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1、实验实验 出凝血检查出凝血检查（一）血标本的采取应注意的问题 .、凝血实验检查均使用静脉血。采血人员应技术熟练，以防止组织损伤，外源性凝血因子进入针管。一般血液采集，进入容器至进行实验所用的时间越短，所分析的凝血因子被保护得越好。从输液三通管取出血的做法不可取。取血时病人应松驰，环境温暖，防止静脉挛缩，止血带的压力要尽可能小，取血时，拉针栓的速度要慢而均匀，使血液平稳地进入注射器，防止气泡的产生。一旦取样完毕，立即与抗凝剂充分混合，一般提倡使用真空采血管。用硅化玻璃或塑料注射器采血。考虑结果的精确性，应将试管刻度的可能误差控制在既定体积的以内。.采血后标本在低温保存且在一定时间范围内。采血后标
2、本在低温保存且在一定时间范围内。.国际血液学标准化委员会（）、国际血栓与止血委员会（）推荐使用（含）或的枸橼酸钠作为凝血因子检查的抗凝剂。.抗凝剂在血标本的绝对含量可改变血浆中钙离子浓度，进而影响试验结果，因此应根据患者红细胞比例（）状况随时调整抗凝剂用量。（二）应用试剂应注意的问题.组织凝血活酶工作制剂的国际敏感指数（），为了使不同敏感性的组织凝血活酶在检测中能得到同样的结果，必须要制定一个共同的敏感性指标。.凝血活酶和部分活化凝血活酶的使用步骤必须严格按照说明书进行。通常在使用前必须充分混匀试剂，以使微粒重新均匀悬浮于液体中。.试剂准备过程中应该使用去离子水。.正常对照血浆通常将多份健康人
3、血标本混在一起，以弥补个体误差。（三）使用实验器材应注意的问题 .玻璃器皿的要求：贮存和测试时应选用干净、没有划痕的试管。.温度的要求：人工测定终点法要求水浴箱的温度必须保持在（），并且周围照明设备要好，便于读取终点。（四）实验操作应注意的问题 .许多试验误差都来源于技术的错误。在实验技术、试剂、温度及值上很微小的变化都会导致试验结果明显的变化。.手工法或试管法检查时，倾斜试管动作一定要轻，角度要小，以减少血液与管壁的接触面积。.血液凝固主要是酶催化的反应，所以实验过程中要严格控制理想的环境和溶液的离子强度。.试验结果准确还取决于所用的反应物的量、加入顺序和不同反应物的孵育时间。.、需乏血小板
4、血浆。.试验前检查血浆是否有溶血、黄疸、脂血和出现凝块。.报告方式：以的秒（）数报告。以患者（）正常对照（）的比（）报告。在口服药物治疗监控时以报告。规定，不再用百分比（活动度）报告。以秒报告。年提出值用（国际标准化比值）作为结果报告形式，并用以作为抗凝治疗监护的指标。病人（）正常人平均（）受检者（）正常对照（）：国际敏感指数（）、凝 血 时 间 测 定 目的：掌握玻璃试管法凝血时间测定的方法 原理：离体静脉血与玻璃表面接触后，血中因子活化并启动内源性凝血途径，最终生成纤维蛋白而使血液凝固所需的时间。器材：n n直径玻璃试管支n n静脉采血器材n n恒温浴箱n n秒表 步骤：支试管各血，每隔倾
5、斜，第一管计时后，立即观察第二、三管并计时，直至血液凝固。结果判断：从血液刚进入注射器至第管凝固所需时间即为凝血时间。n n正常参考值：分钟n n报告方式：（玻璃试管法）注意事项：n n试管应洁净干燥，抽血应“一针见血”且血液中不含泡沫。n n温度恒定为，倾斜试管角度应在左右。评价：n n凝血时间曾用玻片法测定，但由于毛细血管采血，易混入组织液而使凝血时间正常，属于淘汰方法。n n延长：严重内源性凝血途径凝血因子有缺陷；血中抗凝物质增多；肝素治疗n n缩短：高凝状态（早期）凝 血 酶 原 时 间 原理：在乏血小板血浆中加入组织因子和钙离子（钙凝血活酶）后，血浆发生凝固的时间即为凝血酶原时间（）
6、。步骤：n n取空腹静脉血加入含有枸橼酸钠的试管中混匀备用。n n抗凝血以离心分离血浆n n将试剂、正常人混合血浆、待测血浆与预热。n n血浆加入混匀的试剂，开动秒表计时。正常参考值：秒：报告方式：，正常人血浆：注意事项：n n试管应洁净干燥，抽血应“一针见血”，抗凝剂与血液比例（：）应准确。取血后内完成测定。n n钙凝血活酶必须标有国际敏感指数（），越接近于越敏感。n n标本测定前应先测定正常人混合血浆，其值在允许范围内才能测定样本。评价：血浆凝血酶原是一种筛选试验，是用来证实血浆凝血酶原是一种筛选试验，是用来证实先天性或获得性纤维蛋白原、凝血酶原和凝血因子、先天性或获得性纤维蛋白原、凝血酶
7、原和凝血因子、的缺陷或相应抑制物的存在，也用于监测口服抗、的缺陷或相应抑制物的存在，也用于监测口服抗凝治疗时引起的凝血酶原和因子、水平的下降。凝治疗时引起的凝血酶原和因子、水平的下降。实质：对检测样本（血浆）中存在凝血激酶时的再钙化反应，这种过程包括了因子、组织因子、磷脂、钙离子对凝血酶原的活化，凝血酶裂解纤维蛋白原和纤维蛋白单体的聚集交联。活化部分凝血活酶时间测定 原理：用白陶土激活因子、脑磷脂代替血小板磷脂，测定乏血小板血浆加入后凝固所需时间。步骤：n n采血 空腹静脉血 枸橼酸钠混匀。n n分离血浆 离心分钟分离血浆。n n溶解试剂 临用时加蒸馏水，室温静置以上，混匀后使用。n n预温活
8、化 血浆试剂混匀，准确孵育（其间轻轻摇动数次）n n加钙计时 加入 混匀并立即开动秒表计时，后，观察混合液流动状态。n n正常参考值：一般在（不同仪器和试剂所测之参考值有差别）n n报告方式：n n ：，正常人血浆：注意事项：n n采血时穿刺尽量一针见血，不要淤血和气泡，采血后立即与抗凝剂混合，尽快送往实验室。使用枸橼酸盐（抗凝）血浆 n n如果不能立即测试，应尽快分离血浆，盛血浆的容器加塞，防止值改变n n血浆在下保留天 n n钙凝血活酶必须标有国际敏感指数（），越接近于越敏感。临床意义：延长：表明有内源性凝血途径有关因子的缺陷（血友病）和纤维蛋白原缺乏。纤维活力增加，如继发性，原发性纤溶以
9、及血循环中有纤维蛋白（原）降解产物（）。血循环中有抗凝物质。缩短：高凝状态，如的高凝期，促凝物质进入血液以及凝血因子的活性增高等。评价：n n和同时检测是目前二期止血缺陷的主要筛选试验组合。在有临床出血症状的前提下：提示正常 延长 因子的缺陷延长 正常 因子、缺陷正常 正常 怀疑因子缺陷可能延长 延长 除因子、缺陷 外，主要是异常抗凝物质 的增多血浆复钙时间 原理：在去钙离子的抗凝血浆中，重新加入适量的钙后，血浆发生凝固。步骤：n n 草酸钠静脉血混匀，离心分离血浆。n n血浆置水浴中，立即开动秒表记录时间。正常参考值：分（分钟）注意事项：n n不要溶血，否则时间缩短n n新鲜配制n n分离血
10、浆以转分为宜，高速离心可使大量血小板下沉而导致复钙时间延长。复钙交叉时间 步骤：按下列比例准备份待测血浆：加样量 受检血浆（）正常血浆（）上述试管，置，加，混匀后，记录血浆凝固时间。注意事项：n n所用血浆均为富含血小板血浆，分离出血浆后需在内检测完毕。临床意义：n n最早作为内源性凝血系统相关凝血因子缺陷的筛选检查，但由于这个试验不如，又容易受血小板数量和功能影响，目前只用来筛选是否存在病理性抗凝物质增多。n n延长的复钙时间如被量的正常血浆所纠正，则表示受检血浆中缺乏内源凝血因子；如不被少量正常血浆纠正，提示存在异常抗凝物质。血浆纤维蛋白原 纤维蛋白原的测定方法众多，大体上分三大类：纤维蛋
11、白原的测定方法众多，大体上分三大类：基于经加凝血酶后，形成纤维蛋白的方法，即可凝固蛋基于经加凝血酶后，形成纤维蛋白的方法，即可凝固蛋白法。白法。物理、化学测定法。物理、化学测定法。免疫学测定法。免疫学测定法。目的和原理 为了解凝血途径最后环节的状况，排除纤维蛋白原减少、异常对凝血筛选试验的影响，了解纤溶活动度等可选择本试验。法以凝血酶作用于受检血浆中的纤维蛋白原，使其形成纤维蛋白，血液凝固。纤维蛋白原的量与凝固时间成负相关，检测结果与参比血浆制成的标准曲线对比可得出纤维蛋白原的含量。步骤：n n将参比血浆用血浆稀释液作原倍、：、：、：、将参比血浆用血浆稀释液作原倍、：、：、：、：稀释管。：稀释
12、管。n n取稀释血浆于小试管中，置取稀释血浆于小试管中，置水浴预热分钟，水浴预热分钟，再加凝血酶溶液，记录时间。再加凝血酶溶液，记录时间。相关分析：n n首先先清除内存。，浓度（或），输入（如不取对数，浓度直接输入，读取值输入；全部数据输入完毕，按读出相关系数。n n待测读数或读出相关浓度。n n如不取对数，待测读数直接读出相关浓度。n n最终浓度需根据样品稀释倍数乘积。标准曲线：（）（）如血浆纤维蛋白原含量大于 时，应稀释血浆后重测，结果乘以稀释倍数。低于 时，需将原血浆改为或稀释，在标准曲线上查得结果后，除以或除以。正常参考值：临床意义：n n纤维蛋白原增高除生理情况下的应激反应、妊娠后期
13、外，主要出现感染、灼伤、动脉粥样硬化、急性心肌梗死、多发性骨髓瘤、糖尿病、败血症等。n n纤维蛋白原减少见于、原发性纤溶亢进症、重症肝炎、肝硬化和溶栓治疗时。评价：方法测定的是纤维蛋白原功能，因此需纤维蛋白原结构正常，且有一定的含量，对低（无）纤维蛋白原血症和因此后纤维蛋白原血症应改用和等免疫检测手段。主要误差来源：n n血浆稀释不准。n n凝血酶活性不足或失效。凝血酶一般应在低温保存，稀释后在塑料(聚乙烯)试管中，置可保存活性小时。n n测定终点观察不准确，尤其是纤维蛋白原含量高时，往往很快即凝固，手工法重复性较差，不易做准。血浆凝血酶时间 原理n n以标准凝血酶溶液加入受检血浆，使凝血酶裂解血浆中的纤维蛋白原，形成纤维蛋白，造成血浆凝固，此时所需时间为凝血酶时间。方法：血浆试剂，水浴中观察凝固时间。正常参考值：评价：n n时间大于正常参考值秒：、肝脏病变。n nTT时间缩短，并不代表高凝状态或DIC前期，是技术原因。如操作失误，组织液混入血标本，标本在4环境中放置过久。个人收集整理，仅供交流学习！