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1、文件编号：ZL-SOP-CP-00900 第 7 页 共 7 页文件名：紫雪检验操作规程制定人：制定日期：分发份数：5审核人：审核日期：颁发部门：GMP办批准人：批准日期：生效日期：分发至：质量保证部、质监科、质量检验中心代号 C9品名 紫雪拼音 Zixue 规格每瓶装1.5g 处方依据 中国药典2000年版处方石膏 144g 寒水石 144g 滑石 144g 磁石 144g 玄参 48g 木香 15g 升麻 48g 甘草 24g 丁香 3g 芒硝(清制) 480g 硝石(精制) 96g 水牛角浓缩粉 9g 羚羊角 4.5g 麝香 3.6g 朱砂 96g 法定标准及标准依据 【制法】以上十六味
2、，石膏、寒水石、滑石砸成小块，加水煎水煮三次，玄参、木香、沉香、升麻、甘草、丁香用石膏等煎煮三次，合并煎液，滤过，滤液浓缩成膏；芒硝、硝石粉碎，兑入膏中，混匀，干燥，粉碎成中粉或细粉；羚羊角锉研成细粉；朱砂水飞成细粉；将水牛角浓缩粉、麝香研细，与上述粉末配研，过筛，混匀，即得。【性状】本品为棕红色至灰棕色的粉末；气芳香，味咸、微苦。检查方法：取本品10g，置白板上自然光下观察，颜色应符合规定；用舌尖少许样品，性味应符合规定。【鉴别】（1）取本品少量，加水适量，振摇，滤过。取滤液2ml，加等量硫酸，混匀，放冷，加新配制的硫酸亚铁试液使成两液层，两液接界处显棕色，另取滤液2ml，加氯化钡试液数滴，
3、即生成白色沉淀，此沉淀在盐酸及硝酸中均不溶解。加取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取滤液，置无色炎焰中燃烧，火焰显鲜黄色。（2）取本品5g，置索氏提取器中，加乙醚40ml，加热回流提取约1小时，挥去乙醚，残渣加环已烷2ml使溶解，作为供试品溶液。另取麝香酮对照品，加环已烷制成每1ml含0.02mg的溶液，作为对照品溶液。照气相色谱法（附录 E）试验，柱长2m，以聚乙二醇戊二酸酯为固定相，涂布浓度为1%，柱温为140。分别吸取对照品溶液和供试品溶液各25l，注入气相色谱仪。供试品应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。【检查】应符合散剂项下有关的各项规定（附录I B）均匀度取供试品适量置光滑纸上，平铺约5cm
4、2,将其表面压平，在亮处观察，应呈均匀的色泽，无花纹、色斑。水分取供试品照水分测定法（中国药典2000年版一部附录IXH）测定。不得过9.0%。检查方法：取本品粉末25g，平铺于干燥至恒重的扁形称瓶中，厚度不超过5mm，精密称定，打开瓶盖在100105干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30分钟，精密稳定重量，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算供试品的含水量(%)。装量差异装量差异限度：8%检查法：取供试品10瓶，分别称定每瓶内容物的重量，每瓶的重量与标示装量相比较，超出限度的不得多于2瓶，并不得有1瓶超出限度一倍。生物限度检查
5、 按二OOO年版中国药典方法检验，结果应符合以下要求：杂菌总数： 30000个/g 霉菌总数： 100个/g 大肠杆菌： 不得检出活螨. 不得检出检验操作方法：1、前准备（1）将供试品及所有已灭菌的平皿、锥形瓶、匀浆杯、试管、吸管（1ml、10ml）、量筒、稀释剂等移至无菌室内。每次试验所用物品必须事先计划，准备足够用量，避免操作中出入操作间。编号后将全部外包装（牛皮纸）去掉。（2）开启无菌室紫外杀菌灯和空气过滤装置，并使其工作不低于30min。（3）操作人员用肥皂冼手，关闭紫外杀菌灯，进入缓冲间，换工作鞋。再用0.1%苯扎溴铵溶液或其他消毒液洗手或用乙醇棉擦手，穿戴无菌衣、帽、口罩、手套。
6、（4）操作前先用乙醇棉球擦手，再用碘伏棉球（也可用乙醇棉球）擦拭供试品瓶、盒、袋等的开口处周围，待干后用灭菌手术镊或剪将供试品启封。2、试液的制备（1）液体供试品 取供试品10ml，置灭菌锥形瓶中，加入90ml稀释剂，摇匀，作为1：10供试液。（2）固体、半固体或粘稠供试品 称取供品10g，置于匀浆杯或适当灭菌容器中，加入100ml0.9无菌氯化钠溶液，用匀浆仪（30005000r/，2/4min）,振荡器或乳钵研磨等方法分散混匀。3、供试液的稀释（10倍递增稀释法）（1）取23支灭菌试管，分别加入9ml灭菌稀释剂（此时操作一般为：左手执试管并将塞打开，倾斜，右手执10ml吸管吸量，注意：勿在
7、乙醇灯焰将供试管中菌细胞杀灭）。加完稀释剂后，试管塞应立即塞上。（2）另取1支1ml灭菌吸管吸1：10均匀供试液1ml，加入装有9ml灭菌稀释剂的试管中混匀，即为1：100供试液。以此类推，根据供试品污染程度，可稀释至1：10、1：100、1：1000等适宜稀释级（至少共3级），每递增1稀释级，必须另挽一支吸管。在作10倍递增稀释时，吸管插入1级稀释液内不低于液面2.5cm，反复吸吹约10次。吸液时，应先吸至高于吸管上部刻度少许，然后提起吸管，贴于试管内壁调整液量至刻度，再沿第2级稀释管的内壁靠近液面（勿接触液面）缓慢地吹出全部供试液（吸管内应无粘附或残留液体），然后将吸管放入消毒缸内。4、注
8、平皿 在进行10倍递增稀释的同时，以刻稀释吸管，吸取各级稀释液各1ml至每个灭菌平皿中（从高稀释级至低稀释级吸液时可用1支吸管），每一稀释级注23个平皿（此时，一般为左手执平皿，将盖半开，右手执吸管），注平皿时，将1ml供试液慢慢全部注入平皿中，管内无残留液体，防止反流到吸管尖端部。注平皿时，将1ml供试液慢慢全部注完毕，另2个作霉菌、酵母菌数阴性对照，如另用YPD琼脂测定酵母菌数时，则再增加2个平皿作酵母菌数阴性对照）。5、倾注培养基 将预先配制好的培养基（细菌计数用营养琼脂，霉菌、酵母菌计数一般用玫瑰红钠琼脂）熔化，冷至约45时，倾注上述各个平皿约15ml，以顺时针或反时针方向快速旋转平皿
9、混匀，注意，混匀时勿将培养基溅到皿边及皿盖上，置操作台待凝。6、培养 细菌计数平板倒置于3035培养箱中培养48小时。霉菌、酵母菌计数平板于2528培养箱中培养72小时。7、菌落计数（1）一般将平板置菌落计数器上或从平板的背面直接以肉眼点计，以透射光衬以暗色背景，仔细观察。勿漏计细小的琼脂层内和平皿边缘生长的菌落。注意细菌菌落与霉菌菌落和酵母菌菌落以及它们与供试品颗粒、培养基沉淀物、气泡等的鉴别。必要时用放大镜或用低倍显微镜直接观察或挑取可疑物涂片镜检。（2）供试品如为微生物制剂，应将有效微生物菌落排除，不可点计在细菌、霉菌和酵母菌数内。排除的方法需按该制剂微生物品种而定，并须观察菌落特征及染
10、色形态。（3）供试品稀释液常含有不溶性原料、辅料，培养基注皿后亦可能产生沉淀物，经过培养后的时形成数量很多且难与菌落肉眼相鉴别的有形物。为了有利于菌落计数，可在操作时将适宜稀释级的供试液多增加注皿（12个平皿），注皿后不经培养而放置于冰箱（勿结冻）中，在计数菌落时作为对照。或用0.001TTC营养琼脂注皿，经培养后可将细菌菌落与其他有形物区别开来。有些软膏等非水溶性供试品，经营养琼脂注皿后呈乳白色，培养后生长的菌落不易辨认和点计，为防止这种情况，也可用0.001TTC营琼脂注皿，经培养后生长的菌落为红色，衬于白色背景上易于点计。（4）若平板上有2个或2个以上菌落重叠，肉眼可辨别时仍以2个或2个
11、以上菌落计数；若平板生长有链状菌落，菌落间无明显界线，一条链作为一个菌落计，但若链上出现性状与链状菌落不同的可辨菌落时，仍应分别计数，若生长蔓延的较大的片状菌落或花班样菌落，一般不宜作为计数用。（5）记录各稀释级平板的菌落数，求出各稀释级2个或3个平板菌落的平均数。当菌落数在15以上的同稀释级二平板菌落数相差1倍时，该稀释级菌落数不得作为计数依据；当2个平板菌落数均在15（含15）以下时，两个平板菌落数的差值允许范围为04，17，29，310，412，514，615。超出以上范围即视为操作误差，不得作为计数依据。（6）下列情况下、点计菌落时间需提前或延长培养时间： 菌落生长呈蔓延趋势者，细菌点
12、计需在24小时，霉菌点计需在48小时作初步点计（点计霉菌菌落数时，动作宜轻，勿反复翻转平板或造成震动，使早期形成在孢子散落在平板的其他部位，又萌生新的霉菌菌落，导致计数误差）。 在48小时点计细菌，72小时点计霉菌时，菌落极小不易辨认，需延长培养时间47 天，再点计菌落数。 对有疑议的供试品以YPD培养基作酵母菌计数时，可培养至1周再点计菌落数。（7）供试品按营养琼脂平板点计细菌菌落数；固体供试品按玫瑰红钠琼脂平板点计霉菌菌落数，一般液体供试品按玫瑰红钠琼脂平板点计霉菌及酵母菌总数。8、菌数报告规则（1）细菌数选取平均菌落数在30300之间的稀释级，霉菌、酵母菌数选取平均菌落数在30100之间
13、的稀释级作为报告菌数的依据。如只有1个稀释级平均菌落数在30300（30100）之间，则将该稀释级的菌落数乘以稀释倍数报告。（2）如有2个相邻稀释级平均菌落数在30300（30100）时，则按比值计算。当比值2时，则以2个稀释的平均菌落数均值报告。当比值2时，则以低稀释的平均菌落数乘以稀释倍数报告。 比值=（3）如有3个稀释级平均菌落数均在30300（30100）之间，则以后2个稀释级计算级间比值报告。（4）如各稀级平均菌落数均在300（100）以上，则按最高稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告；如各稀释级平均菌落数均在30以下，则按最低稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告。（5）如各稀释级平均菌落数
14、均不在30300（30100）之间，则以最接近30或300（100）的稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告。（6）如各稀释级平均菌落数均无菌落生长或最低稀释级平均菌落数小于1时，应报告菌数10个/g或ml。如供试品原液平板均未生长霉菌及酵母菌，报告未检出霉菌及酵母菌/ml。（7）当各稀释级平均菌落数均小于30时，如高稀释级平均菌落数大于或等于低稀释级平均菌落数时，应以培养基稀释法重新测定，按测定结果报告菌数。培养基稀释法： 取低稀释级供试品（原液或1：10、1：100供试液）3份，每份各1ml，分别注入5个或5个以上平皿中（每皿0.2ml或0.2ml），每1个平皿倾注营养琼脂培养基约15ml，混匀
15、，凝固后，倒置培养，计数。5个或5个以上平板点计的菌落之和，即为每1ml菌落数，共得3组数据。以3份低稀释级供试液菌数的平均值乘以稀释倍数报告。9、结果报告（1）菌落数在100以内时，按实有数据报告。（2）菌落数大于100时，取两位有效数字报告，第三位按数字修约规则处理。10、复试 供试品细菌数、霉菌及酵母菌数其中任一项一次检验不合格，应重新取2倍包装量供试品，依法作单项复试两份，以三次检验结果的均值报告。11、注意事项（1）供试品检验全过程必须符合无菌技术要求。使用灭菌用具时，不能接触可能污染的任何器物，灭菌吸管不得用口吸。（2）从供试品稀释至倾注琼脂培养基操作应在1小时内完成，避免由于时间
16、过长导致菌细胞繁殖或死亡。（3）供试液稀释及注皿时应取均匀的供试液，以免造成实验误差。（4）为避免细菌菌落蔓延生长，宜采取下列方法处理：开盖干燥 将已凝固的琼脂平板开盖，倒置斜放于净化工作台上，开机12小时后合盖，放入培养箱培养；换陶瓦盖 将已凝固的琼脂平板盖上新近干热灭菌的陶瓦盖。加TTC于倾注培养基前，在每1000ml营养琼脂内加入灭菌1%TTC溶液1ml（最终浓度为0.01%），混匀后倾注平皿。 一般情况下，以营养琼脂平板计数，玫瑰红钠琼脂平板计数霉菌、酵母菌数。在特殊情况下，如营养琼脂平板生长了霉菌、酵母菌，且多于玫瑰红钠琼脂平板的霉菌和酵母菌菌落数，则以营养琼脂平板的霉菌、酵母菌数报
17、告；反之，如玫瑰红钠琼脂平板生长了细菌，且多于营养琼脂平板的细菌菌落数，则以玫瑰红钠琼脂平板的细菌数报告。如营养琼脂平板生长的霉菌、酵母菌数或玫瑰红钠琼脂平板生长的细菌菌落超过该品种微生物限度规定时，经复试2次，如3次结果的平均值仍超过规定，应判供试品不合格。标准依据：来源于（中国药典 2000年版一部附录XIII C）。标准依据中国药典二OOO年版。内控项目 项目名称法定标准企业内控标准合格品优质品性状本品为棕红色至灰棕色的粉末；气芳香，味咸、微苦。本品为棕红色至灰棕色的粉末；气芳香，味咸、微苦。本品为棕红色至灰棕色的粉末；气芳香，味咸、微苦。鉴别（1）、（2）应符合规定（1）、（2）应符合
18、规定（1）、（2）应符合规定均匀度应符合规定符合规定符合规定水分不得过9.0%。不得过9.0%。不得过9.0%。装量差异8%8%8%细菌总数30000个/g30000个/g50个/g霉菌总数100个/g100个/g50个/g大肠肝菌不得检出不得检出不得检出活 螨不得检出不得检出不得检出外观质量标准包装整洁完好，无破瓶或漏液现象。【功能与主治】清热解毒，止痉开窍。用于热病，高热烦躁，神昏谵语，惊风抽搐，斑疹吐衄，尿赤便秘。【用法与用量】口服，一次1.53g，一日2次；周岁小儿一次0.3g，五岁以内小儿每一岁，递增0.3g，一日1次；五岁以上小儿酌情服用。【注意】孕妇禁用。【贮藏】密封，置阴凉处。