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1、病理学技士专业知识考试大纲知识点专业知识病理解剖的意义：收集病理教学机科研资料的一个重要途径，大量病理资料的积累促进了医学的发展及进步。通过解剖尸体观察和发现死者器官、组织的病理变化，找出主要病变，分析判断直接死亡原因的一种重要方法。可以验证临床诊断的正确性及治疗效果，发现临床诊断和治疗上存在的问题，最后通过临床病理讨论会的形式，实现病理和临床的交流及统一。病理解剖室的清洁及消毒 地面及靠近地面的墙壁用水冲洗干净。紫外线灯进行空气消毒，照射剂量不小于9000Uw-s/cm2。室内温度不低于20度，相对适度不超过50%，照射2030分钟。必要时喷雾2%过氧乙酸8ml/m2密闭消毒30分钟。解剖器
2、械的消毒 清水冲洗干净，浸泡在1:1000苯扎溴铵内含0.5%亚硝酸钠溶液中46小时、10%甲醛水溶液中24小时。个人防护 戴橡胶手套，外再戴薄质纱手套，戴上口罩、帽子，穿手术衣，外戴塑料围裙。固定 将组织浸入某些化学试剂，是细胞内的物质尽量接近其生活状态时的形态结构和位置。 意义是保存组织细胞的抗原性，使抗原物质不发生弥散和抗原性丧失。 作用：保持细胞及生活时的形态相似、保持细胞内特殊的成分及生活状态时相仿、便于区别不同组织成分、有利于切片、固定剂的不良影响（影响常规染色、固定造成物质损失、组织皱缩）。固定剂的选择 细胞内物质及固定剂的关系：组成细胞的主要成分为蛋白质、脂类、糖类，根据研究目
3、的的不同选择不同的固定剂。Masson染色，甲醛升汞、Zenker液、bouin液。嗜铬细胞，含铬的固定液。细胞内糖原，用Carnoy液。 固定液的量（组织块总体积的45倍） 穿透力（23mm/24h或0.5cm的多孔疏松组织） 时间（固定24小时后保存于70%乙醇。一般324小时） 特殊固定（制备1um厚的半薄切片，先用戊二醛固定再用饿酸进行二次固定） 固定容器（相对大些，防止组织及容器粘连产生固定不良。瓶底垫一棉絮，使固定液均匀渗入组织块。轻轻搅动，利于渗入。）单纯固定剂 甲醛（40%甲醛气体水溶液，又称福尔马林。）渗透力强，固定均匀，组织收缩小。固定保存大体标本。 甲醛色素：甲醛氧化产生
4、的蚁酸在组织中及血红蛋白结合形成棕色的甲醛色素。类：醛类，甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等。类：氧化剂类，四氧化锇（奥酸），高锰酸钾，重铬酸钾等。类：蛋白变性类，甲醇，乙醇，醋酸等。类：其他，氯化汞，苦味酸等。 重铬酸钾：橘红色结晶，有毒性，1%3%水溶液。固定高尔基体和线粒体。 苦味酸：黄色结晶体，强酸易燃易爆。沉淀一切蛋白质，穿透慢，组织收缩明显，组织无明显硬化。 升汞：针状结晶。5%7%饱和水溶液。固定蛋白质。 醋酸：保存染色体。 铬酸：三氧化铬的水溶液。0.5%1%。线粒体和高尔基体。 饿酸：四氧化饿，淡黄色结晶，1%2%的水溶液，脂类。 丙酮：酶组织化学的各种酶的固定
5、。 三氯醋酸：无色易潮解的结晶体。蛋白质沉淀。 乙醇：80%95%，糖原的固定。（1）B-5固定液淋巴组织（2）Bouin氏固定液外科活检标本、结缔组织染色（三色较佳）（3）Carnoy氏液胞质和胞核，染色体固定佳（4）Miiller氏液媒染和硬化神经组织（5）Orth氏液胚胎组织、神经组织、脂肪组织（6）PFG液肽类抗原的固定，免疫电镜研究（7）PLP液和PLPD液富含糖类组织的固定（8）Rosman液糖原固定好（9）Zenker液固定多种组织，使细胞核和细胞质染色较清楚，常用三色染色（10）4%多聚甲醛-0.1mol /LPB 适用光镜免疫组化（11）4%多聚甲醛-磷酸二钠/氢氯化钠液光镜
6、和电镜免疫组化（12）甲醛-钙液脂肪组织和组织化学染色（13）乙醇-甲醛液皮下组织肥大细胞（14）乙醚-酒精液细胞涂片（15）中性缓冲甲醛液免疫组化（16）中性甲醛液常用（40%甲醛120ml、蒸馏水880ml、磷酸二氢钠4g、磷酸氢二钠13g。）组织的脱水和脱水剂 脱水：借某些溶媒置换组织内水分的过程。 酒精脱水能力强，硬化组织，收缩明显，梯度脱水丙酮快速脱水或固定兼脱水异丙醇乙醇替代品，收缩小，硬化作用弱正丁醇脱水后的组织科直接浸蜡和包埋，电镜中的中间脱水剂透明：组织块中的水分被溶剂取代，其折射指数接近于组织蛋白的折射指数，组织块变得透亮。二甲苯：常规透明剂，折射指数1.50，对组织的收缩
7、性强，易使组织变硬变脆。石蜡切片：组织经石蜡包埋制成蜡块，用切片机制成切片的过程。一般厚度46um。蛋白质的着色原理：蛋白质分子中的氨基酸残基含有酸性基团或碱性基团，可以及染料分子以离子键、氢键、配价键结合。核酸染色原理：核酸包括DNA和RNA。是由单核苷酸连接而成的大分子。在DNA双螺旋结构中，两条核酸链上的磷酸基向外，并电离为负离子，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，易和带正电荷的碱性染料以及媒染染料以离子键或氢键相结合。胞质的主要成分：蛋白质、RNA、脂蛋白等，多为两性化学物。 在PH3.64.7之间，胞核带负电荷为碱性染料染色；胞质带正电荷为酸性染料染色。细胞膜的成分：类脂和蛋白质，形成流
8、动镶嵌脂质双层结构。 在膜表面分布有糖脂、磷脂、蛋白质分子，含有较多的极性基团，负电基团和正点基团。负点基团占优势总结果使细胞膜外表面带负电，易被碱性染料染色。7.HE染色的原理（1）细胞核染色原理：细胞核的染色质主要是DNA，DNA的双螺旋结构中，两条链上的磷酸基向外，带负电荷，称酸性，易及带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。（2）细胞质染色的原理：在染料中加入醋酸，使胞质带正电荷，可被负电荷的染料结合。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，及蛋白质的氨基正电荷结合而使细胞质染色。二甲苯的作用：脱去切片中的石蜡；透明切片的作用。（3）乙醇的作用：洗脱用于脱蜡的二甲苯，再使水分进入
9、切片；脱去组织中的水分。水洗的作用：使水进入切片中，苏木素染液进入细胞核中；洗去未结合的染料；除去为结合的染料和中止分化。（4）分化的作用：洗去细胞核中结合过多的染料和胞质中吸附的染料。返蓝的作用：分化后的苏木精在酸性下处于红色离子状态，在碱性条件下处于蓝色离子状态，使苏木精染上的细胞核变成蓝色。8、石蜡切片和HE染色的质量标准（切片完整，厚度46um，厚薄均匀，无褶无刀痕；染色核质分明，红蓝适度，透明洁净，封婊美观。）十、常用的特殊染色技术 1.结缔组织复合染色法（1）应用（鉴别梭形细胞软组织肿瘤的来源属于纤维性、肌肉性、神经性）（2）Mallory三色法结果（胶原和网状纤维呈蓝色，软骨黏液
10、淀粉样变物质呈淡蓝色，神经胶质纤维、肌纤维和酸性颗粒呈红色，髓鞘和红细胞呈橘红色）（3）Masson三色法结果（胶原纤维呈绿色，肌纤维呈红色，红细胞呈橘红色）（4）显示胶原、网状和弹力纤维三联染色法结果（胶原纤维呈红色，网状纤维呈绿色，肌肉和红细胞呈淡黄色）2.胶原纤维染色法（1）应用（鉴别肿瘤来源于纤维细胞、心肌瘢痕灶、早期肝硬化。及其他组织纤维增加或减少等）（2）Van Gieson法的缺点（甲乙两液需分瓶存放，甲液配制后数天即可用，不易配制过多，乙液配制后立即使用。（3）丽春红S染色的结果（胶原纤维呈鲜红色，肌纤维、细胞质、红细胞呈黄色，胞核呈蓝褐色）（4）天狼星红的染色结果（胶原纤维呈
11、红色，细胞核呈绿色，其他呈黄色）（5）天狼星红染色在偏光显微镜下的结果型胶原纤维：排列紧密，显示很强的双折光性，呈黄色或红色的纤维。型胶原纤维：显示弱的双折光，呈多种色彩的疏松网状分布。型胶原纤维：显示弱的双折光，呈绿色的细纤维。型胶原纤维：显示弱的双折光的基膜，呈淡黄色。3.网状纤维染色法（1）应用（常区别上皮还是非上皮性来源的肿瘤；肝组织的网状支架塌陷破坏或增生的情况）（2）银染色的原理（组织蛋白质及银化合物的结合，再经过甲醛还原成为金属银而沉淀于组织内及表面的物质）（3）Gomori银染色法结果（网状纤维呈黑色，胞核呈红色（核固红复染），胶原纤维呈黄棕色，细胞质呈淡红色（红夜复染）（4）
12、James银染色的原理和结果4.弹力纤维染色法（1）应用（皮肤组织增生和变化，呼吸道支气管扩张，老年性肺气肿的纤维断裂、变性、萎缩；心内膜弹性纤维异常增生症等）（2）维多利亚兰和丽春红S染色的结果（弹性纤维呈蓝绿色，胶原纤维呈红色，背景呈淡黄色）5.肌肉染色法（1）应用（肿瘤细胞出现横纹肌纤维）（2）Mallory氏PTAH法结果（胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维蛋白、横纹肌等均呈蓝色，胶原纤维、网状纤维软骨基质及骨呈黄色或玫瑰红色；粗弹性纤维有时被染成微紫色；有缺血缺氧早期病变的心肌呈紫蓝色或棕黄色。）（3）早期心肌病变组织染色Nagar-Olsen染色法结果（缺氧心肌、红细胞呈红色，正
13、常心肌呈黄色或黄棕色，细胞核呈蓝色。） Poley染色法结果（缺氧心肌呈红色，胞核呈紫色，其他组织呈绿色。）6.糖类染色法（1）分类（多糖、中性黏液物质、酸性黏液物质）（2）糖原染色的应用（鉴别细胞内的空泡状变性；是被水溶性固定液溶解还是脂肪被脂溶剂溶解）（3）PAS染色法的原理（过碘酸把多糖的葡萄糖分子中的两个相邻的羟基的CC键打开，而生成醛基再及染色剂结合。碱性复红经亚硫酸和二氧化硫作用下，醌式结构的双键被破坏而消失，成为无色复红，经过氧化后的醛基及无色复红液进行结合呈紫红色）结果（糖原及其他阳性物呈红色，细胞核呈蓝色）7.粘多糖染色法（1）应用（粘液性疾病）（2）Alcian blue染
14、色和结果（唾液酸及若硫酸化黏液物质以及一般黏液呈蓝色，各种强酸化黏液物质不着色或淡染，胞核红色）（3）中性粘多糖的PAS染色结果（）（4）Mowry染色结果（中性黏多糖物质呈红色，酸性黏多糖物质呈蓝色，混合型黏多糖呈紫红色）8.色素类染色（1）色素的种类（外生性色素及沉淀物、人为色素及沉淀物；甲醛色素、黑色素）（2）黑色素染色的应用（显示异常的黑色素）（3）Masson Fontana法（黑色素及嗜银细胞颗粒呈黑色，胶原纤维呈红色，背景呈淡蓝色）（4）Lillie染色法黑色素结果（黑色素呈暗绿色，背景浅绿或不着色。肌纤维和背景呈黄色）（5）含铁血黄素染色的应用（组织内的铁质以含铁血黄素的方式存
15、在）（6）含铁血黄染色有哪几种证明方法和原理（7）脂褐素染色的应用（观察胆道阻塞和血红蛋白的代谢障碍等疾患所以起的胆汁淤积。病理时，出现在肝细胞、毛细血管、小胆管、库普弗细胞等）10.淀粉样物质染色（1）性质（糖蛋白成分）（2）应用（分为原发性和继发性，肿瘤的诊断及鉴别）（3）刚果红染色的结果（淀粉样物质呈红色，细胞核呈蓝色）（4）Jurgens甲紫染色结果（淀粉样物质呈红色或紫红色，细胞核呈蓝色）11.真菌染色（5）高碘酸复红染色的原理（真菌的基本结构成分是较多的黏多糖和蛋白质，经适当的氧化剂和氧化时间，促使糖类结构分子的乙二醇或氨羟基的碳键断裂，生成醛类化合物，暴露的游离醛基及Schiff
16、试剂进行结合。结果（真菌呈紫红色，红细胞呈淡黄色）12.细菌染色（1）细菌（一类病原微生物，体积较小，需放大到千倍以上才能看到，根据特殊方法可以把细菌分为一般细菌和抗酸杆菌两大类。）（2）革兰氏染色的原理和结果（碱性原料及细菌的核糖核酸镁盐-蛋白质复合物结合，因此革兰阳性菌摄取结晶紫多且较牢固，其结果呈蓝色或紫色。而阴性易被酸性复红和中性红染成红色。）（3）胃幽门螺杆菌染色的应用（及慢性胃炎和消化性溃疡有关；含有蛋白质和多糖物质，在一定温度硝酸银溶液作用下能够吸附银离子，再经过还原的显色剂使幽门螺杆菌被还原为金属银）（4）抗酸杆菌染色的原理和结果（含有脂质、蛋白质和多糖类，并有糖脂形成一个蜡质
17、的外壳，能及苯酚、碱性复红结合成复合物，其能酸的脱色。（5）Ziel-Neelsen方法染色结果（抗酸杆菌呈红色，背景呈灰红色）和区分结核杆菌及麻风杆菌以及诊断意义（检查结核病的结核性干酪样坏死灶、麻风病变，泡沫细胞内能够显示抗酸杆菌阳性反应的即为结核病和麻风病。结核（细长和带弯曲的杆状菌，长短粗细不一）麻风（较短、粗，聚集成堆，其数量有明显较多）（6）淋球菌染色的应用13.螺旋体染色 （1）螺旋体的性质和形态(介于细菌和原虫之间的微生物，是一群细长、柔软弯曲呈螺旋状，并能自由运动的原核细胞微生物。)（2）常用的螺旋体染色方法结果和应用（Giemsa染色法，螺旋体及细菌呈蓝到淡紫色，细胞质呈蓝
18、色，红细胞呈橘黄色；Ryu碳酸钠碱性复红法，螺旋体呈红色）（3）梅毒螺旋体染色应用（4）钓端螺旋体染色应用14.病毒包涵体染色（1）病毒包涵体的性质和形态（形态大小及红细胞相似，胞核嗜酸性，周围有透明晕，胞质呈嗜酸性，少部分嗜碱性。）（2）应用（3）染色方法的结果（红色）15.乙型肝炎病毒表面抗原染色（1）应用（2）Shikata染色法结果（HBsAg阳性呈棕色）（3）Macchiavello染色法结果(乙肝表面抗原阳性物质呈紫色，结缔组织呈红色，红细胞及基质呈黄色)（4）维多利亚蓝染色结果(HBsAg阳性物质呈蓝绿色，细胞核呈红色。)16.神经组织染色（1）髓鞘染色的应用()（2）Werge
19、rt-Pal染色法的结果(髓鞘呈黑蓝色。背景：淡灰色。)（3）Weil染色法的结果（髓鞘呈蓝黑色。背景：淡灰色。）（4）Kullshitsky髓鞘染色结果（髓鞘呈蓝黑色。背景：淡黄色。）（5）Luxol Fast blue髓鞘染色结果（髓鞘呈蓝色，核仁呈紫色，尼氏小体呈紫色）（6）变色酸2R-亮绿髓鞘染色法结果（神经髓鞘呈深红色，轴索及间质成绿色，脱髓鞘纤维不着色。）（7）Marchi退变髓鞘染色结果（退变髓鞘成黑色，背景呈浅棕色）（8）锇酸-a-萘胺染髓鞘的结果（）（9）Holmes神经纤维的染色结果（神经纤维呈黑色，背景灰紫色）（10）Bielschowsky神经纤维染色结果（神经纤维呈黑
20、色，背景紫色）（11）Von Braunmubl神经染色的结果（神经纤维和扣结呈黑色，老年斑呈黑色，背景浅灰色。）（12）Eager退变神经纤维染色的结果（退变神经纤维呈黑色，背景浅棕色）（13）神经细胞尼氏小体染色的应用和结果(神经细胞的正常或异常焦油紫染色法：尼氏小体呈紫色，胶质细胞呈淡紫色，背景无色；Einarson染色法：尼氏小体呈黑蓝紫色，核呈蓝色，背景无色；甲苯胺蓝染色法：细胞核呈淡蓝色，尼氏小体呈深蓝色，背景无色。)（14）星形细胞染色的结果和应用（原浆性及纤维性星形细胞呈紫黑色）（15）小胶质细胞及少突胶质细胞染色结果和应用（神经胶质细胞及少突胶质细胞呈黑色，背景黄棕色。）17
21、.神经内分泌细胞染色（1）亲银反应(DNES细胞含有5-羟色胺类和多肽激素，其细胞质的5-HT和甲醛形成还原复合物，在碱性下及银氨液作用后而还原为金属银。)（2）Lillie Masson二胺银反应法结果（亲银颗粒细胞呈黑色，细胞核呈红色，背景呈淡灰黑色）（3）Gomori-Burtner六胺银法结果（亲银细胞呈黑色，背景呈浅红色）（4）嗜银反应（DNES细胞含有5-羟色胺类和多肽激素，有的组织中由于含量多而银的反应使其阳性增高，所以这种细胞质颗粒中的物质不及甲醛液结合，也能形成还原性复合物。）（5）De Grandi改良反应法的结果（嗜银细胞颗粒呈棕黑色，胞核呈红色）（6）碱性重氮反应法结果
22、（嗜银细胞颗粒呈橘红色至红色，细胞核呈蓝色，胞质呈黄色。）18.嗜铬细胞染色（1）Geimsa改良染色法结果（嗜铬细胞呈红色至紫红色，皮质细胞呈蓝色，红细胞呈粉红色。）（2）Wiesel染色法结果（嗜铬细胞质呈黄绿色，细胞核呈红色，其他均染成蓝色）十二、酶组织细胞化学技术 1.主要方法的原理（1）金属沉淀反应法：酶作用于底物：能分解产物及底物混合液中的某种物质结合，沉着在作用的局部，接着用金属置换结合物质，通过金属显色来证明酶的存在。酶作用于底物后生成的分解产物及底物孵育液中的金属离子相结合，直接沉着及酶的反应局部而进行显色。使用人工合成底物：在酶的作用下，底物分解产物及特定的金属相结合而显色
23、。（2）偶联偶氮法：用人工合成的酶底物，在酶的作用下，产生分解产物，及重氮盐结合，可引起偶氮偶联，使其形成不溶性的沉淀-偶氮染料。（3）色素形成法：染色剂在酶的作用下，使无色的化学物质在局部形成色素沉着。2.酶组织化学的影响因素（1）温度（动物3540人体37植物4050）（2）pH值（多数7.0，碱性9.29.5,酸性5.0）（3）激活剂：能够使酶活性减弱，抑制酶的活力；抑制剂：能提高酶活性的物质。十三、免疫细胞化学技术3.免疫酶组织化学主要染色方法的原理（1）基本原理（利用抗原及抗体的特异性反应，在细胞或组织中定位抗原或抗体）（2）直接法原理（用已知的特异性抗体及荧光素或酶结合，直接及待测
24、组织中的抗原反应）（3）间接法（夹心法）原理（两步组成，用于检测抗原或抗体。检测抗原时，第一步以未标记的特异性抗体（第一抗体）及组织或细胞中的抗原反应。洗去未及抗原结合的第一抗体后，再以酶或荧光素标记的第二抗体（种族特异性）及第一抗体结合，然后进行显色或荧光反应。）（4）PAP法原理（将游离酶和抗酶抗体在使用前先制成稳定的酶-抗酶抗体复合物（PAP复合物），再稀释后使用，解决了酶及抗酶抗体的比例难以确定的问题。）（5）ABC法原理（通过ABC复合物中亲和素的桥梁作用，将ABC复合物及生物素化的抗体结合在一起，达到检测抗原的目的）（6）SP法原理（用链亲和素分子直接及酶分子结合，形成酶-链亲和素
25、复合物，再及生物素标记的第二抗体结合）（7）Envision法原理（利用线状的葡萄糖分子及大量的酶结合，再将葡萄糖-酶复合物连接到第二抗体上，形成酶-葡萄糖-第二抗体复合物。）（8）EPOS法原理（）（9）APAAP法原理（由碱性磷酸酶代替PAP中的过氧化物酶而成）（10）双重和多重法原理（）4.免疫组化染色方法的选择原则（五S原则）（1）Specilicity特异性（2）Sensitivity敏感性（3）Simplicity简便性（4）Safely安全性（5）Save of time and money省时省钱5.免疫染色的对照实验（1）阳性对照（用已知抗原阳性的切片作为对照及待检标本同时进
26、行免疫细胞组织化学染色，对照切片应呈阳性结果）（2）阴性对照（用确证不含已知抗原的标本作对照，应呈阴性结果。）（3）自身对照（）6.增强特异性染色方法的原理 （1）抗原修复（2）合适的抗体稀释度（3）多层染色法（4）CAS方法（5）显色反应的控制（成色质浓度和反应时间；双氧水浓度过大使反应过快而致背景加深，过量抑制酶的活性。）7.减少或消除非特异性染色（1）非特性染色的产生主要原因（蛋白质吸附于高电荷的胶原和结缔组织成分上。）（2）怎样识别非特性染色（不限于单个细胞，而是累计一片细胞。）8.免疫组织化学染色结果的判断（1）阳性细胞的染色特征（阳性细胞染色分布有三种类型：胞质、细胞核、细胞膜表面
27、；阳性细胞分布可为灶性和弥漫性；染色强度不一；阳性细胞染色定位于单个细胞，且及阴性细胞互相交杂分布）（2）染色失败的几种原因（所染的全部切片均为阴性结果；所有切片均呈弱阳性反应；所用切片背景过深；9.免疫荧光细胞化学染色方法的原理（1）荧光抗体染色的直接法原理（将已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗体，再用这种荧光抗体或抗原作为探针检查细胞或组织内相应抗原或抗体） 对照实验（检查抗原或抗体方法）（2）间接法原理（特异性抗体及细胞标本反应，随后用缓冲盐水洗去未及抗原结合的抗体，再用间接荧光抗体及结合在抗原上的抗体结合，形成抗原-抗体-荧光抗体的复合物。） 对照实验双层法、夹心法（先用特异性抗
28、原及细胞或组织内抗体反应，再用此抗原的特异性荧光抗体及结合在细胞内抗体上抗原相结合，抗原夹在抗体及荧光抗体之间）十七、计算机图象分析的应用1.基本概念（对图像分析包括定性和定量。病理学图象的定量分析：用量化的方法以数字的表达形式对图像中各种结构信息的定量描述，以及在此基础上对图像含义所做的定量分析、推理、判断、概括。）2.计算机图象分析系统（定量病理学测试和分析的重要工具。计算机功能在图像分析方面的补充。）5.应用中应注意的问题（设计在前、测试在后；不等于体视学测试设计；注意测试标本的代表性；测试方法和计算公式的适用条件；先用参数的局限性；正确理解和解释测试参数及结果的意义；多种参数的联合应用
29、；切片上对DNA进行定量存在不足等）十八、病理档案信息资料管理1.病理信息计算机管理的必要性和迫切性2.病理档案资料分类（1）常规类资料外科检验资料尸检资料细胞学资料快速检验资料动物实验资料(2)交流类资料各类读片资料(地区性省、市、地区）专科读片资料专家疑难病病例讨论院外会诊资料（3）科研类资料（4）教学类资料（5）文书类资料（6）音像类资料（7）仪器及试剂档案3.病理档案资料管理的现状 （1）手工管理（2）计算机单机管理（3）计算机网络化管理4.病理信息计算机管理系统的基本要求（1）信息录入及修改（2）查询及检索（3）分类统计（4）当日处理（5）修改系统参数（6）资料备份及输出10 / 10