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1、 1/6 专业实践能力 一、病理解剖技术 1.病理尸体解剖的方法和步骤 1病理尸体解剖的准备 2体表检查 一体表检查称体重，量体长，观察发育、营养状况，检查体表有无黄疸，发疳，出血点，疤痕，创口等，与其部位，大小；眼、耳、鼻、口腔等有无溃疡、分泌物或液体流出，外生殖器有病变，浅表淋巴结肿大否；有无尸冷、僵、腐败现象。3胸腹腔检查 二体腔检查 1，胸、腹壁皮肤切开与剥离：根据情况，选择 Y 形、T 形或直线切口切开皮肤。切开腹膜时，先切一小孔，插入两指，再从两指之间剪开，以免划破脏。剥离胸壁皮肤时，应注意将胸肌一并剥离，但勿损与肋间肌。2，腹腔检查：检查腹腔有无积液和积气，腹膜情况，各器官的位置
2、。与关系，有无粘连，肝脾肿大否，其边缘在锁骨中线肋缘下与剑突下几厘米，检查左右横膈的高度。三胸腔检查 1、必要时在胸腔未切开前检查有无气胸。可有注射器吸水后，在第一肋间处自胸壁刺入，观察有无气体自水面下上升。2.在肋骨软骨联接线侧约 0.5cm 处，将第二肋骨到肋弓的软骨切断，紧沿胸骨后壁将横与纵隔割离，注意勿损与心包与大血管，然后检查胸腔有无积液，其量与性质，必要时涂片检查与细菌培养。3.切断第一肋骨，别离胸锁关节，将胸骨与肋骨取下，观察各器官的位置，两肺外表情况，胸腺是否已经脂肪化。锯开胸骨，看骨髓造血情况。4.自心尖部向上，作人形剪开心包，检查腔液量，心包膜壁情况，必要时取心血作细菌培养
3、。5.疑有空气体栓塞时，将心包剪开一小口，用镊子拉紧切口两侧心包膜，心包腔注满水，然后，在水上剪开右心房与肺动脉，观察有无气泡逸出，或者先结扎进出心脏的大血管，取出心脏，淹没于水下剪开右心，观察有无气泡逸出。4脏器官的取出与检查 四各脏器的取出 各器官取出前，应仔细检查周围情况与与其他器官的关系，检查有困难时，一时不能明确者，可与其它器官一并取出，然后再仔细检查。检查各器官前，应称其重量，量大小。1.心脏的取出与检查，在体剖开右心，检查肺动脉有无栓塞后，将心脏提起，从根部或心包膜壁分别剪断上、下腔静脉，于距瓣膜 2cm 处肺静脉和主动脉于距瓣膜 5cm 处，取出心脏，假设有心、血管畸形，那么应
4、将心脏连同肺脏一并取出。检查心脏增大否，外膜光滑度，有无渗出物等，心脏按血流方向剖开，测量各瓣膜的周径与左右心室的厚度。A：右心剖开法：第一步，用刀或剪将右心从上、下静脉入口处直线剖开，如欲防止破坏窦房结，从下腔静脉向上，剖至房室间沟上 1cm 处，向右心耳剪开，保持上腔静脉口完整，上腔静脉至少保存 1cm。第二步，从此线中点沿心脏右缘剖至心尖部，检查三尖瓣，并用手指检查动脉有无血栓或狭窄。第三步，从心尖部沿心室中隔剖至肺动脉，检查肺动脉瓣。B：左心剖开法：第一步，用刀或剪将左心房从左、右静脉入口之间作直线剖开，以手指检查二尖瓣是否狭窄。第二步，从此线的左端沿心脏左缘剖开至心尖剖。第三步，从心
5、尖部沿心室中隔，避开肺动脉剖开肺动脉剖开主动脉，检查二尖瓣与主动脉瓣。剖开有瓣膜病变的心脏时，应注意防止破坏有病变的瓣膜。心脏剖开后，检查心肌厚度、硬度、色泽、心膜光滑度，瓣膜周围有无增厚，与赘生物，有无狭窄或关闭不全，检查冠状动脉开口情况。2.肺脏的取出：可由肺根部将主支气管和血管切断取出，或与颈部器官一并取出。如两层胸膜间有粘连，需细心别离，勿损与肺，如粘连结实，可连同胸膜壁层一并剥离，取出肺脏。取出后检查其外表情况。切开检查肺切面的改变，有无病灶、气肿、萎陷等，肺门淋巴结肿大否，切面情况。3.颈部器官的取出：A，充分别离颈部皮肤与软组织，用长刀刺入割断舌下系带，紧沿下颌骨面向左、右尽量地
6、将下颌与舌间的软组织别离。B，将舌拉下，自硬腭后缘割离软腭，注意应将两侧扁桃体完全取下。C，将舌、咽、喉头、气管、食管、肺拉下于横膈上将食管、下腔静脉与主动脉切断，连同胸腔器官一并取出。4.腹腔与盆腔器官的取出：一般先将脾脏摘出，继之取出小肠、肾上腺、肝、胆囊、胃、十二指肠、胰，最后取出肾与盆腔器官。2/6 将脾脏提至腹腔前方，割断脾门部血管，取出脾脏。检查其大小，重量，硬度，外表色泽。切面有无外翻；有无糊状物刮下，脾门血管与脾小体、脾小梁的情况等。小肠与大肠的取出前，应检查肠系膜淋巴结与血管，找出空肠的起端，切断，自肠系膜附着处将肠割下，直至直肠处将其切断取出，肠的断端应钳紧或结扎，以免粪便
7、污染腹腔。待其他器官检查完毕后再检查肠。先量其长度，在肠系膜附着处沿纵轴剪开肠腔，检查粘膜有无病变，腔有无寄生虫等，必要时可保持肠与肠系膜的关系，并将其一并取出。十二指肠在原位从前面剪开，用手挤压胆囊：看胆道通畅否。沿胃大弯剪开胃，检查粘膜病变，将胃与十二指肠从后壁别离，与胰脏一并取出，在检查胰脏前，注意观察脾静脉有何变化。检察胰脏重量，大小，硬度，作多横切面，检查切面情况。小心别离肾上腺周围组织，取出肾上腺，别离右侧肾上腺时，将肝向上方推，注意别离与皮肤上腺相连的肝组织，肾上腺取出后，作多人横切面，检察皮质与髓质的特征，有无出血等。取出肝与胆囊前，应仔细检查胆管、门静脉、肝静脉，然后剪断肝门
8、的胆管与血管，别离镰状韧带，将门静脉与肝背部部一段下腔静脉与肝一并取出。检查肝的大小，重量，硬度，色泽，注意检查肝静脉与腔静脉，切面外翻否，小叶结构清楚否与有无其它病变。别离肾周围脂肪结缔组织，将肾提出，凸面向上剖开，注意包膜剥离要难否，检查外表的性状，切面皮质与髓质纹理是否清楚，肾盂粘膜有无病变。然后连输尿管一起取出肾脏。盆腔器官的取出：先别离腹膜与周围组织，再取盆腔器官，男性可将直肠、膀胱一并取出，结肠断端应结扎或缝合。5尸检后的修复 尸检时应尽少破坏尸体的外形，检查完毕后，应吸去体腔的血水，凡不需保存的器官，均应放回体腔，并应以木屑或其它吸水物质填塞，逢合切口。缝合时要尽量注意整副尸体外
9、形，将体表洗净擦干，包裹或穿着妥善后放入尸箱。6微生物和寄生虫检查 采取细菌培养的方法 1.心血培养标本：1.1 用无菌镊子提起右心耳，在下腔静脉入口处的上方进展烧灼消毒，用一有柄铜片在酒精灯上烧红，烧灼器官外表，面积约 2*2cm.1.2 用无菌吸管或注射器从消毒部位插入，顺下腔静脉入口推进，取血液 2-3ml 1.3 在无菌操作下，将吸取之血液立即注入无菌的肉汤培养基，或有玻璃珠的培养瓶，立即洗净吸管或注射器，以免凝固，假设在右心取不到血液，可从下腔静脉吸取。1.4 腔胸腔、腹腔渗出液，心包腔积液，必要时作细菌培养，采取液体时应尽量防止污染。采取脑脊液培养时，于尸检前用无菌手术，在第二与第
10、三腰椎间隙作穿刺，取脑脊液 2-3ml,置于无菌试管送检。1.5 肠容物培养：在回肠末端与乙状结肠下端，或病变明显处的浆膜面经烧灼灭菌后剪开，用棉花拭子插入肠腔，在粘膜面擦取粘液、渗出物粘膜，放入无菌试管或培养基送检。1.6 脏器细菌培养：脏器外表灼烧灭菌，切取不小于 2*2*1.5cm 的组织块，装无菌容器送检。1.7 脑组织作病毒别离：用无菌手术取大脑皮质，中脑，海马，脑桥组织块，每块不小于 2*2*1.5cm，以冰瓶保藏迅速送检。路途遥远者，可将检材放入无菌甘油瓶，在低温下送检。7化学和毒物检查 8尸检记录 尸体检时所见由尸检室技术人员或指定工作人员，按剖检者口述填写临时记录单，必要时摄
11、影记录，做为书写尸检记录的根底 二、病理大标本制作技术 1.大体标本的收集、取材、固定和保存 1收集(尸体解剖和活体组织检查、其次是动物实验的模型收集标本)2取材越新鲜越好，标本应仔细处理，尽可能的修掉多余的组织 3固定甲醛气饱和于水的甲醛液，浓度40%；体积10%，浓度4%的甲醛固定，10%福尔马林 4保存含血多的标本用凯氏法；胆色素用柯氏法；虐色素、脂肪等标本用甲醛 4.大体标本的装缸与封存法封存在玻璃或有机玻璃标本缸:修整标本、适当标本缸、标本支架、拴好的标本略加冲洗、封口松香蜂蜡、502胶、玻璃胶封口法 三、组织的取材、固定方法和切片技术 2.组织固定 1固定的方法单纯固定液甲醛、重铬
12、酸钾、苦味酸、升汞、醋酸、铬酸、饿酸、丙酮、三氯醋酸、乙醇和混合固定液B-5液淋巴组织、Bouin液结缔组织三色染色、Carnoy液染色体、Muller液媒染和硬 3/6 化组织、Orth液胚胎神经脂肪、PFG液肽类抗原、PLP和PLPD液糖类组织、Rossman液糖原、Zenker液细胞核细胞质三色染色、4%多聚甲醛免疫组化、甲醛钙液脂肪组织组织化学、乙醇甲醛皮下组织肥大细胞、乙醚乙醇细胞涂片、中性缓冲甲醛液免疫组化、中性甲醛液常用 2固定后洗涤：一般冲洗24h小组织210h1用水配制的固定液固定的组织洗涤法、2用含乙醇固定液固定的组织洗涤法、3特殊固定液固定的组织洗涤法 3.组织的脱水 1
13、脱水的方法：2考前须知 乙醇纯乙醇不宜过长否那么组织过度硬化丙酮收缩比乙醇更严重异丙醇、过氧己环、四氢呋喃、环己酮、松脂醇 4.组织的透明 1透明的方法2考前须知 二甲苯易使组织变硬变脆氯仿易挥发和吸收水分香柏油透明时间长松油醇、丁香油、冬青油 5.组织的浸蜡与组织处理程序 1浸蜡的方法 2石蜡的应用 3自动组织处理机的应用 4组织处理程序 人工操作程序 自动组织处理机程序 6.骨和含钙组织脱钙方法 1脱钙的方法 硝酸脱钙法：10%硝酸水溶液、硝酸10ml和10%甲醛90ml的混合液。盐酸脱钙法：盐酸8.5ml，甲酸5ml，氯化铝7g，蒸馏水100ml；盐酸和甲酸各20ml，蒸馏水100ml。
14、8.石蜡切片法 1切片前准备和黏附剂：固定后标本经脱水、透明、浸蜡和包埋后，制成蜡块。锋利的刀片；充足的经处理的载玻片和恒温烤箱，毛笔和铅笔。2切片制作方法：组织经石蜡包埋制成蜡块，用切片机制成切片的过程。3切片的考前须知：组织的固定和取材；组织的脱水、透明和浸蜡；切片；切片刀和切片机；特殊切片的制作。9.冰冻切片方法 1直接冰冻切片法：恒冷箱切片；半导体制冷冷冻切片法；甲醇制冷器；二氧化碳冷冻法。2冰冻切片粘片法：蛋白甘油粘片法；Lille明胶粘片法；乙醇明胶粘片法 四、木精-伊红染色方法HE染色 1.HE染色的方法 1人工操作程序 2自动染色机程序 3冰冻切片染色方法 2.HE染色试剂的配
15、制 1木精染液配制 Harris木精的配制：木精1g；硫酸铝钾15g；氧化汞0.5g；乙醇10ml，蒸馏水200ml；先用蒸馏水加热溶解硫酸铝钾，用无水乙醇溶解木精再倒入已溶解的硫酸铝钾的蒸馏水中，煮沸1分钟，稍冷却，慢慢参加红色氧化汞0.5g，继续加热至染液变为紫红色，用纱布盖住瓶口，用前滤纸过滤后每100ml加冰醋酸5ml。2伊红染液的配制 水溶性伊红：伊红-Y0.51g；蒸馏水100ml。先将水溶性伊红参加蒸馏水中，再用玻璃棒将伊红搅溶解后过滤，每100ml加冰醋酸1滴。乙醇性伊红液：伊红-Y0.51g；90%乙醇100ml。先将伊红溶于乙醇中，用玻璃棒研碎溶解后，每100ml加冰醋酸1
16、滴。直接用85%乙醇脱水。3分化液配制(浓盐酸0.51ml；75%乙醇99ml)4返蓝液的配制(1%的氨水)5考前须知(脱蜡、染色、脱水、透明与封胶)五、常用的特殊染色技术 1.结缔组织染色法 2Masson三色染色法 4/6 2.胶原纤维染色法 1VG染色法 2Sirius red苦味酸法 3.网状纤维染色法 1Gomori法 2Janes法 4.弹力纤维染色法 1维多利亚蓝 2醛复红法 3地衣红 4weigerts染色法 5弹力和胶原纤维双重染色法 5.肌肉染色法 1横纹肌染色法PTAH 6.糖原染色法 PAS法 7.粘多糖染色法 1Mowry阿尔辛兰-过碘酸雪夫ABPAS法 2Singh
17、阿尔辛兰地衣红法 8.黑色素染色法 1黑色素染色法Masson Fontana 2Lillie硫酸亚铁染色法 9.含铁血黄素染色法 普鲁士蓝染色法 10.胆色素染色法 Hall胆红素反响染色法 11.脱色素法 1脱甲醛色素法 2脱黑色素法 13.淀粉样物质染色法 1刚果红染色法 15.细菌染色法 1Grams染色法 2Ziehl-Neelson抗酸杆菌染色法 3胃幽门螺杆菌染色法 16.螺旋体染色法 1硝酸银染色法 2Giemsa染色法 18.乙型肝炎外表抗原染色法 1Shikata地衣红染色法 3维多利亚兰染色法 19.神经组织染色法 1神经细胞尼氏小体染色法 2神经纤维染色法 3神经髓鞘染
18、色法 4神经胶质细胞染色法 20.神经分泌细胞染色 1亲银反响法 2嗜银反响法 21.嗜铬细胞染色法 1Giemsa改进法 八、免疫细胞化学技术 2.荧光显微镜检查方法 5/6 1显微镜观察 2标本制作要求载玻片厚度0.81.2mm；盖玻片0.17mm，光洁；标本不易太厚；封裱剂常用甘油，无自发荧光，无色透明 3考前须知严格要求经行操作；暗室中进展检查；防止紫外线对眼睛的损害；检查时间每次12h为宜；标本应集中检查，节省时间保护光源；标本染色后立即检查；荧光亮度判断标准四级：“-无或可见微弱自发荧光；“+仅能见明确可见的荧光；“+可见明亮的荧光；“+可见耀眼的荧光 3.免疫酶化学的组织固定和切
19、片 1固定AMEX法，同新鲜组织冷冻切片同样的抗原保持性和石蜡切片保存的良好组织结构；机制：组织在丙酮中固定脱水，组织细胞水分逐渐被丙酮取代；继之，用苯甲酸酯取代组织的丙酮，经二甲苯置换后，石蜡包埋。微波固定，保持良好的组织结构和抗原性；适用切片的酶组化、ICC以与免疫电镜等 2切片：冰冻切片ICC研究首选和石蜡切片 4.酶的标记和染色方法 1酶标抗体法：通过共价键将酶连接在抗体上，制成酶标抗体，再借酶对底物的特异催化作用，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，在光镜或电镜下进展细胞外表与细胞各种抗原成分的定位。5.生物素-抗生物素免疫细胞化学技术 1目前广泛使用的生物素-抗生物素方法
20、生物素-抗生物素-过氧化物酶复合物技术ABC技术、桥抗生物素-生物素技术、标记生物素-抗生物素技术 2其他生物素-抗生物素染色法快速ABC法、二步ABC法、PAP法与ABC法连续应用 十四、肾活检标本制作技术 1.标本的处理标本分三局部，分两半，一半行光镜检查；另一半大部做免疫病理，小部做电镜检查。免疫荧光标本应放于滴有生理盐水的小纱布上，一同置入小瓶中送检；光镜标本即放进10%甲醛固定液中，电镜标本立即放入2.5%戊二醛于4度冰箱固定。2.免疫病理标本的制作 1冰冻制片方法：将标本置于恒冷切片机的冷冻头上，加少许OCT包埋剂，于冷室-20度冷冻切片，厚度要求34um，附贴于载玻片上，需十片以
21、上备用。3.光学显微镜的标本制作 1石蜡包埋制片：1.肾组织的固定缓冲甲醛、磷酸氢二钠和复合固定FAA固定液；室温固定45分钟 2.脱水70-80-90-95-100，每梯度两缸，每缸20分钟、透明氯仿或二甲苯，两缸每缸10分钟、浸蜡58-62度石蜡，两缸每缸30分钟、包埋 3.切片2-3um4.染色 2常用的染色方法HE染色、PAS染色、PASM染色、PASM-Masson复合染色法、纤维蛋白染色法 十五、诊断细胞学技术 1.细胞涂片、组织印片和压片的制备 1涂片质量的根本要求 2涂片方法涂抹法、拉片法、推片法 3痰涂片的制作选择有效成分用棉签等均匀涂抹于载玻片上。4.固定 1常用固定液95
22、%乙醇、乙醚乙醇固定液、Carnoy液、甲醇、丙酮 2固定方法浸入法、滴加法 5.涂片的染色方法巴氏染色、HE染色、瑞氏染色、迈格姬染色 1HE染色法质量稳定，细胞透明度好，核质比照鲜明；胞质颜色单一，不易观察胞质角化程度，不适做雌激素水平的测定。6.液基薄层细胞技术 1液基薄层细胞制片 2液基薄层细胞染色TBS分类 十六、计算机档案管理和图像分析技术 2.病理档案管理的计算机分类管理 1标本材料 2切片资料 3病理文字资料病理申请单报告单快速报告记录尸检记录会诊记录读片会记录 4蜡块资料 6/6 5电镜资料 6音像资料 十七、常用溶液配制方法 1.各种溶液的配制法 1百分浓度：每100份溶液
23、中所含溶质的份数。2体积质量浓度：以1L溶液中所含溶质的质量。3克分子(mol)浓度和当量浓度：1L溶液中所含溶质的Eq数表示的浓度。2.缓冲液与缓冲液作用 1定义：能够对抗少量强酸或强碱的而不易引起溶液PH改变的作用称为缓冲作用，具有这种缓冲作用的溶液称为缓冲液。2作用：能够对抗少量强酸或强碱的而不易引起溶液PH改变 3.缓冲液的组成 1弱酸与其对应的盐：HAc-NaAc/H3PO4-Nah2PO4/H2CO3-NaHCO3/邻苯二甲酸-邻苯二甲酸钾盐/H3BO3-Na2B4O7 2多元酸的酸式盐与其对应的次级盐：NaHCO3-NaCO3/NaH2PO4-NaHPO4 3弱减与其对应的盐：NH3-NH4Cl/苯胺-苯胺盐酸盐 4.常用的缓冲液配制方法 1Tris-Hcl缓冲液：HCL加水稀释至200ml X ml 0.2mol/L甘氨酸+Y ml 0.2mol/L HCL加水稀释至200ml 2磷酸盐缓冲液：X ml 0.1mol/L NaHPO4(14.2g/L)与Y ml 0.1mol/L KH2PO4(13.6g/L)的10ml的混合液 4柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液：5醋酸缓冲液：0.2mol/L，0.2mol/L溶液含27.22g/L