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1、葛根含量测定方法(葛根素)葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi的干燥根。2005版中国药典一部采用高效液相色谱法测定其葛根素的含量。一、高效液相色谱法 2005版中国药典葛根含量测定项下:色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水(25:75)为流动相;检测波长为250nm。理论板数按葛根素峰计算应不得低于4000。供试品溶液的制备:取本品粉末约 0.1g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入 30%乙醇 50ml,称定重量,加热回流30分钟,放冷,再称定重量,用30%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。HPLC法测定葛根及其
2、制剂中葛根素的含量时,使用最多的流动相系统为甲醇-水系统,另外还有甲醇-水,加醋酸调节pH等。A:以甲醇-水为系统的,常见的比例及实验条件为:Waters2695/2996/Empower 色谱系统;色谱柱Symmetry C18 柱(3.9mm 150mm,5m);流动相:甲醇-水(25:75);DAD检测波长 254nm;柱温 35。SP8800 型高效液相色谱泵;Hypersil ODS(4.6mm250mm,5 m 大连依利特科学有限公司);流动相:甲醇-水(30:70);柱温 40;检测波长 250nm。Waters 高效液相色谱仪;十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(4.6mm250mm,
3、5m);甲醇-水(40:60)为流动相;检测波长为250nm;柱温 30。美国 Spectra-Physics 液相色谱仪;色谱柱Lunm C18(150mm 4.6mm,5m)不锈钢柱(美国 Phenom enex 公司);流动相为甲醇-水(28:72);检测波长 250nm;柱温 30。B:乙腈-水系统:名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 1 页,共 3 页 -LC-10ATvp 高效液相色谱仪;Hypersil ODS 色谱柱(4.6mm150mm,5 m);乙腈-水(15:85)为流动相;检测波长250nm。TSP 高效液相色谱仪;色谱柱Turner C18H37(5m,
4、4.6mm150mm);流动相:乙醇-水(43:207);柱温 30;检测波长250nm。C:加酸调节的,如:LC-10A 高效液相色谱仪;色谱柱为 ODSC18 柱(5m,4.6mm 150mm);流动相为甲醇-水(35:65),内含 0.01%醋酸;柱温 35;检测波长251nm。SP-8800高效液相色谱仪;色谱柱ODS-C18 柱(4.6mm250mm,5 m);流动相:甲醇-1.4%醋酸溶液(22:78);柱温室温;测定波长:250nm。美国 Beckman公司高效液相色谱仪;Hypersil ODS 柱(2.5 m,4.6mm 250mm);流动相为甲醇-氯仿-1.5%冰醋酸(22
5、:1:77);检测波长 250nm。SP1000 高效液相色谱泵;色谱柱YMC C18 不锈钢柱(4.6mm150mm,5m);流动相:甲醇-水醋酸(42 100:0.2);检测波长 250nm;柱温:室温。其它如:吕竹芬等测定心血宁滴丸中葛根素的含量,采用高效液相色谱法,Dikma piamonsil C18色谱柱(4.6mm200mm,5 m),以甲醇-乙腈-水(30:2:65)为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长 250nm。颜春华等测定脑得生片中葛根素的含量,采用日本岛津LC-4A 高效液相色谱仪;色谱柱DiamonsilTM(钻石)C18(200mm 4.6mm,5m);流动
6、相:乙腈-甲醇-0.1%枸橼酸溶液(5:25:75);紫外检测波长250nm;柱温室温。制备样品溶液时,一般以 30%乙醇、50%乙醇、乙醇、甲醇、流动相或盐酸溶液(91000)等为溶剂,采用超声法提取。二、其它名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 2 页,共 3 页 -杨振林等测定葛根冲剂中葛根素含量,采用薄层-紫外分光光度法,751GD 型分光光度计(上海分析仪器总厂)。薄层层析硅胶G板,以氯仿-甲醇-水(7:28:0.2)为展开剂,在紫外灯(365nm)下定葛根素位置,刮下斑点,用甲醇洗脱,测定波长为 2511nm。崔小兵等测定通脉颗粒剂中葛根素及阿魏酸的含量,采用双波长(1=250nm,2=313nm)梯度洗脱法。Waters 2690 型高效液相色谱仪;色谱柱Kromasil C18 柱(4.6mm250mm,5m);柱温为 30,甲醇-1%醋酸水梯度洗脱;检测波长为250nm;柱温 30。方崇波等采用离子络合紫外分光光度法测定葛根素及其制剂的含量,采用 UV4/2401 紫外分光光度计(岛津)。方法::在 pH=4.0条件下,葛根素和Al3+形成络合物,在339.8 nm 波长处通过测定吸收度的改变来测定含量。名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 3 页,共 3 页 -