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1、“高中生物颖韬工作室”整理 http:/sw.fjjy.org课时考点42细胞工程1.(2013全国理综，2)关于动物细胞培养和植物组织培养的叙述，错误的是()A.动物细胞培养和植物组织培养所用培养基不同B.动物细胞培养和植物组织培养过程中都要用到胰蛋白酶C.烟草叶片离体培养能产生新个体，小鼠杂交瘤细胞可离体培养增殖D.动物细胞培养可用于检测有毒物质，茎尖培养可用于植物脱除病毒2.(2014课标卷，40)某研究者用抗原(A)分别免疫3只同种小鼠(X、Y和Z)，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价(能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数)，结果如下图所示。若要制备杂交瘤细胞，
2、需取免疫后小鼠的B淋巴细胞(染色体数目40条)，并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞(染色体数目60条)按一定比例加入试管中，再加入聚乙二醇诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。回答下列问题。(1)制备融合所需的B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到16 000以上，则小鼠最少需要经过_次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的X、Y、Z这3只免疫小鼠中，最适合用于制备B淋巴细胞的是_小鼠，理由是_。(2)细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有_，体系中出现多种类型细胞的原因是_。(3)杂交瘤细胞中有_个细胞核，染色体数目最
3、多是_条。(4)未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是_。3.(2013课标全国理综，40)甲、乙是染色体数目相同的两种二倍体药用植物，甲含有效成分A，乙含有效成分B。某研究小组拟培育同时含有A和B的新型药用植物。回答下列问题：(1)为了培育该新型药用植物，可取甲和乙的叶片，先用_酶和_酶去除细胞壁，获得具有活力的_，再用化学诱导剂诱导二者融合，形成的融合细胞进一步培养形成_组织，然后经过_形成完整的杂种植株。这种培育技术称为_。(2)上述杂种植株属于多倍体，多倍体是指_，假设甲与乙有性杂交的后代是不育的，而上述杂种植株是可育的，造成这种差异的原因是_。(3)这种杂种植株可通过制
4、作人工种子的方法来大量繁殖。经植物组织培养得到的_等材料用人工薄膜包装后可得到人工种子。4.(2016江苏卷，9)下列有关细胞工程的叙述，正确的是()A.PEG是促细胞融合剂，可直接诱导植物细胞融合B.用原生质体制备人工种子，要防止细胞破裂C.骨髓瘤细胞经免疫处理，可直接获得单克隆抗体D.核移植克隆的动物，其线粒体DNA来自供卵母体5.(2016江苏卷，10)定量分析是科学研究的重要方法。下列能用血细胞计数板直接计数的是()A.海拉细胞悬液 B.浓缩培养的噬菌体C.自来水中大肠杆菌 D.蛙卵6.(2015高考安徽卷，31)科研人员采用转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊，以便通过乳腺生物反应器生
5、产人凝血因子IX医用蛋白，其技术路线如图。(1)由过程获得的A为_。(2)在核移植之前，必须先去掉受体卵母细胞的核，目的是_。受体应选用_期卵母细胞。(3)进行胚胎移植时，代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生_，这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。(4)采用胎儿成纤维细胞进行转基因体细胞克隆，理论上可获得无限个转基因绵羊，这是因为_。7.(2015天津卷，7)DHA对脑神经发育至关重要。以A、B两种单细胞真核藻为亲本，利用细胞融合技术选育高产DHA融合藻。两种藻特性如下表。亲本藻优势代谢类型固体培养基上藻落直径A藻自养0.06小0.7B藻异养0.14大无据表回答：(1)选育的融合藻
6、应具有A藻_与B藻_的优点。(2)诱导融合前需用纤维素酶处理两种藻，其目的是获得_。(3)通过以下三步筛选融合藻，步骤_可淘汰B藻，步骤_可淘汰生长速率较慢的藻落，再通过步骤_生产所需的融合藻。步骤a：观察藻落的大小步骤b：用不含有机碳源(碳源生物生长的碳素来源)的培养基进行光照培养步骤c：测定DHA含量(4)以获得的融合藻为材料进行甲、乙、丙三组试验，结果如下图。甲组条件下，融合藻产生H的细胞器是_；丙组条件下产生ATP的细胞器是_。与甲、丙两组相比，乙组融合藻生长速率较快，原因是在该培养条件下_。甲、乙两组DHA产量均较高，但实际生产中往往采用甲组的培养条件，其原因是_。8.(2014福建
7、卷，33)生物现代生物科技专题Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：(1)步骤中，在核移植前应去除卵母细胞的_。(2)步骤中，重组胚胎培养到_期时，可从其内细胞团分离出ES细胞。(3)步骤中，需要构建含有基因Rag2的表达载体。可以根据Rag2基因的_设计引物，利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用Hind和Pst限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有_酶的酶切位点。(4)为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的_，用抗R
8、ag2蛋白的抗体进行杂交实验。9.(2014广东卷，29)铁皮石斛是我国名贵中药，生物碱是其有效成分之一。应用组织培养技术培养铁皮石斛拟原球茎(简称PLBs，类似愈伤组织)生产生物碱的实验流程如下：在固体培养基上，PLBs的重量、生物碱含量随增殖培养时间的变化如图所示，请回答下列问题。(1)选用新生营养芽为外植体的原因是_，诱导外植体形成PLBs的过程称_。(2)与黑暗条件下相比，PLBs在光照条件下生长的优势体现在_，_，_。(3)脱落酸(ABA)能提高生物碱含量，但会抑制PLBs的生长。若采用液体培养，推测添加适量的ABA可提高生物碱产量。同学们拟开展探究实验验证该推测，在设计实验方案是探
9、讨了以下问题：ABA的浓度梯度设置和添加方式：设4个ABA处理组，1个空白对照组，3次重复。因ABA受热易分解，故一定浓度的无菌ABA母液应在各组液体培养基_后按比例加入。实验进程和取样：实验50天完成，每10天取样，将样品(PLBs)称重(g/瓶)后再测定生物碱含量。如初始(第0天)数据已知，实验过程中还需测定的样品数为_。依所测定数据确定适宜的ABA浓度和培养时间：当某3个样品(重复样)的_时，其对应的ABA浓度为适宜浓度，对应的培养时间是适宜培养时间。1.(2016石家庄质检)细胞工程技术研究，特别是不对称细胞杂交等技术是当前研究的热点。请回答下列有关问题：(1)植物组织培养的原理是_。
10、将离体的器官或组织，首先经过脱分化培养形成_，然后再分化最终形成完整植株。(2)细胞的不对称杂交是指将不对等的细胞进行融合，如将二倍体甘蓝体细胞与其配子细胞进行的融合：首先经_酶的作用去除细胞壁，形成_，再经物理或化学方法，促使二者融合，其中常用的化学诱导剂为_，融合后符合育种条件的植物细胞中有_个染色体组。(3)动物细胞培养液为合成培养基，但该培养基中往往要加入一些_等天然成分。动物细胞培养所需气体主要有O2和CO2，CO2的主要作用是_。2.(2016河北三市二联)胚胎干细胞简称ES或EK细胞，是一种全能性干细胞，具有自我更新和多向分化的潜能，在临床移植医学、细胞治疗、细胞工程、生物学基础
11、研究等领域具有重要的科学意义和巨大的应用前景。请回答下列问题。(1)ES细胞从_和_获取，对它可进行冷冻保存，也可进行遗传改造。(2)人类在根治糖尿病时，可通过ES细胞定向分化出_(填写细胞名称)再进行移植。此过程中，若定向诱导培育出相应的器官进行移植除能解决目前临床上存在的供体器官不足的问题外，还有一大优点是_。(3)若将ES细胞体外培养，在培养基中通常需加入_等一些天然成分，还需要提供5%的CO2，其作用是_。(4)用ES细胞进行核移植，所选择的卵母细胞必须发育到_(时期)才能作受体细胞，与体细胞核移植相比更容易发育成克隆动物，原因在于ES细胞的分化程度_，全能性高。3.(2016潍坊统考
12、)鼠源单克隆抗体用于疾病的治疗时，易发生不良反应，科学家通过对鼠和人控制抗体产生的基因进行拼接，实现了对鼠源单克隆抗体的改造，生产出对人体不良反应小、效果更好的单克隆抗体。请回答：(1)鼠源单克隆抗体是将经过免疫的小鼠_细胞与骨髓瘤细胞融合，然后筛选出_的杂交瘤细胞，并通过体内或体外培养生产的抗体。(2)动物细胞融合常用_诱导，细胞融合体现了细胞膜的_。在体外培养杂交瘤细胞时，培养液中通常加入_等天然成分，将其置于95%空气加5%CO2的气体环境中，CO2的作用是_。(3)基因拼接用到的工具有_和_。(4)单克隆抗体的优点是_。4.(2016安康二调)埃博拉病毒(EBOV)是一种能引起人类和灵
13、长类动物发生埃博拉出血热(EBHF)的烈性病毒，其遗传物质为RNA，利用相应的生物学技术制备出抗EBOV的单克隆抗体，可快速检测EBOV。请回答下列问题：(1)途径一：在制备抗EBOV的单克隆抗体的过程中，先给小鼠注射一种纯化的EBOV蛋白，一段时间后，从小鼠的脾脏中获取_细胞，将获得的细胞与小鼠的_细胞融合，再经过筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞，在细胞融合过程中体现了细胞膜具有的结构特点是_。(2)途径二：可将无限增殖的基因用_技术导入能产生抗EBOV抗体的小鼠浆细胞中，以便源源不断地产生抗EBOV的单克隆抗体，此细胞可来源于_的增殖分化。(3)在途径二中，将无限增殖的基因导入相应的
14、免疫细胞的技术中，需要的工具酶为_。(4)埃博拉病毒(EBOV)侵入人体时，在细胞中以RNA为模板，在_酶的作用下，合成相应的DNA并指导蛋白质合成，进行增殖。5.(2016怀化一模)下列是生物学技术制备抗体的两个途径模式简图。(1)过程和得到的Y细胞称为_。得到的单克隆抗体最主要的优点是_。(2)抗体1与抗体2的氨基酸排列顺序相同，两者的空间结构是否相同？_。为什么？_。(3)在基因表达载体中，启动子的作用是_识别和结合的部位，驱动V1基因的_。(4)质粒上的标记基因的作用是_。(5)过程要用到的主要酶是_。6.(2016长春二监)下列是在生产实践中培育相应动植物的过程，请回答：(1)下图是
15、培育转基因低乳糖奶牛的流程图。乳糖分解酶基因成纤维细胞转基因胚胎受体母牛转基因低乳糖奶牛乳糖分解酶基因是具有_的DNA片段，将其导入成纤维细胞中常用的方法是_；转基因成功之后，通常还需要通过核移植技术将成纤维细胞的细胞核移入到_细胞中，才能培育出转基因牛胚胎，原因是_。应选择_时期的胚胎移植到受体母牛体内，受体母牛需要经过_处理才适合进行胚胎移植。(2)为保持君子兰亲本的优良性状，科研人员取君子兰幼叶培养出愈伤组织，然后再从愈伤组织分化形成小植株，该过程中君子兰的生殖方式是_。这种技术称为_，该技术的实际应用还有_方面(答出一点即可)。7.(2016贵阳检测).下图为人类“治疗性克隆”的大致过
16、程，A、B、C代表过程，甲、乙代表细胞发育的时期。请据图回答问题。(1)图中A、B过程用到的生物技术分别是_、_，甲称做_。(2)乙是具有_和_的胚胎干细胞。(3)相同的胚胎干细胞，通过C过程“克隆”可得到不同细胞，如胰岛细胞、血细胞、心肌细胞等，上述“克隆”过程是胚胎干细胞_和_的结果。(4)按上述方法克隆的器官在移植方面的主要优点是_。.人类在预防与诊疗传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，其疫苗生产和抗体制备的流程如图：请回答下列问题：(1)过程表示的是_；过程表示的是基因工程操作步骤中_。基因工程的核心步骤是_(填序号
17、)。(2)在给小鼠皮下注射A蛋白时，要重复注射几次的目的是_。(3)在将X进行扩大培养之前，至少需要经过两次筛选，方法分别是_和_。8.(2016北京海淀期中)研究表明，HER2/neu是一种原癌基因，它表达的H蛋白在多种恶性肿瘤特别是乳腺癌细胞中过量表达。抗H蛋白单克隆抗体能抑制过量表达H蛋白的乳腺癌细胞的生长，目前已成为有效的生物治疗手段。 (1)选择H蛋白作为单克隆抗体的作用靶点，是因为H蛋白在成年个体的正常组织中_(填“低表达”或“高表达”)。H蛋白是一个跨膜蛋白，结构如图所示。制备免疫小鼠用的H蛋白(抗原)时，应构建_区基因，转入原核细胞表达并提纯。(2)将H蛋白注射到小鼠体内，取该
18、小鼠的脾脏细胞与_细胞进行融合，使用的化学诱导剂是_，细胞融合的原理是_。(3)将融合细胞在_培养基中培养，一段时间后培养基中只有杂交瘤细胞生长。将杂交瘤细胞转到多孔培养板上培养，应用_技术进行抗体阳性检测。经多次筛选，就能得到产生单克隆抗体的杂交瘤细胞。(4)将筛选得到的杂交瘤细胞，经过_或小鼠腹腔内培养，获取大量的单克隆抗体。(5)治疗乳腺癌时，可单独使用抗H蛋白单克隆抗体，也可将该单克隆抗体与抗癌药物结合构建“生物导弹”，杀死癌细胞。这充分体现了单克隆抗体_的特点。课时考点42细胞工程【三年高考真题演练】全国课标题1B动物细胞培养所用培养基为液体培养基，需加入血清、血浆等。植物组织培养所
19、用培养基为固体培养基，不需要加入血清、血浆等，但需加入植物激素，A项正确。胰蛋白酶能使动物细胞间的蛋白质水解，使动物组织分散成单个细胞，植物组织培养不需要胰蛋白酶，B项错误。高度分化的植物细胞有全能性，烟草叶片离体培养能产生新个体，杂交瘤细胞具有骨髓瘤细胞的特点，体外培养能无限增殖，C项正确。通过培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性。植物分生区附近(如茎尖)无病毒，可用茎尖进行组织培养获得无病毒植株，D项正确。2解析(1)据图分析，第4次免疫后X、Y、Z小鼠的血清抗体效价均达到16000以上，小鼠Y的B淋巴细胞产生抗体效价最高，最适用于制备单克隆抗体。(2)融合体系中除了未融
20、合的细胞和杂交瘤细胞之外，还有骨髓瘤细胞和B淋巴细胞的自身融合产物，由于细胞膜具有流动性，且诱导之后的细胞融合不具有特异性，故体系中会出现多种类型的细胞。(3)杂交瘤细胞形成后，小鼠的B淋巴细胞核与其骨髓瘤细胞核会融合形成一个细胞核。小鼠的B淋巴细胞(染色体数目40条)和骨髓瘤细胞(染色体数目60条)融合后，若不发生染色体数目丢失，染色体数目为100条，在有丝分裂后期染色体数目最多为200条。(4)未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是正常细胞的分裂次数是有限的。答案(1)4YY小鼠的抗体效价最高(2)B淋巴细胞相互融合形成的细胞，骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞细胞融合是随机的，且
21、融合率达不到100%(3)1200(4)不能无限增殖3解析(1)利用植物体细胞杂交技术培育新品种的过程中，应先用纤维素酶和果胶酶去掉植物细胞的细胞壁，获得有活力的原生质体，经诱导融合后培养成为愈伤组织，再经再分化形成完整植物体。(2)多倍体是指由受精卵发育来的、细胞内含有三个或三个以上染色体组的个体。(3)欲通过人工种子大量繁殖这种杂种植株，则可将经再分化形成的胚状体、不定芽、顶芽、腋芽等材料经人工薄膜包装来获得人工种子。答案(1)纤维素果胶原生质体愈伤再分化(或分化)植物体细胞杂交技术(2)体细胞中含有三个或三个以上染色体组的个体(其他合理答案也可)在减数分裂过程中，前者染色体联会异常，而后
22、者染色体联会正常(其他合理答案也可)(3)胚状体、不定芽、顶芽、腋芽(答对其中一个即可)地方精选题4DPEG是促细胞融合剂，但植物细胞不能直接融合，需先去壁形成原生质体才能融合，A错误；制备人工种子应用完整的植物细胞，不需制备原生质体，B错误；骨髓瘤细胞不能产生抗体，C错误；核移植克隆的动物，其线粒体只来自卵细胞即线粒体DNA来自供卵母体，D正确。5A海拉细胞悬液是癌细胞培养液，能用于血细胞计数板直接计数，A正确；噬菌体是病毒，在光学显微镜下不能观察到，B错误；自来水中大肠杆菌数量太少，且细胞体积较大不宜用血细胞计数板直接计数，C错误；蛙卵相互聚集在一起，且细胞体积较大，不宜用血细胞计数板直接
23、计数，D错误。6解析(1)在基因工程中，构建基因表达载体后才能将目的基因导入受体细胞。(2)核移植技术选用的成熟卵母细胞处于减数第二次分裂中期(M中期)，需去掉细胞核以保证得到的克隆动物的核遗传物质来自于含目的基因的成纤维细胞。(3)胚胎移植时受体动物对移入的胚胎基本不发生免疫排斥反应，这为胚胎的存活提供了可能。(4)由于整合有目的基因的胎儿成纤维细胞具有增殖能力，可进行传代培养，所以理论上可利用动物细胞培养技术和核移植技术，获得无限个转基因绵羊。答案(1)含目的基因的表达载体(2)保证核遗传物质来自含目的基因的成纤维细胞 M(3)免疫排斥反应(4)整合有目的基因的成纤维细胞可进行传代培养7解
24、析(1)根据表中两种藻的特性可知，A藻具有产生DHA、自养特性的优点， B藻具有快速增长的优点，选育的融合藻应该具有两种藻的优点。(2)由于植物细胞具有细胞壁，影响了原生质体的融合，所以在融合前，需用纤维素酶和果胶酶处理，以获得原生质体。(3)从题中信息可以看出，融合藻是通过培养过程的观察和测定DHA进行筛选的。在培养过程中，在无机物选择培养基中不能生长的是B藻，淘汰B藻，生长比较慢的是A藻，最后再通过测定DHA含量获得所需的融合藻。(4)甲组条件是光照下，培养基中含有无机物，该条件下融合藻既可以进行呼吸作用也可以进行光合作用，产生H的细胞器有线粒体和叶绿体；而在丙组黑暗条件下，培养基中含有葡
25、萄糖，该条件下融合藻只进行呼吸作用，产生ATP的细胞器只有线粒体。乙组条件有光照，培养基中又含有有机物葡萄糖，融合藻既能光能自养又能异养，所以融合藻生长速度较快；与乙组相比，甲组不需要添加葡萄糖，可降低成本，同时甲组的培养基中不含有机物，杂菌无法生长，所以在实际生产中往往采用甲组的培养条件。答案(1)产生DHA、自养特性快速增长(2)原生质体(3)bac(4)线粒体、叶绿体线粒体融合藻既能光能自养又能异养融合藻利用光能和简单的无机物能较快生长，不需要添加葡萄糖，既可降低成本，也可防止杂菌生长8解析(1)核移植过程中，体细胞核移植前要除去受体卵母细胞的细胞核，若不去掉卵母细胞的细胞核，细胞里面就
26、有两个细胞核，造成遗传物质不能稳定表达。(2)ES细胞是由早期胚胎(囊胚)的内细胞团分离出来的一类细胞。(3)步骤过程是将目的基因导入受体细胞(ES细胞)中，导入之前应构建基因表达载体。在生物体外可通过PCR技术扩增目的基因，其条件是模板DNA、根据Rag2基因的核苷酸序列设计的引物、四种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶等，另据题干可知，获得Rag2目的基因需要用Hind和Pst两种限制酶，所选择的载体上应具有Hind和Pst酶的酶切位点，以便目的基因和载体能够连接在一起。(4)检测目的基因是否翻译出相应蛋白质时，应采用抗原抗体杂交技术，即提取蛋白质，用相应的抗体进行抗体抗原杂交，看是否有杂交带
27、。答案(1)细胞核(2)囊胚(3)核苷酸序列Hind和Pst(4)蛋白质9解析(1)新生营养芽分裂能力强，分化程度低，全能性易表达；据题干可知PLBs类似于愈伤组织，外植体形成愈伤组织所经过的过程为脱分化；(2)据图分析，光照下PLBs的重量高于黑暗下，原因可能是光照有利于细胞增殖、叶绿素的形成和进行光合作用制造有机物；(3)由于ABA受热易分解，所以各种液体培养基灭菌后，冷却，再加入不同浓度生物ABA。据题，该实验共5组，每组取样5次，又每组3次重复，故需测定的样品数为55375。适量的ABA生物碱可提高生物碱产量，当样品的平均值最大时，所对应的ABA浓度和时间为最适。答案(1)分裂能力强，
28、全能性容易表达且几乎不含病毒脱分化(2)生长起始快快速生长时间长PLBs产量较高(3)灭菌冷却75生物碱平均含量最大【两年模拟试题精练】1解析(1)植物组织培养的原理是细胞的全能性。将离体的器官或组织，首先经过脱分化培养形成愈伤组织，然后再分化最终形成完整植株。(2)由于植物细胞壁阻碍了植物细胞间的杂交，而植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，因此需要用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，形成原生质体。诱导原生质体融合时，常用的化学诱导剂为聚乙二醇(或PEG)。依题意可知：该细胞的不对称杂交选用的是二倍体甘蓝体细胞与其配子细胞，所以融合后符合育种条件的植物细胞中有3个染色体组。(3)用于培养动物细胞的合
29、成培养基中往往要加入一些血清、血浆等天然成分。动物细胞培养所需气体主要有O2和CO2，CO2的主要作用是维持培养液的pH。答案(1)细胞的全能性愈伤组织(2)纤维素酶和果胶(写出其中一个就给分)原生质体聚乙二醇(或PEG)3(3)血清/血浆(写一个就给分)维持(培养液的)pH2解析(1)胚胎干细胞来源于早期胚胎或原始性腺。(2)糖尿病可由胰岛B细胞受损所致。用自身的胚胎干细胞诱导培育获得的器官移入自身体内，由于遗传物质相同，不会产生免疫排斥反应。(3)动物细胞培养的培养基中需要加入血清、血浆等天然物质。动物细胞培养过程中提供5%的CO2的作用是维持pH的相对稳定。(4)核移植中接受细胞核的卵母
30、细胞需要发育至减数第二次分裂的中期；ES细胞的分化程度低，细胞全能性高。答案(1)早期胚胎原始性腺(2)胰岛B细胞避免产生免疫排斥(3)血清、血浆维持pH的相对稳定(4)减中期低3(1)B淋巴既能无限增殖，又能产生所需抗体(2)灭活的病毒(聚乙二醇)流动性血清(血浆)维持培养液的pH(3)限制性核酸内切酶(限制酶)DNA连接酶(4)特异性强、灵敏度高4解析(1)单克隆抗体的制备过程首先要获取相应的B细胞，然后与骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞，融合过程中体现了细胞膜的流动性。(2)将目的基因导入动物细胞的方法是显微注射法，浆细胞可以由B细胞或记忆B细胞增殖分化而来。(3)基因工程中用到的工具酶有限制
31、酶和DNA连接酶。(4)以RNA为模板合成DNA的过程为逆转录过程，需要逆转录酶。答案(1)B骨髓瘤一定的流动性(2)显微注射B细胞和记忆细胞(3)限制酶和DNA连接酶(4)逆转录5解析(1)过程为诱导动物融合过程，得到的Y细胞为杂交瘤细胞。过程和得到的单克隆抗体最主要的优点是：特异性强、灵敏度高、并可大量制备。(2)大肠杆菌的细胞中没有内质网和高尔基体，大肠杆菌分泌的抗体2的形成过程没有经过内质网和高尔基体的加工，杂交瘤细胞中有内质网和高尔基体，杂交瘤细胞产生的抗体1的形成过程经过内质网和高尔基体的加工，所以抗体1与抗体2的空间结构不同。(3)启动子的作用是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动
32、V1基因的转录。(4)质粒上的标记基因的作用是：鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的受体细胞筛选出来。(5)过程是以RNA为模板合成DNA(V1基因)的过程，为逆转录过程，所用的酶为逆转录酶。答案(1)杂交瘤细胞特异性强、灵敏度高、并可大量制备(2)不同抗体2形成过程没有经过内质网和高尔基体的加工，抗体1形成过程经过内质网和高尔基体的加工(3)RNA聚合酶转录(4)鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的受体细胞筛选出来(5)逆转录酶(或者逆转录酶和DNA聚合酶)6解析(1)基因是具有遗传效应的DNA片段。将基因转入动物细胞常用显微注射的方法。由于基因转入到成纤维细胞中
33、，而成纤维细胞全能性受到限制，目前不能诱导发育为完整个体，所以必须采用核移植技术将这些成纤维细胞的细胞核移入去掉细胞核的卵母细胞中才能发育成完整个体。胚胎移植应选用桑椹胚或囊胚，且需要对受体母牛进行同期发情处理。(2)该君子兰的植物组织培养只利用了体细胞，所以是无性生殖。植物组织培养技术可用于微型/快速繁殖、作物脱毒、人工种子、单倍体育种等方面。答案(1)遗传效应显微注射法去掉细胞核的卵母(去核卵母)成纤维细胞的全能性受限制(卵母细胞中有促进全能性表达的物质)桑椹胚或囊胚(同期)发情(2)无性生殖/营养生殖植物组织培养微型/快速繁殖、作物脱毒、人工种子、单倍体育种、突变体的利用、细胞产物的工厂
34、化生产等7.(1)核移植早期胚胎培养(或动物细胞培养)(顺序不能改变)囊胚(2)自我更新(自我维持)分化发育潜能(3)分裂分化(4)无排斥反应.(1)逆转录目的基因的获取(2)通过二次免疫，增加小鼠体内的浆细胞(3)选择性培养基筛选专一抗体检测(顺序不作要求)8解析(1)恶性肿瘤细胞与正常细胞相比，前者H蛋白过量表达；胞外区蛋白易于被单克隆抗体识别，故应构建胞外区基因转入原核细胞表达出相应的H蛋白。(3)单克隆抗体的制备需要进行两步筛选：先用选择培养基筛选得到杂交瘤细胞，再利用抗原抗体杂交方法筛选培养产生所需抗体的杂交瘤细胞。(5)单克隆抗体能与抗原特异性结合，体现了其特异性强的特点。答案(1)低表达胞外(2)骨髓瘤PEG(或“聚乙二醇”)细胞膜的流动性(3)选择抗原抗体杂交(4)体外(培养)(5)特异性强(或“识别抗原部位专一”)16