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1、血血清清乳乳酸酸脱脱氢氢酶酶 L LD DH H 速速率率法法 测测定定作作业业指指导导书书 1 1. . 实实验验原原理理 VITROS LDH 试剂是一种干燥，多涂层的，在聚合 物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。本法测LDH 采用丙酮酸和 NADH 作底物以产生乳酸和NAD+。 将一滴 10ul 的患者样品滴于干片上，样品就被分 布层均匀地分布并渗透到下面的试剂层。乳酸脱氢酶催 化丙酮酸和 NADH 生成乳酸和 NAD+。用反射强度变化 测出 NADH 的氧化率，再将其转化成乳酸脱氢酶的活力。 测定方式：速率法 波长： 340nm 测试时间和温度： 37约 5 分钟 反应过程： LDH
2、丙酮酸 + NADH + H+ 乳酸 + NAD 2 2. . 标标本本： 2.1 病人准备：无特殊。 2.2 样品类型：血清；肝素锂 /钠抗凝血浆。 2.3 标本采集与处理： Vitros 测试血清和血浆的结果是一致的。而其它一 些方法由于在低速离心时血浆中血小板造成的污染，会 使血清和血浆的测试结果有明显差异。由于Vitros LDH 干片对完整血小板内的LDH 不敏感，因此对比方 法的 LDH 结果会与 Vitros 肝素抗凝血浆的测试结果不 一致。 样品采集后 1 小时内离心，然后吸出血清。处 理样品时要将其当成生物污染品。 3 3. . 标标本本的的存存放放 ：血清、血浆室温下最多2
3、 天；不可 冷冻保存。 4 4. . 标标本本的的运运输输 ：样品要放在带盖的容器内以防污染和 蒸发。 5 5. . 标标本本拒拒收收的的标标准准 ：污染、溶血标本不能使用。 6 6. . 试试验验材材料料： 6.1 测试 AST 所需的物品包括： Vitros 化学定标物 Kit3；Vitros 特制质控液； Vitros 7%BSA 稀释液。 强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测 试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。 6.1.1 试剂组成：干片成分： 反应成份是 NADH 和丙 酮酸钠。其它成份有聚合物颗粒，粘合剂，缓冲剂，表 面活性剂，聚合物交叉连接剂和稳定剂。干片标记
4、：试 剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有 效期限和储藏温度。 6.1.2 试剂准备 从冰箱中取出干片盒，在将干片盒 打开封装并装入仪器内的干片储藏器之前必须使其达到 室温状态 1828。因此从冰箱中取出的试剂盒至少 要在室温下要放置60 分钟，而冷藏的试剂盒至少要在 室温下放置 30 分钟。去除内包装后立即将干片盒放入 仪器的储藏器中。说明：在试剂盒达到室温后的24 小时之内必须将其装入仪器中。 6.1.3 试剂稳定性与贮存 未开封的干片盒：存储在 -18或低于该范围。说 明：为了缩短预温时间或者当冷冻空间有限时，未开封 的试剂盒在 28（3646oF）下最多可以保存4 周。 在
5、机内干片储藏器中的干片盒：在仪器上放置时间 不能超过 2 周，否则要更换新试剂。当仪器关闭时间不 超过 2 个小时时，可将干片盒留在储藏器中。出现以下 情形要做质控检测：仪器关闭时间超过2 小时；再次 装载从仪器储藏器中取出的干片盒。如果储藏正确， Vitros LDH 干片可保质到包装盒上标明的有效期限。 参见 VITROS 250 干化学分析仪试剂稳定性及贮存. SOP 文件。 6.1.4 变质指示：超过有效期的试剂干片不能使用。 6.1.5 注意事项：为避免干片盒打开以前其内包装受损， 不能摔打干片盒；不要让尖利物刺入内包装。 6.2 校准品：用 Vitros 化学定标物 Kit 3。血
6、清、血 浆都用相同的定标液，不过各自的SAVs 值不同。有 关标准液的配制，使用及保存的配制，保存和稳定的详 情，可参阅 VITROS250 干化学分析仪校准品和质控品. SOP 文件。 6.3 质控品：使用 Vitros 特制的质控物品；若使用 其它的一些质控物品，当与别的AST 测试方法比较时 就会出现差异，如：用人血清/血浆混合物分离制成的 质控物品；含有高浓度防腐剂，稳定剂和其它化学添加 剂的质控物品；猪或牛血清质控品的淀粉酶值会偏低， 还会因测试方法不同而变化；酶的活性可能会由于酶源， 稀释温度和复溶活化时间的不同而发生变化；乙烯乙二 醇作稳定剂的质控物品不能使用。 有关质控液的配制
7、，保存和稳定的详情，可参阅 VITROS250 干化学分析仪校准品和质控品.SOP 文件。 7 7. . 仪仪器器： 美国强生厂家 VITROS250 全自动干式生化 分析仪。具体测试程序请参阅操作手册的介绍。 8 8. . 操操作作步步骤骤： 将试剂复温后直接放入仪器，样品编程， 仪器 5 分后自动打印结果。具体测试程序请参阅 VITROS250 操作手册 .SOP。具体定标程序：参阅操作手 册的相关章节内容。何时进行定标：在维护和保 养时更换了仪器的重要部件。质控结果持续超出 线性范围内时，详情参阅操作手册。管理条例上 指定的时间，在美国， CLIA 要求至少每 6 个月定标一 次。 9
8、9. . 检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析 1 10 0. . 质质量量控控制制： 操作建议： 将质控物质当成生物污染 品来处理；将质控液与患者样品同时进行测试；每天至 少做一次质控以检测仪器运行状况；选择质控浓度来检 查与临床的相关性；其它详情参阅操作手册质控章节的 有关内容。有关质控操作的常规性条例可参照国际质控 检测（ IQCT）的内容。在每一批标本中都应把质控血清 做为未知标本进行分析，以2S 为质控警告限， 3S 为 失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生 化室室内质控操作规程 .SOP 文件。 1 11 1. . 计计算算方方法法： 以用 Vitros 化学定标物
9、校准仪器后， 在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结 果，以 U/L 报告。 1 12 2. . 参参考考值值范范围围 国际单位 (U/L) 成人 313-618 此参考范围是测试189 位健康成人，然后取靶值 附近 95%的结果计算所得。参考值因性别、年龄、饮食 和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个 实验室应建立自己的参考值。 1 13 3. . 临临床床意意义义： 乳酸脱氢酶是一种存在于人体细胞液 中的酶，它在 NADH 的作用下催化丙酮酸还原成乳酸。 肿瘤，低氧性呼吸性心脏病，心肌梗塞，溶血性贫血， 巨幼细胞性贫血，肝硬化，肾阻塞，外伤，肌肉受损， 肌肉营养不良，休
10、克和低血压都可造成LDH 增高。 LDH 在心肌梗塞发作后12 小时内开始升高， 2-5 天后 恢复正常。 1 14 4. . 操操作作性性能能 14.1 线性范围：血清： 100-2150U/L。 14.2 精密度：在 Vitros 250 生化仪上用质控液来测 精密度。结果反映了该方法的精密度。当仪器维护，周 围环境，干片处理和保存，质控液的复溶以及样品处理 等方面发生变化都会影响结果的重复性。 日间精 密度 血血清清 x (U/L) s (U/L) CV (%) 室间精密 度 n=20 天 x (U/L ) s (U/L ) CV (%) 样品 1 n=80 53611.4 样品 1 5
11、3618.5 3.4 样品 2 n=80 164325.1 样品 2 1643 42.5 2.6 *日间精密度是将 2 至 3 份相同的样品在一天中运 行两次，然后对测试结果进行统计计算。 *室间精密度是用同一个批号的干片每周定标一次， 然后对测试结果进行统计计算。14.3 方法学比较： 用 Vitros700 仪器和 Buhl 方法参考方法分别测试 相同血清样品，对比结果显示Vitros 方法的准确度 良好。用 Vitros250 仪器与 Vitros700 仪器测试相同 的血清样品，对比结果显示Vitros250 方法的准确度 良好，血清： Y=1.01X+9.5（r=0.999，N=80
12、，范围 103-2085U/L） 。 14.4 灵敏度：本试剂的检测下限为血清为100U/L。 14.5 特异性：经测试，以下物质对Vitros LDH 干片 法均无干扰（偏差 12g/dl(120g/L)的多发性骨 髓瘤患者样品中免疫球蛋白占很大比例，会使LDH 的 测试结果偏高。因此在测试前先要将该样品用等量的生 理盐水稀释，再将结果乘以2，就得到原始样品中 LDH 的活性。出现 KE 代码的结果可能是因为样品中胆 红素，总蛋白或别的成份浓度太高引起的，此时真实的 LDH 活性可能是正常或略有偏高。用等量的 Vitros7%BSA 稀释样品，如果是总蛋白太高，可以用生 理盐水稀释，再将结果乘以就得到原始样品中LDH 的 活性。出现 TR 或 DP 代码，通常是 LDH 活性太高。在 一份样品中加入两份7%BSA，再将结果乘以 3，就得 到原始样品中 LDH 的活性。有些药物和患者的自身状 况也会影响 LDH 的测试值。 1 18 8. . 补补救救措措施施： 仪器出了故障可联系仪器厂家，进行 紧急修理，如一时不能修好，用OLYMPUS AU1000 生 化分析仪测定病人标本。 1 19 9. . 参参考考文文献献 强生厂家提供的方法学手册 2 20 0. . 其其他他： 仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集 后按检验科废物处理 .SOP 文件处理。