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1、植物有效磷含量的测定（游离态磷）1试剂配制（1）配 100 ml l0%(w/v)的高氯酸，取 7.874 ml 72%的高氯酸溶液。(高氯酸：分子量 100.46，相对密度 1.764)。配 800 ml 5%(w/v)的高氯酸，取 31.494 ml 72%的高氯酸溶液。（2）配制硫酸-钼酸铵溶液（溶液A）：即 0.5N H2SO4中含有 0.4%（w/v）的钼酸铵。溶解 0.8g 钼酸铵(NH4)6Mo7O24 4H2O 于 100ml 水中。然后徐徐加入 5 ml 的浓 H2SO4（98%）。充分混匀，冷却后加水至200 ml。（3）配制 10%(w/v)抗坏血酸溶液（溶液B）：溶解
2、2 g 抗坏血酸于水中，最后加水至 20 ml 中，贮于棕色瓶中，在4冰箱保存。（4）工作溶液：按体积比 6:1 混合溶液 A 和溶液 B。注：工作溶液需要每天配制，配好后放置 2 小时后再使用。2.操作步骤（1）取 0.5 克鲜样用液氮研磨成粉末，在 4放置(冰上或者冰箱)至样品冻融，加入 1ml 10%(w/v)的高氯酸（PCA）研磨均匀。（2）匀浆液用 5%(w/v)的高氯酸（PCA）稀释 10倍，于冰上放置30 分钟。（3）于 4，10000 g离心 10 分钟，上清液用于有效磷含量的测定（钼蓝法）。（4）取 2 ml 工作溶液与 1 ml 样品上清液混合，于40温育 20分钟。（5）
3、反应液在冰上冷却后，于820 nm 可见光波长下测定吸收值。如样品浓度过高，应适当稀释，使其OD 值落在标线的线性范围内。3磷标准曲线的制作（1）磷标准溶液配制（60 ppm P）：溶解 0.230 g 磷酸二氢铵（NH4H2PO4）于100 ml 蒸馏水中，即得 600 ppm P的磷标准溶液，再将600 ppm P的磷标准溶液用提取剂稀释10 倍，得 60 ppm P的磷标准溶液。（2）标准曲线绘制：将60 ppm P的标准磷溶液用提取剂稀释，分别制成0.6、1.2、2.4、3.6、4.8 和 6 ppm P的标准系列溶液。提取剂用10%(w/v)的高氯酸和 5%(w/v)的高氯酸按体积比
4、1:9 混合配制。用提取剂与工作溶液的名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 1 页，共 4 页 -反应液作空白。4.计算植物有效磷(Pi)含量(mg Pi/g FW)=OD 值*(V/m)*(V2/V1)*C OD 值换算后待测液中磷的质量浓度(PPM：mg/L)V 样品制备溶液的ml 数，即样品所加提取剂的体积(此为 0.01 L)m 样品鲜重(g)(根据实际称得的质量计算)V1 吸取反应所用体积(1 ml)V2 反应液总体积数(3 ml)C 样品的稀释倍数(如果样品浓度过高，需稀释至1 ml 后再反应)二十、植物总磷的测定1.试剂配制（1）二硝基酚(2,6-或 2,4-)：溶解
5、二硝基酚 0.25 g 100ml水中。此指示剂的变色点约为 pH3，酸性时无色，碱性时呈黄色。（2）4 mol/L 氢氧化钠溶液：溶解NaOH 16 g 于 100 ml 水中。（3）2 mol/L（1/2H2SO4）溶液：吸取浓硫酸6 ml，缓缓加入 80 ml 水中，边加边搅动，冷却后加水至100 ml。（4）酒石酸锑钾溶液：称取酒石酸氧锑钾 K(SbO)C4H4O6 0.5 g，溶解于 100 ml水中，制成 0.5%的溶液。（5）钼锑混合液：另取钼酸铵(NH4)6Mo7O24 4H2O10 g 溶于 450 ml 水中，徐徐加入 153 ml 浓硫酸，边加边搅拌。再将 0.5%的酒石
6、酸锑钾溶液100 ml加入到钼酸铵溶液中，最后加水至1 L，充分摇匀，贮于棕色瓶中。（6）钼锑抗试剂：临用前（当天），称取 1.5 g 左旋抗坏血酸，溶于100 ml 钼锑混合液中，混匀。有效期24 个小时，如藏于冰箱中则有效期较长。此试剂中 H2SO4为 5.5 mol/L，钼酸铵为 10 g/L，酒石酸锑钾为 0.5 g/L，抗名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 2 页，共 4 页 -坏血酸为 15g/L。2操作步骤（1）称取植物样品(约 0.1450 g0.1550 g，已用剪刀剪碎)，置于消煮管中。（2）然后加入浓 H2SO4 8 mL 轻轻摇匀。（3）瓶口放一小漏斗，在
7、电炉上消煮，300，30 分钟。（4）当溶液加热至微沸并全部呈棕黑色时取下，加10 滴 H2O2。（5）再加热至微沸，510 分钟，取下。（6）稍冷后重复加 H2O2 510 滴，再消煮。（7）如此重复 23 次，每次添加的H2O2应逐次减少。（8）消煮到溶液呈无色或清亮后，再加热约510 min，以除尽剩余的 H2O2，关闭电炉，让其自然冷却30 分钟后，取下，继续冷却。（9）用少量水冲洗漏斗，洗液流入消煮管，将消煮液定量地移入50ml 容量瓶中，摇匀，冷却至室温。（10）用蒸馏水定容，用滤纸过滤到 50ml 离心管中，供磷的测定(钼锑抗比色法)。（11）吸取消煮液 4ml 注入 50ml
8、容量瓶中(根据样品浓度调整反应液数量)，加水至约 30ml。（12）加二硝基酚指示剂2 滴，滴加 4N NaOH 溶液直至溶液变为黄色。（13）再加 2N H2SO4数滴，使溶液的黄色刚好褪去。（14）然后加钼锑抗试剂5 ml，加水定容至 50 ml。摇匀，30 min 后，用 820 nm波长进行比色测定（用空白消煮液与钼锑抗试剂的反应液调零）。3磷标准曲线的制作（1）磷标准溶液配制（50 ppm P）：准确称取 0.0220 g KH2PO4，溶解于 40 ml水中，加浓硫酸 0.5 ml（加浓硫酸可以防止长霉菌，使溶液长期保存），转入 100 ml 容量瓶中，加水至刻度，得 50 ppm
9、（即 50 g/ml）的 P 标准溶液。吸取上述磷标液 5 ml，稀释至 50 ml，即得 5 ppm的 P 标准溶液（此溶液不宜久存）。（2）标准曲线绘制：准确吸取5 ppm 的 P 标液 0、2、4、6、8、10 ml，分别放入 50 ml 的容量瓶中，加水至约30 ml，再加空白试验定容后的消煮液5 ml，调节溶液 pH 为 3，然后加钼锑抗试剂5 ml，最后用水定容至50 ml，30 min 后于波长 820 nm 进行比色。4计算名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 3 页，共 4 页 -植物总磷(P)含量(mg P/g DW)=OD 值*(V/m)*(V2/V1)OD 值换算后待测液中磷的质量浓度(PPM：mg/L)V 样品制备溶液的体积(0.05 L)m 样品干重(g)(根据实际称得的质量计算)V1 吸取反应所用体积(根据样品浓度调整)V2 反应液总体积数(50 ml)名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 4 页，共 4 页 -