高选择性；高灵敏度、高选择性；对对多多环环芳芳烃烃，维维生生素素B、黄黄曲曲霉霉素素、卟卟啉啉类类化化合合物物、农农药药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应；药物、氨基酸、甾类化合物等有响应；第二十一页，讲稿共四十五页哦2022/9/27 4.示差折光检测器示差折光检测器 除紫外检测器之外应用最多的检测器；除紫外检测器之外应用最多的检测器；可可连连续续检检测测参参比比池池和和样样品品池池中中流流动动相相
15、之之间间的的折折光光指指数数差差值值。差差值值与与浓浓度度呈正比。呈正比。通通用用型型检检测测器器（每每种种物物质质具具有有不不同同的的折折光光指指数数）；）；灵灵敏敏度度低低、对对温温度度敏感、不能用于梯度洗脱；敏感、不能用于梯度洗脱；偏偏转转式式、反反射射式式和和干干涉涉型三种；型三种；第二十二页，讲稿共四十五页哦2022/9/275.电化学检测器电化学检测器其作用原理是根据物质在某些介质中电离后所产生电导变化来测其作用原理是根据物质在某些介质中电离后所产生电导变化来测定电离物质含量。定电离物质含量。第二十三页，讲稿共四十五页哦2022/9/276.蒸发光散色检测器蒸发光散色检测器 是一种
16、通用型检测器，目前已广泛应用于检测糖类、表面是一种通用型检测器，目前已广泛应用于检测糖类、表面活性剂、聚合物和脂类等无紫外吸收或紫外吸收系数较小的物活性剂、聚合物和脂类等无紫外吸收或紫外吸收系数较小的物质。可以在没有标准品的情况下采用。质。可以在没有标准品的情况下采用。第二十四页，讲稿共四十五页哦2022/9/27第三节第三节 影响高效液相色谱峰扩展及色谱分离的因素影响高效液相色谱峰扩展及色谱分离的因素第二十五页，讲稿共四十五页哦2022/9/27一、液相色谱速率理论一、液相色谱速率理论影响色谱峰扩展因素影响色谱峰扩展因素第二十六页，讲稿共四十五页哦2022/9/27 提高柱效的途径：提高柱效
17、的途径：减小填料粒度以加快传质速率；提高柱内填料装填的均匀性。减小填料粒度以加快传质速率；提高柱内填料装填的均匀性。二、影响分离的因素二、影响分离的因素流速流速 由图可知，液相色谱由图可知，液相色谱H-u曲线与曲线与其相色谱不同，当流速大于其相色谱不同，当流速大于0.5 cm/s时，时，是一段斜率不大的直线，只是因为分子扩是一段斜率不大的直线，只是因为分子扩散相对散相对H值的影响可以忽略不计。在液相值的影响可以忽略不计。在液相色谱中，使用较高流速，柱效下降不明显，色谱中，使用较高流速，柱效下降不明显，有利于实现快速分离。有利于实现快速分离。第二十七页，讲稿共四十五页哦2022/9/27第四节第
18、四节 高效液相色谱法的主要类型及其分离原理高效液相色谱法的主要类型及其分离原理 根据分离机制的不同，高效液相色谱法可分为以下几种类型：根据分离机制的不同，高效液相色谱法可分为以下几种类型：液液色谱法及化学键合相色谱法、液固色谱法、离子交换色谱法和液液色谱法及化学键合相色谱法、液固色谱法、离子交换色谱法和空间排阻色谱法等。空间排阻色谱法等。一、液一、液液分配色谱法及化学键合相色谱液分配色谱法及化学键合相色谱 流动相和固定相都是液体。当试样进入色谱柱，溶质在两相间进行流动相和固定相都是液体。当试样进入色谱柱，溶质在两相间进行分配。达平衡时，服从于下式：分配。达平衡时，服从于下式：其中，其中，K是分
19、配系数，是分配系数，k为容量因子，为容量因子，Cs和和Cm分别是溶质分别是溶质在固定相和流动相中的浓度，在固定相和流动相中的浓度，Vm和和Vs分别为流动相和固定相的分别为流动相和固定相的体积。体积。第二十八页，讲稿共四十五页哦2022/9/27 a.正相液正相液液分配色谱法液分配色谱法:流动相的极性小于固定液的极性。流动相的极性小于固定液的极性。b.反相液反相液液分配色谱法液分配色谱法:流动相的极性大于固定液的极性。流动相的极性大于固定液的极性。c.液液液分配色谱法的缺点液分配色谱法的缺点：固定液在流动相中仍有微量溶：固定液在流动相中仍有微量溶解；流动相通过色谱柱时的机械冲击力，会造成固定液流
20、失。解；流动相通过色谱柱时的机械冲击力，会造成固定液流失。上世纪上世纪7070年代末发展的化学键合固定相，可克服上述缺点年代末发展的化学键合固定相，可克服上述缺点 应应用：用：液液-液分配色液分配色谱谱法既能分离极性化合物，又能分离非极性化合法既能分离极性化合物，又能分离非极性化合物，如物，如烷烃烷烃、烯烃烯烃、芳、芳烃烃、稠、稠环环、染料、甾族等化合物。它适用的、染料、甾族等化合物。它适用的试样类试样类型广，最合适同系物型广，最合适同系物组组分的分离。分的分离。第二十九页，讲稿共四十五页哦2022/9/27二、吸附色谱（液二、吸附色谱（液-固吸附色谱）固吸附色谱）流动相为液体，固定相为吸附剂
21、（如硅胶、氧化铝等）。这是根据流动相为液体，固定相为吸附剂（如硅胶、氧化铝等）。这是根据物质吸附作用的不同来进行分离的。物质吸附作用的不同来进行分离的。其作用机制是：当试样进入色谱柱时，溶质分子其作用机制是：当试样进入色谱柱时，溶质分子(X)和溶剂分子和溶剂分子(S)对吸附剂表对吸附剂表面活性中心发生竞争吸附（未进样时，所有的吸附剂活性中心吸附的是面活性中心发生竞争吸附（未进样时，所有的吸附剂活性中心吸附的是S），可表），可表示如下：示如下：Xm+nSa=Xa+nSm 式中：式中：Xm-流动相中的溶质分子；流动相中的溶质分子；Sa-固定相中的溶剂分子；固定相中的溶剂分子；Xa-固定相中的溶质分
22、子；固定相中的溶质分子；Sm-流动相中的溶剂分子。当吸附竞争反应达平衡时：流动相中的溶剂分子。当吸附竞争反应达平衡时：K=XaSmn/XmSa n 式中：式中：K为吸附平衡常数。为吸附平衡常数。K K与保留值关系与保留值关系？第三十页，讲稿共四十五页哦2022/9/27 应用及特点：应用及特点：液液-固色谱法适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样对固色谱法适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样对具有不同官能团的化合物和异构体具有较高的选择性。具有不同官能团的化合物和异构体具有较高的选择性。缺点：缺点：由于非线性等温吸附常引起拖尾现象。由于非线性等温吸附常引起拖尾现象。第三十一页，讲稿共四十五页
23、哦2022/9/27三、离子对色谱法三、离子对色谱法 离子对色谱法是将一种离子对色谱法是将一种 (或多种或多种 )与溶质分子电荷相反的离与溶质分子电荷相反的离子子 (称为对离子或反离子称为对离子或反离子 )加到流动相或固定相中，使其与溶质加到流动相或固定相中，使其与溶质离子结合形成疏水型离子对化合物，从而控制溶质离子的保留行为。离子结合形成疏水型离子对化合物，从而控制溶质离子的保留行为。其原理可用下式表示：其原理可用下式表示：X X+水相水相 +Y+Y-水相水相 =X=X+Y Y-有机相有机相 式中：式中：X X+水相水相 -流动相中待分离的有机离子）；流动相中待分离的有机离子）；Y Y-水相
24、水相 -流动相流动相中带相反电荷的对离子（如氢氧化四丁基铵、氢氧化十六烷基三甲中带相反电荷的对离子（如氢氧化四丁基铵、氢氧化十六烷基三甲铵等）；铵等）；X X+Y Y-有机相有机相-形成的离子对化合物。形成的离子对化合物。第三十二页，讲稿共四十五页哦2022/9/27 当达平衡时：当达平衡时：K KXYXY=X=X+Y Y-有机相有机相/X/X+水相水相YY-水相水相 根据定义，分配系数为：根据定义，分配系数为：D DX X=X=X+Y Y-有机相有机相/X/X+水相水相 =K KXYXY Y Y-水相水相 离子对色谱法离子对色谱法(特别是反相特别是反相)发解决了以往难以分离的混合发解决了以往
25、难以分离的混合物的分离问题，诸如酸、碱和离子、非离子混合物，特别是一些生物的分离问题，诸如酸、碱和离子、非离子混合物，特别是一些生化试样如核酸、核苷、生物碱以及药物等分离。化试样如核酸、核苷、生物碱以及药物等分离。第三十三页，讲稿共四十五页哦2022/9/27四、离子交换色谱法四、离子交换色谱法 IEC是以离子交换剂作为固定相。是以离子交换剂作为固定相。IEC是基于离子交换树脂上可电离的是基于离子交换树脂上可电离的离子与流动相中具有相同电荷的溶质离子进行可逆交换，依据这些离子以交离子与流动相中具有相同电荷的溶质离子进行可逆交换，依据这些离子以交换剂具有不同的亲和力而将它们分离。换剂具有不同的亲
26、和力而将它们分离。以阴离子交换剂为例，其交换过程可表示如下：以阴离子交换剂为例，其交换过程可表示如下：X-(溶剂中)+(树脂-R4N+Cl-)=(树脂-R4N+X-)+Cl-(溶剂中)当交换达平衡时：当交换达平衡时：KX=-R4N+X-Cl-/-R4N+Cl-X-分配系数为：分配系数为：DX=-R4N+X-/X-=KX-R4N+Cl-/Cl-讨论：讨论：DX与保留值的关系与保留值的关系第三十四页，讲稿共四十五页哦2022/9/27五、空间排阻色谱法五、空间排阻色谱法 以凝胶为固定相。凝胶是一种经过交联的、具有立体网状结构和不以凝胶为固定相。凝胶是一种经过交联的、具有立体网状结构和不同孔径（同孔
27、径（x nmx00 nm）的多聚体的通称。如葡聚糖凝胶、琼脂糖等软质凝的多聚体的通称。如葡聚糖凝胶、琼脂糖等软质凝胶；多孔硅胶、聚苯乙烯凝胶等硬质凝胶。胶；多孔硅胶、聚苯乙烯凝胶等硬质凝胶。机理：机理：当当试样进入凝胶色谱柱时，尺寸过大的分子完全不能渗透到胶孔中去而受试样进入凝胶色谱柱时，尺寸过大的分子完全不能渗透到胶孔中去而受到排阻，沿胶粒之间的间隙直接流出色谱柱，产生一个色谱峰；尺寸过小的分子可完全到排阻，沿胶粒之间的间隙直接流出色谱柱，产生一个色谱峰；尺寸过小的分子可完全渗透到胶孔中去，流动速度慢，最后流出色谱柱，产生一个色谱峰；中等尺寸的分子渗透到胶孔中去，流动速度慢，最后流出色谱柱，
28、产生一个色谱峰；中等尺寸的分子，以其大小的不同，可渗透到某些孔穴而不能进入另一些空穴，流出速度取决于分子尺，以其大小的不同，可渗透到某些孔穴而不能进入另一些空穴，流出速度取决于分子尺寸的大小寸的大小,按分子尺寸由大到小的顺序先后流出色谱柱，从而实现分离。按分子尺寸由大到小的顺序先后流出色谱柱，从而实现分离。应用：应用：适合分离分子量大的化合物（适合分离分子量大的化合物（100800,000)，只要相，只要相对对分子量相差大于分子量相差大于10%。第三十五页，讲稿共四十五页哦2022/9/27六、离子色谱法六、离子色谱法 原理原理原理原理：用离子交换树脂为固定相，电解质溶液为流动用离子交换树脂为
29、固定相，电解质溶液为流动相。相。以阴离子交换树脂以阴离子交换树脂(R-OH)作固定相，分离阴离子作固定相，分离阴离子(如如Br-)为例。当待测阴离子为例。当待测阴离子Br-随流动相随流动相(NaOH)进入色谱柱进入色谱柱时，发生如下交换反应时，发生如下交换反应(洗脱反应为交换反应的，的逆过洗脱反应为交换反应的，的逆过程程)：以以电导检测器电导检测器为通用检测器，为消除流动相中强为通用检测器，为消除流动相中强电解质背景离子对电导检测器的干扰，设置了电解质背景离子对电导检测器的干扰，设置了抑制柱抑制柱抑制柱抑制柱。试样组分在分离柱和抑制柱上的反应原理与离子交换色谱试样组分在分离柱和抑制柱上的反应原
30、理与离子交换色谱法相同。法相同。第三十六页，讲稿共四十五页哦2022/9/27第三十七页，讲稿共四十五页哦2022/9/27离子色谱具有以下优点：离子色谱具有以下优点：（1 1）分析速度快）分析速度快 可在数分钟内完成一个试样的分析；可在数分钟内完成一个试样的分析；（2 2）分离能力高）分离能力高 在在适适宜宜的的条条件件下下，可可使使常常见见的的各各种种阴阴离离子子混混合合物物分分离离；例例：使使用用双双柱柱法法，在在十十几几分分钟内，可使七种阴离子完全分离。钟内，可使七种阴离子完全分离。（3）分离混合阴离子的最有效方法）分离混合阴离子的最有效方法（4）仪器流路采用全塑件，玻璃柱，耐腐蚀）仪
31、器流路采用全塑件，玻璃柱，耐腐蚀第三十八页，讲稿共四十五页哦2022/9/27 离子色谱的应用离子色谱的应用阴离子分析阴离子分析:双柱；薄壳型阴离子交换树脂分离柱双柱；薄壳型阴离子交换树脂分离柱(3250mm),流动相：流动相：0.003molL-1 NaHCO3/0.0024 molL-1 Na2CO3，流量，流量138 mL/h 七种阴离子在七种阴离子在20分钟内基本上得到完全分离，各组分含量在分钟内基本上得到完全分离，各组分含量在350 ppm。离子色谱主要用于测定离子色谱主要用于测定各种离子的含量，特别各种离子的含量，特别适于测定适于测定水溶液中低水溶液中低浓度的阴离子。浓度的阴离子。
32、第三十九页，讲稿共四十五页哦2022/9/27第五节第五节 高效液相色谱法的应用高效液相色谱法的应用一、一、在生物化学和生物工程中的应用在生物化学和生物工程中的应用HPLC技术在生化领域的应用主要集中于两个方面：技术在生化领域的应用主要集中于两个方面：低分子量物质，如氨基酸、有机酸、有机胺、类固醇、卟啉、低分子量物质，如氨基酸、有机酸、有机胺、类固醇、卟啉、糖类、维生素等的分离和测定；糖类、维生素等的分离和测定；高分子量物质，如多肽、核糖核酸、蛋白质和酶（各种高分子量物质，如多肽、核糖核酸、蛋白质和酶（各种胰岛素、激素、细胞色素、干扰素等）的纯化、分离和测定。胰岛素、激素、细胞色素、干扰素等）
33、的纯化、分离和测定。第四十页，讲稿共四十五页哦2022/9/27二、在医药研究中的应用二、在医药研究中的应用 主要用于人工合成药物的纯化及成分的定性、定量主要用于人工合成药物的纯化及成分的定性、定量测定，中草药有效成分的分离、制备及纯度测定，临测定，中草药有效成分的分离、制备及纯度测定，临床医药研究中人体血液和体液中药物浓度、药物代谢床医药研究中人体血液和体液中药物浓度、药物代谢物的测定，新型高效手性药物中手性对映体含量的测物的测定，新型高效手性药物中手性对映体含量的测定等。定等。第四十一页，讲稿共四十五页哦2022/9/27三、在食品分析中的应用三、在食品分析中的应用主要应用于：主要应用于：
34、食品营养成分分析：蛋白质、氨基酸、糖类、色素、维生素、食品营养成分分析：蛋白质、氨基酸、糖类、色素、维生素、香料、有机酸（邻苯二甲酸、柠檬酸、苹果酸等）、有机胺、矿物质等；香料、有机酸（邻苯二甲酸、柠檬酸、苹果酸等）、有机胺、矿物质等；食品添加剂分析：甜味剂、防腐剂、着色剂（合成色素如食品添加剂分析：甜味剂、防腐剂、着色剂（合成色素如柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、亮蓝等）、抗氧化剂柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、亮蓝等）、抗氧化剂等；等；食品污染物分析：霉菌毒素（黄曲霉毒素、黄杆菌毒素、食品污染物分析：霉菌毒素（黄曲霉毒素、黄杆菌毒素、大肠杆菌毒素等）、微量元素、多环芳烃等。大肠
35、杆菌毒素等）、微量元素、多环芳烃等。第四十二页，讲稿共四十五页哦2022/9/27四、在环境污染分析中的应用四、在环境污染分析中的应用例如：环境中有机氯农药残留量分析例如：环境中有机氯农药残留量分析 固定相：薄壳型硅胶固定相：薄壳型硅胶(37 50 m)流动相：正己烷流动相：正己烷 流流 速：速：1.5 mL/min 色谱柱：色谱柱：50cm 2.5mm(内径内径)检测器：差示折光检测器检测器：差示折光检测器 可对水果、蔬菜中的农药可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析残留量进行分析。第四十三页，讲稿共四十五页哦2022/9/27五、在精细化工分析中的应用五、在精细化工分析中的应用例如：稠环芳烃的分析例如：稠环芳烃的分析 稠环芳烃多为致癌物质。稠环芳烃多为致癌物质。固定相：十八烷基硅烷化键合相固定相：十八烷基硅烷化键合相 流动相：流动相：20%甲醇甲醇-水水 100%甲醇甲醇 线性梯度淋洗，线性梯度淋洗，2%/min 流流 速：速：1mL/min 柱柱 温：温：50 C 柱柱 压：压：70 104 Pa 检测器：紫外检测器检测器：紫外检测器第四十四页，讲稿共四十五页哦2022/9/27感感谢谢大大家家观观看看第四十五页，讲稿共四十五页哦