《耐力训练时脂肪甘油三酯脂肪酶与工作肌糖代谢和线粒体密度——基于atgl基因敲除小鼠的研究-宋刚.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《耐力训练时脂肪甘油三酯脂肪酶与工作肌糖代谢和线粒体密度——基于atgl基因敲除小鼠的研究-宋刚.pdf（8页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、第51卷第10期2017年10月武汉体育学院学报Journal of Wuhan Institute of Physical EducationV0151 No100ct2017耐力训练时脂肪甘油三酯脂肪酶与工作肌糖代谢和线粒体密度基于ATGL基因敲除小鼠的研究宋 刚1,2,3，张国栋12，雷小灿4，彭 莉12，李 莉4，王雪冰3(1西南大学体育学院，重庆400715；2国家体育总局体质评价与运动机能监控重点实验室，重庆400715；3广西大学体育学院，广西南宁530004；4遵义医学院基础医学院组织与胚胎学教研室，贵州遵义563003)摘要：目的：(1)观察ATGL基因敲除小鼠耐力训练时胰岛
2、素抵抗、工作肌糖转运蛋白及线粒体密度的变化；(2)测定Akt、PKC、PPAR_a蛋白激活及含量，探究其与胰岛素抵抗、工作肌糖转运蛋白及线粒体密度的变化之间的关系。方法：ATGL、ATGL州一和CA7BI6J小鼠跑台耐力训练训练7天，测定小鼠体重、肌糖原、血糖、血胰岛素和胰岛素抵抗，蛋白印记法测定腓肠肌和比目鱼肌GLUT一4(内外膜)、pAkt、Akt、声-PKC、PKC含量和PPAR-Q水平。结果：(1)运动训练后，腓肠肌和比目鱼肌糖原含量、HOMAIR指数存在基因类型、运动训练的差异(Po05)。结论：耐力训练时，ATGL通过上调Akt和PKC促进胰岛素敏感性和改善胰岛素抵抗；ATGL上调
3、PPAR-a起到促进线粒体含量。关键词：运动生物化学；脂肪甘油三酯脂肪酶；ATGL基因敲除小鼠；肌糖代谢；线粒体密度；跑台训练；胰岛素抵抗；耐力训练中图分类号：G8047 文献标识码：A 文章编号：1000520X(2017)10006808Adipose Triglyceride Lipase and Muscle Glycogen Metabolism，Mitochondrial Density and SignalMolecules during Endurance TrainingA Study Based on ATGL Knockout MiceSONG Gan912u，ZHANG
4、 Guodon91”，LEI Xiaocan4，et al(1College of PE，Southwest Univ，Chongqing 400715，China；2Key Lab of Physical Fitness Evaluation andSports Function Monitoring，State Sports General Administration，Chongqing 400715，China；3College of Physical Education，Guangxi Univ，Nanning 530004；4Deptof Histology and Embryol
5、ogy，College of Basic Medicine，Zunyi Medical College，Zunyi 563003，China)Abstract：This study observed the effects of endurance training on insulin resistance and changes in glucose transporter-4proteinmitochondrial density in ATGL knockout mice；and determination of Akt，PKC，PPARa activation and protein
6、content in order to explore the relationship between the changes of insulin resistance，glucose transporter-4 and mitochondrial contentATGL一一，ATGL+一and C57BL6J mice ran treadmill exercise for seven days，and their muscleglycogen，blood glucose，insulin and insulin resistance were detected and protein we
7、stern blot GLUT一4，pAkt，Akt，PPKC，PKC and PPARQ levels in gastroenemius muscle and soleus muscle were determinedIt was shown that after收稿日期：20170807；修回日期：20170817基金项目：国家自然科学基金资助项目(31360254)；中央高校基本科研业务费专项资金资助项目(SWUl609025，SWUl709116)。第一作者简介：宋刚(1977一)，男，湖南双峰人，博士，教授。研究方向：运动、代谢与内分泌。exercise training，the g
8、lycogen content and HOMAIRindex of gastrocnemius muscle and soleus muscle weredifferent in genotype and exercise training(P005)It could be concluded that ATGL promoted insulinsensitivity and insulin resistance by increasing Akt and PKC during endurance training，and ATGI。promoted the contentof mitoch
9、ondrial by PPARt1Key words：adipose triglyceride lipase；ATGL knockout mice；inositol metabolism；mitochondrial density；signalmolecule；treadmill exercise：insulin resistance脂肪甘油三酯脂肪酶(adipose triglyceride lipase，ATGL)作为一种新的水解脂肪的限速酶被发现。此酶催化脂肪水解的起始步骤。ATGL在小鼠和人的脂肪组织中表达非常高1。后来发现，HSL和ATGL在肌肉中也存在表达2。人ATGL基因在染色体
10、llpl55，有504个氨基酸，氨基酸序列与小鼠的同源性高达86，分子质量为56kDa。小鼠的ATGL基因位于染色体7F5上，长度为60kb，有9个外显子，其mRNA为20kb，翻译出来的蛋白有486个氨基酸，分子质量为54kDa。动物中也可找到相关同源基因。小鼠ATGL基因定位于7F5染色体，有9个外显子和8个内含子，其长度为60kbE 4I。此酶具有较高的底物特异性，抑制ATGL活性能明显降低脂肪水解。可以肯定的是，ATGL和HSL都是催化哺乳动物脂肪组织中储备的脂肪的关键酶1。ATGL是启动脂肪水解的第一步。也就是从甘油三酯(TAG)一甘油二酯(DAG)+FA，而HSL和甘油单酯酶(MG
11、L)主要各自作用于甘油二酯和甘油单酯，释放两个脂肪酸分子和一个甘油分子5。ATGL对骨骼肌起的诸多生物学作用，可能通过其代谢产物(长链脂酰一CoA，神经酰胺、甘油二酯)来现实。游离脂肪酸做为ATGL、HSL水解脂肪的产物，除了能对能量代谢的作用，还参与了许多细胞过程，如肌细胞内的线粒体生成过程6。其中过氧化物酶增殖体激活受体(peroxisome pr01iferator-activatedreceptors，PPARs)配体，属于核激素受体超家族，作为脂肪酸激活转录因子7。其中之一的PPAR-a在骨骼肌中高度表达，激活它会上调其下游基因的表达，参与脂肪酸|3一氧化7。实际上，用PPARa配体
12、可以重新开启骨骼肌基因组，活化脂肪氧化作用。骨骼肌中，ATGL也可以上调脂肪代谢，通过逆转录ATGL过量表达增加脂肪酶活力，氧化脂肪源的脂肪酸，增多细胞内脂肪酸量2。有趣的是，PPAR-a的靶基因是UCPl，PGC-la，PDK4，CPTl和柠檬酸合成酶，增加肌管ATGL表达，会增加脂肪酸的氧化活力。通过将ATGL电刺激注入大鼠骨骼肌也发现相似的结果7I。IMTG在ATGL和HSI。的作用下，水解为脂酰一CoA、神经酰胺(ceramide)和甘油二酯等物质。通过信号分子蛋白激酶B(protein kinase B，PKB或ALT)，蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)和PPA
13、Ra对其下游的葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter-4，GLUT4)转膜和表达，线粒体生物合成产生调节作用，有助于改善胰岛素抵抗和促进胰岛素敏感性。破解脂肪合成和水解的关系，可以帮我们深入了解胰岛素抵抗和代谢病之间机制；ATGL作为其中的关键酶，具有重要的研究价值。ATGL是运动时脂肪供能的关键因素，ATGL叫一小鼠运动能力显著下降，说明ATGL在运动训练供能起了重要的作用。这让我们猜测ATGL在脂肪动员及随后的脂肪酸氧化代谢适应中起了重要的作用。因而，如下方面有待进一步的研究探究耐力训练时，工作肌的ATGL出现适应性变化对工作肌能量代谢适应之间的关系。1材料与方法11 小
14、鼠的制备委托南京大学一南京生物医药研究院从美国JAX实验室(The Jackson Laboratory，JAX，StockNo：J019003 B6；129P2一Pnpla2tmlRzeJ)引种3对ATGL州小鼠(杂合子，小鼠背景均为C57BI。6背景)代为繁殖，并冻存精子保种。从2015年8月至2016年2月的繁殖(含进口3对ATGL叫一小鼠(B6背景)经隔离检疫)。繁殖过程利用体外受精(IVF)技术完成，其步骤如图l所示。经过近7个月的繁殖，获得10只纯合子ATGL叫小鼠(7只雄鼠)，35只杂合子ArGL州小鼠(20只雄鼠)，66只野生型4mL州+小鼠(24只雄鼠)。12分组及运动训练方
15、案按随机对照原则将小鼠进行分组：7只雄纯合子随机分为运动组E1(ATGL叫，4只)和对照组C1(ATGL_，3只)，10只杂合型随机分为运动组E2(ATGL+广，10只)，10只野生型随机分为运动组E3(ATGL州十，10只)。运动组按以下方案开展运动训练7天，运动训练在ZHPT型实验动万方数据70 武汉体育学院学报 第51卷l进口小啊矗朋鲒Il柬复查攘幕因重I 围I安捧1-2蠢I、，F1I善较篇只受体l围圈l捡舅合格进入生产l区簟佗曩围困 。围图1 ATGI。“一小鼠的制备流程物跑台(安徽正华生物仪器设备有限公司，中国)上完成。具体训练方案如下：纯合子运动组E1：纯合子每天5坡度16 mmi
16、n训练15min，训练期时长7天。杂合型运动组E2：杂合型每天5坡度16mmin训练25min，训练期时长7天。野生型运动组E3：野生组每天5坡度16mmin训练45min，训练期时长7天。对照组(C1)正常饲养，不进行训练。13取材小鼠运动训练后次日，并禁食8小时，采用腹下注射水合氯醛麻醉，采用摘眼法留取小鼠血样，4度静置40分钟，3 000rpm离心15分钟，提取血清，置于一80度保存。同时，冰上操作解剖分离小鼠骨骼肌取双侧腓肠肌和比目鱼肌，右侧腓肠肌和比目鱼肌用来测定相关的指标。小鼠左侧腓肠肌和比目鱼肌直接放人预冷的骨骼肌线粒体提取介质。2指标测定与方法21 小鼠体重、肌糖原、血糖、血胰
17、岛素和胰岛素抵抗的测定小鼠测定体重是编号逐个进行。先将电子秤固定好，将小鼠用开口塑料瓶装入进行体重测定。腓肠肌和比目鱼肌肌糖原含量测定采用葸酮法测定，仪器为721型紫外分光光度计，试剂盒购自南京建成生物有限公司。血糖采用葡萄糖氧化酶一过氧化物酶法测定血清葡萄糖浓度。血胰岛素采用millipore公司的鼠胰岛素酶联免疫试剂盒测定。胰岛素抵抗指数(hometasis model assessment，HOMAIR)采用胰岛素稳态模型评估法(H()MAIR)进行计算。其计算式为HOMAIR=FINS(pmol1)FBG(mmol1)135(FINS：空腹胰岛素，FBG：空腹血糖)。22 买验取材训练
18、结束后次日8：00，在禁食状态下，小鼠按分组进行断头处死，静置收集血液10分钟，分置按实验要求离心制备血清，分别取左下肢腓肠肌和比目鱼组织，以上取材操作在冰上操作完成。各约19用生理盐水洗干净后，用锡纸包好迅速放入液氮中速冻，转置一80超低温冰箱冻存，待测。23细胞内外膜匀浆的分离将孵育后的肌肉丝浸入含250mmolL蔗糖、50mmolL Tris和02mmolL EDTA的o溶液中，剪碎，匀浆，在4，以9 000rmin离心10min。保留上清，取沉淀，再匀浆、离心，反复3次。全部上清在4以190 000g超离心lh。取沉淀铺于25、30、35的蔗糖梯度上，4以150 000g超离心16h，
19、于35蔗糖层上得到细胞内膜悬浊液，25蔗糖层上得到细胞外膜悬浊液一8。24蛋白印记法(Western blot)各取小鼠肌肉细胞内膜和外膜50tg，用10SDSPAGE电泳，电转移法将蛋白转至硝酸纤维素膜上，封闭后加入GI。UT4多克隆抗体孵育过夜。小鼠肌肉组织(Ilt肠肌和比目鱼肌)约50mg加入5009L RIPA裂解液中，裂解组织。并添加PMSF蛋白酶抑制剂，终浓度为100ugmL，在冰上裂解30分钟后，以防止蛋白降解。匀浆后离心(12000rmin)30min，取上清，取上清保存于一20备用。上清按体积比加入4的缓冲液，再把混合液煮沸变性10分钟；再将变性后的蛋白进行SDSPAGE(1
20、0分离胶)电泳跑胶分离，电泳后使用伯乐半干转印系统，将蛋白转移到硝酸纤维素膜上；再放置于5脱脂牛奶室温封闭45分钟，然后用TBST冲洗3次，每次10分钟，抗体用一抗稀释液(1：500)稀释后，4冰箱孵育过夜；第2天，用TBST彻底洗膜3次，每次10分钟，山羊抗兔IgHRP二抗室温孵育1小时，再用TBST彻底洗膜3次，硝酸纤维素膜加ECL化学发光液，再用伯乐成像系统进行成像，用Imagelab软件进行分析试验结果。后续方法同上，内参为GAPDH。使用抗体及有关信息如下：GLUT一4(50 kDa，鼠单克隆抗体，货号：2213S；Cell Signaling公司，美国)，p PKC(80kDa，兔
21、抗，货号No9371；Cell Signaling公司，美国)，PKC(115kD，兔抗，货号：No2051；CellSignaling公司，美国)，PPARa(55kDa，兔多克隆抗体货号：WL00978，Novus Biologicals公司，美国)。25线粒体含量DNA分离与定量实时线粒体的聚合酶链反应分析。基因组DNA(gDNA)分离培养。翌啬万方数据第10期宋刚，张国栋，等：耐力训练时脂肪甘油三酯脂肪酶-bT作肌糖代谢和线粒体密度基于ATGL基因敲除小鼠的研究 71使用QIAGEN DNA提取试剂盒小鼠组织(Qiagen公司，希尔登，德国)相关内容线粒体DNA(mtDNA)澳1定实时
22、定量聚合酶链反应(qPCR)。根据NCBI数据库中上小鼠16S rRNA和Hexokinase 2基因的序列，荧光定量引物参考周磊的报道，线粒体DNA与核DNA比例(nDNA)反映了线粒体的浓度9。引物序列见下表。引物由上海生工生物公司合成。26统计方法用平均数标准差(Xsd)表示数据，经正态性检验后，统计学方法采用t检验分析纯合子ATGL叫运动组与对照组的差异，单因素方差分析(One-WayANOVA)分析运动组E1，E2，E3之间的区别，事后检验(post-hoc)使用LSD法，使用统计软件SPSS 220软件进行处理，图由sigmaplot 12软件生成。显著性水平为o05，非常显著性水
23、平为o01。3结果31体重、肌糖原、血糖、血胰岛素和胰岛素抵抗如表1所示，运动训练后，体重指标在运动组内和纯合子运动组与纯合子对照组之间不存在差异(Po05)；腓肠肌和比目鱼肌糖原含量在野生型(ATGL州十)运动组E3组和杂合子(ATGL+)运动组E2组显著高于纯合子运动组E1(P005)，纯合子运动组显著低于纯合子对照组(P005)。HOMAIR指数野生型(ATGL+十)运动组E3组显著低于纯合子运动组E1(Po05)。如图3所示，运动训练后比目鱼肌外膜GLU，r4蛋白表达在三种基因型运动组中对运动训练出现的反应比较一致，差异不具有显著性(Po05)；比目鱼肌内膜GLUT4蛋白表达在纯合子(
24、ATGI。)运动组出现最高值(Po05)。万方数据72 武汉体育学院学报 第51卷33 GI。UT4蛋白在比目鱼肌内、外膜的表达外膜GLUT4内膜GLUT-4，日、GLUT4S0kDa50kDa50kDaGAmH E三三三三三三三 38kDa外膜GLUT一4内膜GLUT一4思GLUT4GAPDH50kDa50kDa50kDa39I【Da2 I,NGLLT 内4；iCkCT 4 总Gl。L。Tl图3 比目鱼肌GLUT4蛋白表达注：C1：纯合子对照组(ATGL一)，E1：纯合子运动组(ATGL一)，E2：杂合子运动组(ATGL+ )，E3：野生型运动组(ATOL“+)#，与C1组相比，PoJco=
25、o-Ix工室55laZOj等0lhllo：罂0b5#ld斌圆戳揣醛进_*M霍i蕊*8删M山u幢蒜而幽万方数据第10期宋刚，张国栋，等：耐力训练时脂肪甘油三酯脂肪酶与工作肌糖代谢和线粒体密度基于ATGL基因敲除小鼠的研究 73合子运动组E1(PO05)。比目鱼肌总Akt蛋白水平野生型运动组显著高于纯合子运动组(Po05)。36腓肠肌蛋白激酶C(PKC)及磷酸化蛋白的表达如图6所示，运动训练后，通过方差分析和事后比较，腓肠肌蛋白激酶C(PKC)蛋白磷酸化水平野生型运动组E3显著高于杂合子运动组E2(PO05)。(、1 E 1 E 2 E 3p-PKC_i=圈S0kDa总PKC E三三三三习115k
26、DaGAPDH E三三三三司 38kDap-PKC 总I，KC图6腓肠肌蛋白激酶C(PKC)蛋白及磷酸化蛋白表达注：C1：纯合子对照组(ATGL )，E1：纯合子运动组(ATGLl一)E2：杂合子运动组(ATGI。一)，E3：野生型运动组(ATGL+)。，与C1组相比，P005)。p-PKC总PKCC l E 1 E2 E3E三三三三习 80kDa115kDa38kDa。P【 总1KC图7 比目鱼肌蛋白激酶C(PKC)蛋白及磷酸化蛋白表达注：Cl：纯合子对照组(ATGL )，E1：纯合子运动组(ATGL_一)，E2：杂合子运动组(ATGL一 )，E3：野生型运动组(ATGI。+7+)#，与C1
27、组相比，Po05)。(_、1 F 1 F!E3PPAR a二三三习5 5kD。GApDH E三三三三习3 SkD。图8腓肠肌PPAR-a及磷酸化蛋白表达注：C1：纯合子对照组(ATGI。一)，E1：纯合子运动组(ATGL)，E2：杂合子运动组(ATGL一 )，E3：野生型运动组(ATGL十7十)#，与C1组相比，Po05)。310腓肠肌和比目鱼肌骨骼肌线粒体密度经方差分析及事后比较发现，运动训练后，腓肠肌和比目鱼肌线粒体含量，野生型运动组(ATGL扣+)E3显著高于纯合子运动组(ATGI。一)E1(Po05)。4讨论2004年，Zimmermann在科学杂志发表论文，在脂肪细胞中首次发现还存在
28、有第二个水解脂肪的限速酶 脂肪甘油三酯脂肪酶(adipose triglyceridelipase，ATGI。)，此酶催化脂肪水解的起始步骤。ATGL在小鼠和人的脂肪组织中表达非常高。一。近年来，又有两篇科学杂志对其进行了报道。2006年，报道ATGI。一小鼠骨骼肌中存在急性脂肪积聚的现象_1旷。Rudolf Zechner及同事在j、鼠巾证实脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)在产生癌症相关性恶病质中起着关键的作用11I。这表明ATGI。具有广泛的生物学效应。小鼠骨骼肌ATGL的过量表达会导致IMTG储备下降，当下调ATGL表达会引起IMTG储备增加的作用2。2009年研究表明，ATGI一小鼠在正
29、常生活中出现全身性的代谢紊乱，血浆游离脂肪酸水平降低。在禁食时，ATGL一小鼠糖氧化速率增加，引起肌糖原和肝糖原储备耗竭，这提示在正常生活的环境中，ATGI。 小鼠会出现脂肪代谢紊乱一。通过ATGI。基因敲除(ATGL一)小鼠的观察，可以深化我们对ATGI。下游产物生物学效应的了解。Guenter Haemmerle报道体重方面，ATGI。1一小鼠较野生型小鼠要重，其原因可能是ATGI。一小鼠出现脂肪堆积的现象1。在我们的研究发现，训练对ATGI。基因组不同的小鼠体重影响并不显著；训练与否，对ATGI。 小鼠体重影响也不大。与GuenterHaemmerle报道的结果不同，可能的原因是其选择用
30、雌性ATGI。一小鼠，而本研究可能使用雄性ATGL 小鼠有关。肌糖原在运动组中出现了基因型的差异和纯合子出现对运动训练的差异，且没有快慢肌的差异。血糖与血胰岛素在野生型运动组ATGL+一显著低于纯合子运动组(ATGI。一)。由于血糖与血胰岛素数学简单积的H()MAIR指数，出现基因型的差异和纯合子出现对运动训练的差异。目前，骨骼肌ATGI。蛋白表达与胰岛素抵抗是否存在关联；安静状态和运动训练对骨骼肌ATGL蛋白表达与胰岛素抵抗之间关系仍不清楚。有人提出骨骼肌ATGL蛋白水平变化与胰岛素抵抗没有相关性L1 2|。但在ATGL。小鼠上发现了一个非常有趣的现象，尽管ATGI。一小鼠出现脂肪的积聚，但
31、与野生型小鼠相比却更具有胰岛素敏感性，进行高脂膳食干预也不能逆转1 3I。在肝脏中，也发现ATGI。一小鼠出现了胰岛素敏感性1 4。ATGI。与胰岛素抵抗之间，出现的结果并不如人们所期待的那样，ATGI。与胰岛素抵抗呈负关联性。尽管如此，只能说明安静状态，骨骼肌ATGL与胰岛素之间无相关性。而我们的研究发现，耐力训练后野生型ATGL+一体现为胰岛素抵抗指数最低，纯合子运动组显著低于纯合子对照组。表明ATGL基因表达与胰岛素抵抗呈负相关，而运动训练有助于减低ATGI。一小鼠的胰岛素抵抗。GLUT4功能是影响胰岛素抵抗的关键因素。清华大学颜宁教授报道了人的葡萄糖转运蛋白GLUTl4在大肠杆菌中的同
32、源蛋白XylE的晶体结构，并且运用生化手段对其T作机理进行了研究。这类葡萄糖转运蛋白家族(glucose transporters，GI。UTs)包含多个成员，其中科学家对GLU7n、GI。UT2、GLUT3、GLUT4这四个蛋白的研究最为深人；GI，UT4是肌肉和脂肪组织的主要葡萄糖转运蛋白，且证实与多种人类疾病的发生密切相关，如婴儿癫痫发作、FanconiBickel综合症、糖尿病、肥胖等1j。运动过程骨骼肌摄取葡萄糖的速率主要受到3个因素的影响，分别是葡萄糖运送到肌细胞的速率、肌细胞膜对葡萄糖的转运速率以及肌细胞内对葡萄糖的磷酸化。细胞膜对葡萄糖的转运相对于葡萄糖的运输和磷酸化显得更为重
33、要-61。结果发现，腓肠肌总GLUT4蛋白表达在纯和子运动组与纯合子对照组之间的差异不具有显著性，但腓肠肌外膜GI。UT4蛋白表达野生型运动组显著高于杂合子运动组(ATGI。+)和纯合子运动组(ATGL一)，腓肠肌内膜GLUT4蛋白表达在杂合子运动组(ATGL一)出现最高值，GLUT4蛋白表达在纯合子(ATGL )无论在内膜还是外膜运动组要显著高于纯合子(ATGI。+)对照组。比目鱼肌内、外膜，GI。UT4蛋白表达在纯合子运动组(ATGI。7一)表达最高，在野生型运动组(ATGL*十)表达最低，但腓肠肌和比目鱼肌GI。UT4蛋白在纯合子运动组外、内膜的表达比值野生型运动组(ATGL一+)显著高
34、于纯合子运动组(ATGI。 )。这提示，在腓肠肌和比目鱼肌中，GLUT4蛋白的转运在野生型运动组最为明显，揭示ATGI。基因参与腓肠肌和比目鱼肌GI。UT4蛋白的转运；运动训练对腓肠肌GI。UT4蛋白的转运具有促进功能。这与周亮等人的综述报道相一致，运动时万方数据第10期宋刚，张国栋，等：耐力训练时脂肪甘油三酯脂肪酶与工作肌糖代谢和线粒体密度基于ATGI。基因敲除小鼠的研究 75会出现肌细胞膜上GI。UT4的转位并增加对葡萄糖的转运，但其机制并不是很清楚1 6I。结果发现，运动训练后，线粒体含量腓肠肌和比目鱼肌骨骼肌腓肠肌和比目鱼肌对基因型的不同产生差异，但在纯合子运动组和纯合子对照组中没有差
35、异；提示，揭示ATGI。基因参与腓肠肌和比目鱼肌线粒体含量的增加，但运动训练对腓肠肌和比目鱼肌线粒体含量没有影响。腓肠肌和比目鱼肌线粒体含量受基因类型影响，ATGI。一小鼠不存在运动训练的差异。这提示，对腓肠肌和比目鱼肌线粒体含量而言，基因型大于运动训练的影响。本研究缺少类似的研究报道。相近的研究发现，长时间有氧运动训练可以降低老年大鼠心肌线粒体DNA含量1 7|。低氧复合运动促进低氧状态下骨骼肌线粒体自噬，并促进线粒体生物合成，从而提高线粒体含量及功能_8i。这可能是运动训练方式，采集组织部位及动物类型不同，因而运动训练对肌线粒体含量出现不同的结果。5结论本研究采用ATGI。一小鼠作为研究对
36、象，目的在于揭示运动训练与工作肌ATGI。变化的下游的代谢指标及信号途径。ATGI。通过上调Akt和PKC促进胰岛素敏感性和改善胰岛素抵抗；ATGI。上调PPARa起到促进线粒体含量。ATGI。一经过繁殖的小鼠生存和生育能力差，与已知的报道相一致。经过半年的代繁，只达到七只纯合子雄性小鼠，传代产生纯合子数量偏少，是研究的限制因素之一。参考文献：r1Zimmermann R，Strauss JG，Haemmerle G，et a1Fat mobilization in adipose tissue is promoted by adipose triglyceridelipaseJScience
37、，2004，306(5700)：13836E22 Watt MJ，van Denderen BJ，Castelli LA，et a1Adipose triglyeeride lipase regulation of skeletal muscle lipid metabolism and insulin responsivenessJMol Endocrinol，2008，22(5)：120012E33 Iangfort J，Ploug T，Ihlemann J，et a1Expression of hormone-sensitive lipase and its regulation by
38、adrenaline inskeletal muscleJ1Biochem J，1999，340(Pt 2)：459654丁明，徐冲，徐国恒ATGI。调节细胞内脂质代谢和代谢相关疾病J中国生物化学与分子生物学报，2009(4)：3093155Lafontan M，Langin DLipolysis and lipid mobilization inhuman adipose tissueJProg Iipid Res，2009，48(5)：2759762 Meex RC，Hoy AJ，Mason RM，et a1ATGLmediated triglyeeride turnover and th
39、e regulation of mitochondrial capacity in skeletal muscleJAm J Phy-siol EndocrinolMetab，2015，308(11)：E960707Huijsman E，van de Par C，Economou C，et a1Adipose triacylglycerol lipase deletion alters whole body energy metabolism and impairs exercise performanee in miceJAm JPhysiol Endocrinol Metab，2009，2
40、97(2)：E5051382王涤非，蔡东梅，蒋丽娟，等2型糖尿病小鼠骨骼肌细胞葡萄糖转运因子4转位变化的研究J1中国病理生理杂志，2007(4)：818-8191-91 Zhou I。，Yu x，Meng Q，et a1Resistin reduces mitochondriaand induces hepatic steatosis in mice by the protein kinaseCprotein kinase Gp65PPAR gamma eoactivator 1 alphapathwayJ1Hepatology，2013，57(4)：138493r10Haemmerle G，
41、Lass A，Zimmermann R，et a1Defective lipolysis and altered energy metabolism in mice lacking adipose triglyceride lipaseJScience，2006，312(5774)：734711Das SK，Eder S，Schauer S，et a1Adipose triglyceridelipase contributes to cancer-associated cachexiaJScience，2011，333(6039)：233812Yao-Borengasser A，Varma V
42、，Coker RH，et a1Adiposetriglyceride lipase expression in human adipose tissue andmuscleRole in insulin resistance and response to trainingand pioglitazoneJMetabolism，2011，60(7)：1012 201 3Hoy AJ，Bruce CR，Turpin SM，et a1Adipose triglyceridelipase-null mice are resistant to high fat dietinducedinsulin r
43、esistance despite reduced energy expenditure andectopic lipid accumulationJEndocrinology，2011，152(1)：4858141 Turpin SM，Hoy AJ，Brown RD，et a1Adipose triacylglycerol lipase is a major regulator of hepatic lipid metabolismbut not insulin sensitivity in miceEJDiabetologia，201 1，54(1)：1465615Sun I。，Zeng X，Yan C，et a1Crystal structure of a bacterialhomologue of glucose transporters GI。UTl4JNature，2012，490(7420)：361616周亮，杨则宜，魏源运动过程中骨骼肌摄取葡萄糖的调节J体育科学，2006(5)：6973171赖红梅，陈彩珍，蒋慧萍有氧运动训练对老年大鼠线粒体DNA含量、呼吸链复合酶活性的影响J中国康复医学杂志，2009，24(12)：1109111118薄海，彭朋，秦永生，等低氧复合运动对大鼠骨骼肌线粒体含量的影响J中国病理生理杂志，2014(8)：146卜】466万方数据