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1、植物总多酚常用的含量测定方法有Folin- Ciocalteu 法, 酒石酸亚铁法 , 普鲁士蓝法和高锰酸钾法等。1.福林试液的配制：取钨酸钠 10g 与钼酸钠 2.5g， 加水 70ml、 85磷酸 5ml 与盐酸 10ml,置 200ml烧瓶中 ,缓缓加热回流 10小时，放冷，再加硫酸锂15g、水 5ml 与溴滴定液 1 滴煮沸约 15 分钟，至溴除尽，放冷至室温，加水使成100ml。 滤过,滤液作为贮备液。置棕色瓶中 ,于冰箱中保存。临用前，取贮备液2.5ml，加水稀释至10ml，摇匀，即得。用 10mL 乙醇溶液溶解 0.5000g没食子酸，定容至100mL，分别移取 3.0mL到 1
2、00mL 容量瓶中，用蒸馏水定容。加入福林薛卡多（Folin-Ciocalteu）试剂显色，在 765nm 波长下测定吸光度。每个浓度做三个平行试验，取平均值，根据标准曲线。取样品溶液 1mL，按照上述的制作方法，测定其吸光度，每个样品做三个平行试验，取平均值，计算样品中的多酚含量。反应原理为酚类化合物在碱性条件下可以将钨钼酸还原，生成蓝色的化合物，颜色的深浅与酚类化合物含量呈正相关，在波长760 nm左右有最大吸收。2. 酒石酸亚铁比色法。其测定原理是茶多酚类物质能与亚铁离子形成紫蓝色络合物。用分光光度法测定其含量。茶多酚标准溶液的配制称取提取纯品0.2500g, 加水溶解定容至 250mL
3、, 混匀,即为每毫升含 1mg 提取纯品的标准溶液 (mg/mL) 。茶多酚的含量。茶多酚标准曲线的绘制。分别吸取茶多酚标准溶液1. 0mL 、2. 0mL 、3. 0mL 、4. 0mL 于 4 个 50mL 容量瓶中 ,各加水至 10mL, 再加酒石酸亚铁溶液 10mL, 加入 pH 为 7. 5 的磷酸缓冲液至刻度 ,混匀后用 1 比色皿 ,以空白试剂作参比 ,于波长 540nm 处测定吸光度 (A) ,绘制出标准曲线。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 1 页，共
4、 3 页 - - - - - - - - - 实验十七食品中多酚类物质的提取与含量测定一、实验原理多酚类物质包括花青苷、黄酮苷、单宁等，具体又可分为若干种。多酚类物质含有酚羟基，有的还含有羧基，属于极性有机化合物，常用极性溶剂提取，如甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、水以及由这些溶剂按比例组成的复合溶剂。由以上溶剂直接提取的多酚物质，实质为各种多酚的混合物（总多酚提取液），不同的原料中所含酚类物质的种类不同，需要进一步的分离鉴定。常用的植物多酚总量的测定方法中较为普遍使用的方法有: 酒石酸亚铁比色法、FD 法、FC 法、普鲁士蓝法等。其中酒石酸亚铁分光光度比色法应用较多。酒石酸亚铁分光光度比色法的原
5、理：过量的酒石酸亚铁与提取液中多酚反应生成稳定的紫褐色络合物， 溶液颜色的深浅与溶液中多酚含量成正比。测定总多酚时所用的标准物则需根据样品中所含多酚的种类而定，比如测定茶叶中茶多酚含量时，儿茶酚能较好地代表茶多酚， 则以儿茶酚作标准物； 而测定藤茶多酚时， 则以没食子酸作标准物较合适。二、实验材料、试剂与仪器材料：茶叶；仪器：水浴锅，分光光度计，三角瓶，容量瓶，吸管等；试剂：（1）酒石酸亚铁溶液：称取1.00g 硫酸亚铁（ FeSO4 7H2O）和 5.00g 酒石酸钾钠(C4H4O6NaK 4H2O）,混合后加蒸馏水溶解 ,定容到 1000mL ；（2） pH 7.5 磷酸盐缓冲液：称取 6
6、0.20g Na2HPO4 12H2O 和 5.00g NaH2PO4 12H2O ， 混合后加蒸馏水溶解 ,定容到 1000mL 。三、操作步骤（一）标准曲线的制作或茶多酚含量经验值的应用标准曲线的制作参照GB-8313-87 茶茶多酚测定方法。为简化操作，可用在一定操作条件下“ 吸光度值为 1.00 时，供试液中茶多酚的浓度为7.826 mg/mL ” 这一经验值，直接由待测液的吸光度值计算样品中茶多酚的含量。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 2 页，共 3 页 -
7、 - - - - - - - - （二）样品总多酚的提取准确称取 1.0g 磨碎并混匀的茶叶样品于200mL 三角瓶中，加入 80mL 沸水，并在沸水浴中保温浸提 30min ，然后过滤、洗涤滤渣，将滤液合并、冷却、加蒸馏水定容至100mL 。（二）样品多酚提取液的多酚总量测定吸取 1mL 样品多酚提取液于25mL 容量瓶中，加入 4mL 蒸馏水和 5mL 酒石酸亚铁溶液，摇匀，再用pH 7.5 磷酸盐缓冲液稀释至刻度，混匀。同是以蒸馏水代替样品提取液，加入与样品测定同样的试剂作空白，用0.5cm 比色皿在 540nm 波长处测定吸光度。四、计算式中： A540样品提取液的吸光度； T样品提取液的总体积（ mL）； V测定时吸取样品液的体积（mL）； W称取样品的质量（ g）；7.826吸光度为 1.00 时,茶多酚含量的经验值(mg/mL) 。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 3 页，共 3 页 - - - - - - - - -