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1、衣原体和支原体的检测一、衣原体抗原的检测衣原体抗原检测试剂盒（胶体金法）【检验原理】衣原体按其特性分为三类：沙眼衣原体（Chlamydia Trachomatis ）、鹦鹉热衣原体（Chlamydia Psittas）和肺炎衣原体（ChlamydiaPneumoniae）。沙眼衣原体有15个已知的血清型，其中12 个血清型与沙眼和生殖道的感染有关；此外3个则与性病性淋巴肉芽肿（Lymphor Ganuloma Venereun, LGV）的发生有关。沙眼衣原体抗原检测试剂盒（胶体金法）系用抗衣原体脂多糖单克隆抗体和羊抗鼠IgG多 克隆抗体分别固定于固相硝酸纤维素膜,并和胶体金标记的另一抗衣原体
2、脂多糖单克隆抗体 及其他试剂和原料制成，应用胶体金免疫层析技术，采纳双抗体夹心的形式建立的衣原体检 测方法，用于女性宫颈和男性尿道中沙眼衣原体抗原的检测。在试验过程中，将所得到的临床样品放入含有溶液A的样品处理管中，2分钟后，加入等 量的溶液B,充分混匀后滴2-3滴在检测试剂盒的加样孔中，然后等待结果消失。在检测试 剂盒的硝酸纤维薄膜的检测线上固定有抗衣原体脂多糖单克隆抗体-n ;质控线上固定有羊 抗鼠IgG的抗体。处理后的样品首先与结合了抗衣原体单克隆抗体-I的胶体金颗粒混合， 并靠毛细管作用使混合液向检测线移动。假如样品中含有沙眼衣原体抗原，则沙眼衣原体抗 原会与胶体金复合物及检测线上的单
3、克隆抗体n结合形成双抗体夹心复合物，并聚集在检测 线上显现出一条可见的红线，此即为阳性结果。无此红线则表示样品中无沙眼衣原体抗原存 在，即为阴性结果。在试纸条上的质控区（C）包被有羊抗鼠IgG,以指示试剂盒反应系统工作是否正常。质 控区（C）色带的消失表明：样品加入量充分 样品在纸条上运行正常。【主要组成成份】沙眼衣原体抗原快速检测试剂卡：内含一条包被有抗衣原体脂多糖单克隆抗体-1、抗衣 原体脂多糖单克隆抗体- II和羊抗鼠IgG试纸条。单人份铝箔袋包装。溶液A1瓶（含0.2MNaOH溶液，7.5ml）。溶液B1瓶（含0.2MHC1溶液，7.5ml）。样品处理管。其他如女性取样用消毒宫颈拭子、
4、男性取样用男用消毒拭子及计时器未在包装中供应, 请自备。【样本要求】取样的质量对沙眼衣原体的检测极为重要。沙眼衣原体的检测质量有赖于精确的样品收集技术，应使样品中含有大量的细胞成分而不只是体液。宫颈样品：使用消毒宫颈拭子，或消毒的亚麻、涤纶拭子。在取样前用此外的拭子或棉球将宫颈口 外区域的黏液抹去，将取样拭子插入宫颈管内通过鳞柱状上皮交界处，直到几乎拭子头已看 不到。旋转拭子15-20秒钟取出，不要遇到宫颈外及阴道壁。这样能保证得到更多的柱状上 皮细胞，而沙眼衣原体主要寄生在柱状上皮细胞中。宫颈样品也可用细胞刷（未供应）收集（留意：孕妇不行用此方法）。清洁宫颈口外后， 将细胞刷插入宫颈管，通过
5、鳞柱状上皮细胞交界处，停留2-3秒钟，旋转细胞刷两圈后取出， 留意不要遇到阴道壁。假如检测可以即刻进行，将取样后的拭子放入样品处理管中。男性尿道样品：尿道用拭子或细胞刷（未供应）可用于尿道取样。病人在取样前至少1小时内不要小便。 将拭子或细胞刷插入尿道2-4厘米，旋转3-5秒钟后取出。假如检测可以即刻进行，将取样 后的拭子放入样品处理管中。每个同学取无菌棉签在无菌生理盐水中潮湿后取眼角分泌物后进行衣原体的筛查。【检验方法】A.处理样品和对比：宫颈拭子、尿道拭子的处理：将样品处理管放在工作台上，加入6滴溶液A。将采样拭子放入含有溶液A的样品处理管中，室温放置，在处理过程中不断旋转并在管 壁挤压拭
6、子，使液体不断被挤出，重复多次，处理2分钟。然后加入6滴溶液B,旋转并挤压拭子，尽量使液体流出，然后按感染物品的处理方法 将拭子丢弃。 处理后的样品如在60分钟内使用，并不影响试剂盒的检测结果。留意：用A、B液处理样本拭子滴加的溶液量应相等。B.检测步骤：请在操作前认真阅读检测试剂盒说明书。将检测试剂盒从密封袋中取出,放置在干净、干燥和水平的工作台上，标明样品编号或名称。 假如检测试剂盒保存于低于室温处，须将检测试剂盒及试剂提前取出，放至室温后方可使用。 将样品处理管中已处理的样品滴加23滴至检测试剂盒的加样孔中。等待结果的消失。加样10分钟时可判读结果。红线显示的时间依据拭子所采集沙眼衣原体
7、 含量的不同而变化，有些阳性样品可在60秒钟后消失结果。为了确保阴性结果，请勿在15 分钟后推断结果。为保证检测结果的正确性，在检验前可使用生产厂家供应的阳性、阴性质控对比品检测。【检验结果的解释】阴性结果：仅质控线（C）有一条红线，检测线（T）无红线消失。阳性结果：除质控线外，另有一条红线消失在检测线（T） o无效结果：质控线不消失红线，则结果无效。应更换新的检测试剂盒重复试验。可用剩余的 已处理的样品或重新取样。留意：当检测线很强时，质控线可能相对减弱，此属正常现象思索题1、衣原体的培育方法有那些种，举例怎样才能确诊衣原体感染？二、支原体的筛查（培育法）.几种主要支原体的生化特性检测原理种
8、类葡萄糖精氨酸尿素肺炎支原体+生殖支原体+人型支原体+溶腺腺原体-+本试剂盒适用于解腺原体和人型支原原体的分别培育及药物敏感性试验。试剂盒主要由 支原体培育基和检测卡组成，培育基中含有支原体基础肉汤、马血清、酵母提取液、酚红指 示剂、混合抗生素、生长因子、尿素和精氨酸等物质，当Uu和Mh生长时，尿素和精氨酸 分解生成的碱性物质引起pH上值提升，培育基由黄色变成红色。培育基内加有抑菌剂，可 抑制生殖道中的细菌和真菌的生长。主要组成成份1、支原体培育基本功20瓶2、检测卡20条3、无菌矿物油12ml*4瓶4、使用说明书1份标本的采集必需在用药前采集标本，支原体对细胞表面有很强的亲和力，应尽可能多收
9、集细胞，标本采 集后应尽快接种，不行在室温或一般冰箱久存，以免拭子干燥而使支原体活力降低甚至死亡。男性：用男性无菌拭子由前尿道12cm处取尿液分泌物，依据病情需要，也可取前列腺按 摩液、精液。女性：采集宫颈分泌物，村本采集时应先擦去宫颈口多余粘液，再用另一支拭子在宫颈管内 12cm处取宫颈分泌物。取材时要在宫颈内旋转并至少停留20秒，以便获得较多的细胞。假如必需用尿液做支原体培育，可留取早晨中段尿1020ml,高速离心后，取沉淀物接种， 但尿液支原体培育的阳率明显低于尿道（或宫颈）分泌物。检测方法本试验应留意无菌操作，避开污染。1、用无菌吸头吸取培育基100可加入检测卡C-空白孔。2、将采集的
10、标本拭子插入培育瓶，在靠近液面上方的瓶壁挤压旋转拭子数次，使拭子中样 本渗入；若为精液、前列腺液标本，取200回加入培育基中；若为中段尿，经2000转/分别 心10分钟，取沉渣100W加入培育基中。3、充分混匀接种标本中的培育基，取100贝加入检测卡的各孔中（除C-孔）。4、各孔滴加1-2滴无菌矿物油，盖上检测卡盖，置3537孵箱培育，在24h和48h分 别观看结果。检验结果解释红色一阳性（+）;红色一阳性（+）;1、阴阳性结果判定标准：黄色或橙黄色一阴性（-）；清楚透亮 混浊红色一污染。2、C-孔（空白孔）应为阴性，若为阳性表示有污染，本次试验无效。3、C+孔（对比孔）阴性（48h）,可报告
11、无Uu和Mh生长。4、C+孔（对比孔）阳性，应观看和纪录其余各孔的结果，按下判读:类型结果判定分别培育 孔Uu 孑L (+) Uu104孑L24h (+)检出解腺支原体阳性（Uu也函）Uu 孑L (+) Uu)104 孔 24h (-)检出解腺支原体阳性（UuV10%fU）Mh 孑L (+) MhAlO,孑J48h (+)检出人型支原体阳性（Uu104cfii）Mh 孑L (+) MhAlO,孑L48h (-)检出人型支原体阳性（MhVlO1）药敏孔每种药物设低（上孔）、高（下孔）两个 浓度上孔（-）下孔（-）为敏感（S）上孔（+）下孔（-）为中度敏感（I）上孔（+）下孔（+）为耐药（R）留意
12、事项1、请留意有效期，在有效期内使用，不同批号的试剂不要混用。2、月经期、先兆流产妇女禁用，阴道用药或灌洗后禁用。3、使用前应认真阅读说明书，使用前发觉培育浑浊、沉淀等不应使用。4、应正确采集标本，准时接种培育基和操作程序法律规范是提高阳性检出率和精确 性的关键。5、培育基复溶后，在接种检测卡前必需充分摇匀，假如标本的浓度很低检测卡微孔可能不 转变颜色或颜色转变不匀称。6、标本做药物敏感性试验，其中并没有考虑标本中支原体的浓度，试验中可能观看到接种 浓度差异引起的菌株实际敏感性和检测卡测得的结果不同的状况。.7、支原体生长培育基应保持透亮清亮，遇杂菌污染引起浑浊变红不应报告支原体阳性（但部分含
13、分泌物较多的样本，接种到培育基中可能引起培育基澄清度降低，请留意 区分）。8、由于大部分标本是不均一的分泌物，或者标本中支原体浓度较低，可能导致检测卡微孔 接种量不均一，药物敏感性试验结果不合理（高浓度孔有支原体生长，低浓度孔没有支原体 生长）。这样的试验结果没有意义，请重做药物敏感性试验或弃用此药物。9、本产品仅用于体外诊断，供一次性使用，检测卡外包装如有破损，请勿使用。10、操作过程必需有必要的防护措施以防止操作人员感染，废弃物应作为传染源处理。检验方法的局限性1、检测结果很大程度上依靠于标本的采集，所以一次的阴性结果并不能确定没有感染。2、阳性结果指示泌尿生殖道支原体的存在，但并不能作为充分的临床诊断依据，临床的诊 断需与临床症状相结合。3、Uu的判读必需在24小时，而Mh的判读必需在48小时进行判读。思索题1、临床引起泌尿生殖道的支原体有那些，各引起那些疾病，怎样去诊断？