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1、血清直接胆红素血清直接胆红素DBILDBIL测定测定作业指导书作业指导书 1.1. 实验原理实验原理 直接胆红素与2,4-二氯苯胺重氮盐形成重氮化合物， 在酸性条件下呈红色。 2.2. 标本：标本： 2.1 病人准备：无特殊要求。最好用禁食的标本以减少乳 糜血的干扰。 2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。 3.3. 标本存放：标本存放：1525保存可稳定2天；28保存可稳 定7天；-20保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻 融！。 4.4. 标本运输：标本运输：常温条件下避光保存运输。 5.5. 标本拒收标准：标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保 存运输的标本。
2、 6.6. 实验材料实验材料 6.1 试剂：申能总胆红素试剂盒：141 0827170 1 试剂 试剂2 6.1.1 试剂组成 试剂1：1664ml EDTA-Na2 0.07mmol/L 氯化钠 6.6g/L 氨基磺酸 70mmol/L 试剂2：616ml 2,4-二氯苯胺重氮盐 0.09mmol/L 盐酸 130mmol/L EDTA-Na2 0.02mmol/L 6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于28，若无 污染，可稳定至失效期。试剂有效期为18个月。试剂2必需 避光保存。试剂不可冰冻。 6.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染
3、，不 能继续使用。 6.1.5 注意事项：此试剂为体外诊断用。警告！腐蚀剂！ 不要入口。避免和眼睛，皮肤或衣服接触。如果接触到， 立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟。接触到眼睛或 吞服，立即寻找医疗保护。 6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的 TruCal U校准品 对自动分析仪进行校准， 参见生化检验校准品和质控品. SOP文件 6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件 7.7. 仪器仪器：奥林巴斯AU1000生化分析仪 8.8. 操作步骤操作步骤 8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分 析仪项目测定参数.SOP文件 8.2 仪器操作步骤：参见生
4、化检验奥林巴斯AU1000生化分 析仪操作规程.SOP文件 检验结果的判断与分析检验结果的判断与分析 10.10. 质量控制：质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与 II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为 失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化 室室内质控操作规程.SOP文件。 11.11. 计算方法计算方法 以TruCal U复合校准品校准仪器后，在 病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果 无需手工计算，以 mol/L报告。手工测定计算方法为： Au 直接胆红素(mol/L) =-校准液浓度 As 12.12. 参考值范围：参考值范围：6.8
5、mol/L 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。 根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。 13.13. 临床意义：临床意义：胆红素是血红蛋白的降解产物。游离胆红 素非极性很强，几乎不溶解于水。在血液中与白蛋白形成 复合物由脾脏向肝脏运输。在肝脏中，胆红素与葡萄糖醛 酸结合,生成可溶性胆红素葡萄糖醛酸酯由胆管排入肠道。 溶血（肝前黄疸） 、实质的肝损伤（肝性黄疸）和胆管 堵塞（肝后黄疸）都会导致血液胆红素增高，形成高胆红 素血症。人群中常见先天性慢性高胆红素血症，称为 Gilbert综合症。由于胆红素降解酶的功能滞后以及出生后 红细胞破碎增多，使6070%的婴儿血液出现总
6、胆红素增高。 常用的胆红素检测方法能检测总胆红素和直接胆红素。直 接胆红素的测定主要检测水溶性的结合胆红素，因此可以 根据总胆红素和直接胆红素的差来估计游离胆红素的含量。 14.14. 操作性能操作性能 14.1 线性范围：1.7171mol/L 14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法 5，AU1000批内精密度小于4%或SD0.04，总精密度小于5% 或SD0.07。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的 NCCLS的规则。 批内精密 度 n=20 x (mol /L) s (mol /L) CV (%) 批间精密 度 n=20 x (mol/ L) s (mol/ L
7、) CV (%) 样品 1 6.00.203.34 样品 1 6.20.193.12 样品 2 12.80.121.00 样品 2 13.00.191.46 样品 3 36.40.260.71 样品 3 35.40.461.30 14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒 (x)，同时对85个样品进行DBIL检测，将检测结果作方法学 比较，其统计结果如下： y=0.95x+0.68mol/L；r=0.995。 14.4 灵敏度：1.7mol/L。 14.5 病人结果可报告范围：1.7171mol/L 1515 超出范围结果处理超出范围结果处理 本法线性上限为171mol/L。样
8、品 测定值超过上限时，应将样品用0.9氯化钠溶液作1:1稀 释，重新测定，结果乘以2。 16.16. 病危报警值的处理病危报警值的处理 无。 17.17. 方法局限性方法局限性 17.1 本法线性上限为171mol/L。样品测定值超过上限时， 应将样品用0.9氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果 乘以2。 17.2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度1704mol/L， 甘油三酯浓度22.6mmol/L时没有观察到干扰。血红蛋白 浓度0.50g/L将产生干扰。 18.18. 补救措施：补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进 行维修。 19.19. 参考文献参考文献： Tietz, N.W.
9、(Ed), Fundamentals of Clinical Chemistry, 3rd Edition, W.B. Saunders,1987. Van den Bergh, A. and Mueller, P., Biochem Z,77:90,1916 NCCLS, Interference Testing in Clinical Chemistry, EP7-P,1986. Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 4th Edition, AACC Press, 1995. NCCLS, Evaluati
10、on Protocol EP5-T2,1992. Rand, R. N., DI Pasque, A., Clin Chem 1962; 8: 570 Henry, J., Cannon, D. C., Winkelmann, J. V., Clinical chemistry, principles and technics, Harper & Row Publishers Ins., Hagerstown Maryland, 1974:1042 Thomas, L.: Labor and diagnose, 4th edition, Die Medizinische Verlagsgesellschaft, Marburg, 1992: 235 20.20. 其他：其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后 按检验科废物处置管理规定执行。