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1、【同济医科大学】优质课全国特级教师 江新欢 博士教授医学微生物学医学微生物学第第1919章章 弧菌科及检验弧菌科及检验2024/3/302弧菌科共同特征弧菌科共同特征o革兰阴性菌，短小弯曲弧状革兰阴性菌，短小弯曲弧状,无芽胞，多无芽胞，多数有鞭毛、有菌毛。数有鞭毛、有菌毛。o需氧兼性厌氧需氧兼性厌氧o具有一端单一鞭毛、运动迅速具有一端单一鞭毛、运动迅速o氧化酶氧化酶o发酵葡萄糖产酸不产气发酵葡萄糖产酸不产气,许多菌株生长需许多菌株生长需要要2%3%2%3%氯化钠氯化钠o弧菌科细菌广泛分布于自然界，以水中弧菌科细菌广泛分布于自然界，以水中最为多见。其中有一些种对人类致病。最为多见。其中有一些种对
2、人类致病。2024/3/303弧菌科种类弧菌科种类o弧菌属弧菌属o气单胞菌属气单胞菌属o邻单胞菌属邻单胞菌属2024/3/304三个菌属的鉴别三个菌属的鉴别试验试验试验试验弧菌属弧菌属弧菌属弧菌属气单胞菌属气单胞菌属气单胞菌属气单胞菌属 邻单胞菌属邻单胞菌属邻单胞菌属邻单胞菌属肌醇肌醇肌醇肌醇粘丝试验粘丝试验粘丝试验粘丝试验/(/()鸟氨酸鸟氨酸鸟氨酸鸟氨酸/精氨酸精氨酸精氨酸精氨酸/150 150 gO/129gO/129S SRRS STCBSTCBS生长生长生长生长耐盐耐盐耐盐耐盐（7 7）/第一节第一节 弧菌属弧菌属o弧菌属共有弧菌属共有3636个种。其中有个种。其中有1212个种与人
3、类个种与人类感染有关感染有关o霍乱弧菌霍乱弧菌n引起霍乱引起霍乱o副溶血弧菌副溶血弧菌n引起食物中毒引起食物中毒临床意义临床意义oo主要引起人类腹泻，也可导致肠道外感染如伤口感染、主要引起人类腹泻，也可导致肠道外感染如伤口感染、主要引起人类腹泻，也可导致肠道外感染如伤口感染、主要引起人类腹泻，也可导致肠道外感染如伤口感染、败血症等败血症等败血症等败血症等oo氧化酶均阳性氧化酶均阳性氧化酶均阳性氧化酶均阳性n n除麦氏弧菌外除麦氏弧菌外除麦氏弧菌外除麦氏弧菌外oo能发酵葡萄糖，对弧菌抑制剂能发酵葡萄糖，对弧菌抑制剂能发酵葡萄糖，对弧菌抑制剂能发酵葡萄糖，对弧菌抑制剂O/129O/129O/129
4、O/129敏感敏感敏感敏感oo钠离子能刺激其生长，有些菌种在无盐条件下不能生长，钠离子能刺激其生长，有些菌种在无盐条件下不能生长，钠离子能刺激其生长，有些菌种在无盐条件下不能生长，钠离子能刺激其生长，有些菌种在无盐条件下不能生长，称为嗜盐菌称为嗜盐菌称为嗜盐菌称为嗜盐菌oo多数能在血平板或普通琼脂平板上生长，在血平板上可多数能在血平板或普通琼脂平板上生长，在血平板上可多数能在血平板或普通琼脂平板上生长，在血平板上可多数能在血平板或普通琼脂平板上生长，在血平板上可呈现呈现呈现呈现、或不溶血菌落。或不溶血菌落。或不溶血菌落。或不溶血菌落。oo在肠道选择性培养基上如含乳糖或肌醇的麦康凯平板，在肠道选
5、择性培养基上如含乳糖或肌醇的麦康凯平板，在肠道选择性培养基上如含乳糖或肌醇的麦康凯平板，在肠道选择性培养基上如含乳糖或肌醇的麦康凯平板，许多致病性弧菌可以生长，形成糖类不发酵的菌落许多致病性弧菌可以生长，形成糖类不发酵的菌落许多致病性弧菌可以生长，形成糖类不发酵的菌落许多致病性弧菌可以生长，形成糖类不发酵的菌落2024/3/307霍乱弧菌（霍乱弧菌（VPVP）o引起烈性肠道传染病霍乱的病原体引起烈性肠道传染病霍乱的病原体oO1O1（古典生物型和古典生物型和ElTorElTor生物型）、生物型）、O139O139oO139O139是新的流行菌株是新的流行菌株2024/3/308霍乱弧菌分类霍乱弧
6、菌分类q 根据菌体抗原（根据菌体抗原（O O抗原）不同分成抗原）不同分成200200多多个霍乱弧菌血清群，其中：个霍乱弧菌血清群，其中：O1O1群霍乱弧菌：根据菌体抗原成分不同分群霍乱弧菌：根据菌体抗原成分不同分成成3 3个血清型：个血清型：ABccABcc小川型、小川型、ACAC稻叶型、稻叶型、ABCABC彦岛型彦岛型,以小川型和稻叶型为常见流行以小川型和稻叶型为常见流行型别型别非非O1O1群霍乱弧菌：除群霍乱弧菌：除O1O1外余下的霍乱弧菌外余下的霍乱弧菌统称统称(不凝集弧菌，不凝集弧菌，NAG)NAG)2024/3/309霍乱病原体霍乱病原体q古典型霍乱弧菌（古典型霍乱弧菌（CVCCVC
7、）：）：18171817-1923-1923年引年引发发6 6次霍乱弧菌世界大流行次霍乱弧菌世界大流行(正霍乱弧菌正霍乱弧菌)q埃尔托型霍乱弧菌（埃尔托型霍乱弧菌（EVCEVC）：）：1961-1961-至今第至今第7 7次世界大流行次世界大流行(副霍乱弧菌副霍乱弧菌)qO139O139霍乱弧菌（霍乱弧菌（BVCBVC）:1992:1992年年-至今引发至今引发O139O139型霍乱型霍乱2024/3/30102024/3/3011O1O1与与O139O139霍乱病原菌特征霍乱病原菌特征q在外界环境中存活能力霍乱在外界环境中存活能力霍乱O139O139弧菌强于弧菌强于O1O1群霍群霍乱弧菌乱弧
8、菌EVCEVC，EVC EVC强于强于CVCCVCq与与O1O1群霍乱弧菌群霍乱弧菌EVCEVC一样，霍乱一样，霍乱O139O139也有产毒株也有产毒株与非产毒株之分与非产毒株之分qO139O139霍乱弧菌产毒株所致疾病的临床表现和体征霍乱弧菌产毒株所致疾病的临床表现和体征与与O1O1群霍乱弧菌所致霍乱无区别群霍乱弧菌所致霍乱无区别2024/3/3012霍乱病原体的致病因子霍乱病原体的致病因子q毒素：霍乱肠毒素毒素：霍乱肠毒素CTCT、辅助霍乱肠毒素辅助霍乱肠毒素AceAceq定居因子：脂多糖定居因子：脂多糖LPSLPS、毒素协同调节菌毒素协同调节菌毛毛A A致病机制致病机制o正常情况下，胃液
9、中的胃酸可消灭食物中的霍正常情况下，胃液中的胃酸可消灭食物中的霍乱弧菌乱弧菌o但在胃酸降低时，或摄入大量的霍乱弧菌时，但在胃酸降低时，或摄入大量的霍乱弧菌时，霍乱弧菌可以从胃进入肠道。霍乱弧菌可以从胃进入肠道。o进入肠道的霍乱弧菌通过鞭毛运动穿过肠粘膜进入肠道的霍乱弧菌通过鞭毛运动穿过肠粘膜表面的粘液层，通过菌毛定植于肠粘膜上皮细表面的粘液层，通过菌毛定植于肠粘膜上皮细胞表面繁殖胞表面繁殖o产生由染色体介导的对热不稳定的霍乱毒素（产生由染色体介导的对热不稳定的霍乱毒素（CTCT）而致病而致病oO1O1群和群和O139O139群的致病机制和过程是一样的群的致病机制和过程是一样的2024/3/30
10、14CTCT的致病机理的致病机理q典型的典型的A A、B B亚单位型外毒素亚单位型外毒素qA A亚单位为毒性成份，亚单位为毒性成份，B B亚单位与肠壁细胞亚单位与肠壁细胞GM1GM1受受体结合，释放体结合，释放A A亚单位入细胞亚单位入细胞qA A亚单位激活胞内的腺苷环化酶，使胞内环磷酸亚单位激活胞内的腺苷环化酶，使胞内环磷酸腺苷（腺苷（cAMPcAMP）浓度升高，细胞分泌增加，大量肠浓度升高，细胞分泌增加，大量肠液积聚，形成严重水样便和脱水休克，循环衰竭液积聚，形成严重水样便和脱水休克，循环衰竭而死亡而死亡作用机制示意图作用机制示意图2024/3/3016霍乱流行病学特点（霍乱流行病学特点（
11、1 1）q霍乱（霍乱（O139O139与与O1O1群霍乱），具有传染性强、传播群霍乱），具有传染性强、传播迅速、易出现暴发和流行特征；世界卫生组织将迅速、易出现暴发和流行特征；世界卫生组织将其纳入霍乱范畴，我国将它列入法定报告的甲类其纳入霍乱范畴，我国将它列入法定报告的甲类烈性传染病烈性传染病q霍乱弧菌主要通过水、食物、日常生活接触和苍霍乱弧菌主要通过水、食物、日常生活接触和苍蝇传播，以食物传播为主，常可借助食用被霍乱蝇传播，以食物传播为主，常可借助食用被霍乱弧菌污染的食物而致病弧菌污染的食物而致病2024/3/3017霍乱流行病学特点（霍乱流行病学特点（2 2）q霍乱发病季节在夏秋季，本市主
12、要在霍乱发病季节在夏秋季，本市主要在5-105-10月份，月份，7-97-9月为发病高峰月为发病高峰q人群普遍易感，在同源感染因素下易造成爆发和人群普遍易感，在同源感染因素下易造成爆发和流行流行2024/3/3018霍乱预后及危害霍乱预后及危害q霍乱能引起机体剧烈吐泻、失水、电介质紊乱以致霍乱能引起机体剧烈吐泻、失水、电介质紊乱以致死亡死亡q病死率高低与病情轻重以及医疗条件、抢救的时效病死率高低与病情轻重以及医疗条件、抢救的时效性有关。病情重、医疗条件差、抢救不及时病死率性有关。病情重、医疗条件差、抢救不及时病死率可高达可高达20%-50%20%-50%2024/3/3019霍乱预后及危害霍乱
13、预后及危害q霍乱属烈性传染病，一旦爆发和流行，累及霍乱属烈性传染病，一旦爆发和流行，累及面广，病死率高，对人民身体健康以及国民面广，病死率高，对人民身体健康以及国民生活、生产秩序、社会稳定、投资环境、对生活、生产秩序、社会稳定、投资环境、对外贸易等造成直接影响外贸易等造成直接影响2024/3/3020O139O139霍乱发源地霍乱发源地q19921992年年9 9月月1919日印度南部城市马德拉斯，日印度南部城市马德拉斯，1212月孟月孟加拉国出现流行影响全印度，继而扩散到泰国、加拉国出现流行影响全印度，继而扩散到泰国、中国（中国（19931993年）等亚洲国家年）等亚洲国家q似乎来源于埃尔托
14、生物型似乎来源于埃尔托生物型2024/3/3021O139O139霍乱弧菌定义霍乱弧菌定义q印度株（印度株（MO45MO45）耐耐O/129 O/129 q对对IVIV噬菌体不裂解噬菌体不裂解q命名为命名为O139O139群霍乱弧菌群霍乱弧菌2024/3/3022O139O139霍乱弧菌病原体来源霍乱弧菌病原体来源qEVCEVC流行株流行株O O抗原变异抗原变异?q非非O1O1霍乱弧菌获产毒基因霍乱弧菌获产毒基因?2024/3/3023全国霍乱全国霍乱O139O139流行情况（流行情况（1 1）q19921992年年在在印印度度、孟孟加加拉拉首首次次发发现现霍霍乱乱O139O139后后，短短期
15、期内内在在这这两两个个国国家家造造成成流流行行，发发病病人人数数高高达达1010多多万万例例，并并在在几几年年间间已已传传入入亚亚洲洲、欧欧洲洲、美美洲等洲等2020多个国家多个国家q19931993年年传传入入我我国国后后，即即在在新新疆疆南南部部柯柯坪坪县县发发生生霍霍乱乱O139O139引引起起的的暴暴发发，报报告告病病例例数数202202例例，死死亡亡4 4例例霍乱弧菌检验程序霍乱弧菌检验程序标本标本 增菌培养增菌培养碱性蛋白胨水碱性蛋白胨水 分离培养（分离培养（TCBS、碱性平板）、碱性平板）生化鉴定分型生化鉴定分型血清学鉴定血清学鉴定确诊报告确诊报告初步报告初步报告快速诊断快速诊断
16、直接涂片直接涂片 动力、制动动力、制动试验试验2024/3/3025微生物检验标本采集微生物检验标本采集o发病早期采集标本发病早期采集标本o以以“米泔水米泔水”样便为主，及时送检样便为主，及时送检o卡布培养基保存卡布培养基保存o严密包装，专人送检严密包装，专人送检2024/3/3026检验方法显微镜检查检验方法显微镜检查o涂片染色：涂片染色：-标本直接涂片革兰染色，注意形态、排列标本直接涂片革兰染色，注意形态、排列o动力观察：动力观察：-压滴法或暗视野镜检，注意运动方式压滴法或暗视野镜检，注意运动方式o制动试验：制动试验：-诊断血清与菌体结合，动力消失诊断血清与菌体结合，动力消失2024/3/
17、3027形态染色形态染色o革兰阴性革兰阴性o弧形或逗点状弧形或逗点状o单鞭毛，运动呈单鞭毛，运动呈“穿梭样穿梭样”或或“流星样流星样”o无芽胞无芽胞，无荚膜（无荚膜（O139O139有薄的荚膜）有薄的荚膜）o在新鲜粪便中成在新鲜粪便中成“鱼群样鱼群样”排列排列2024/3/3029 霍乱弧菌电镜照片霍乱弧菌电镜照片霍乱弧菌霍乱弧菌革革革革兰兰兰兰染染染染色色色色鞭鞭鞭鞭毛毛毛毛染染染染色色色色2024/3/3031培养特性培养特性o兼性厌氧兼性厌氧o营养要求不高营养要求不高o耐碱不耐酸，常用耐碱不耐酸，常用pH8.4pH8.49.29.2碱性培养基碱性培养基o在液体培养基中形成菌膜在液体培养基
18、中形成菌膜o菌落圆形、较大、扁平菌落圆形、较大、扁平2024/3/3032霍乱弧菌常用培养基霍乱弧菌常用培养基o碱性蛋白胨水碱性蛋白胨水o碱性琼脂平板碱性琼脂平板o硫代硫酸钠硫代硫酸钠-枸櫞酸盐枸櫞酸盐-胆盐胆盐-蔗糖琼脂平板蔗糖琼脂平板（TCBSTCBS）霍乱弧菌发酵蔗糖产酸，菌落呈黄色霍乱弧菌发酵蔗糖产酸，菌落呈黄色o4 4号琼脂号琼脂、庆大霉素琼脂平板（含亚碲酸钾）庆大霉素琼脂平板（含亚碲酸钾）生长并将培养基中的碲离子还原成元素碲生长并将培养基中的碲离子还原成元素碲,形成灰形成灰褐色菌落中心褐色菌落中心2024/3/30332024/3/3035分离培养分离培养o标本接种碱性蛋白胨水增菌
19、标本接种碱性蛋白胨水增菌6 68 8小时，转种小时，转种TCBSTCBS或庆大霉素琼脂，或庆大霉素琼脂，oTCBSTCBS：出现黄色菌落：出现黄色菌落o庆大霉素琼脂：出现中心灰褐色的菌落庆大霉素琼脂：出现中心灰褐色的菌落2024/3/3036鉴定鉴定o生化反应：氧化酶、粘丝试验、霍乱红反应生化反应：氧化酶、粘丝试验、霍乱红反应o发酵蔗糖，动力阳性发酵蔗糖，动力阳性o赖氨酸、鸟氨酸脱羧酶阳性，精氨酸双水解酶阴性赖氨酸、鸟氨酸脱羧酶阳性，精氨酸双水解酶阴性o可以在无盐培养基上生长可以在无盐培养基上生长n在含有高于在含有高于6%6%氯化钠的培养基上不能生长氯化钠的培养基上不能生长o确定血清群：确定血
20、清群：O O群诊断血清与可疑菌落作玻片凝集，以群诊断血清与可疑菌落作玻片凝集，以确定是否为确定是否为O1O1或或O139O139群群o确定血清型：与分型诊断血清作玻片凝集，以确定血清确定血清型：与分型诊断血清作玻片凝集，以确定血清型别型别 o确定生物型：确定生物型：CVC EVCCVC EVC 第第组噬菌体裂解试验组噬菌体裂解试验(10(106 6)：+-/(+)+-/(+)多粘菌素多粘菌素B B敏感试验敏感试验(50(50U)U)：S R S R 鸡红细胞凝集试验鸡红细胞凝集试验(2.5%):(2.5%):-/(+)+/(-)-/(+)+/(-)V-PV-P试验、溶血试验试验、溶血试验(1%
21、(1%羊羊)：-+/(-)+/(-)抵抗力抵抗力o可在河水、井水及海水中存活可在河水、井水及海水中存活2020天左右天左右o对热、干燥和光敏感；对热、干燥和光敏感；1001210012minmin即死亡即死亡o怕酸耐碱，在正常胃酸中仅能生存怕酸耐碱，在正常胃酸中仅能生存4 4minmino对常用消毒剂敏感，对常用消毒剂敏感，0.50.5ppmppm氯氯1515minmin能杀死能杀死o对庆大霉素耐药对庆大霉素耐药2024/3/3038副溶血性弧菌副溶血性弧菌2024/3/3039副溶血性弧菌生物学性状副溶血性弧菌生物学性状o革兰阴性杆菌，或微弯，单端鞭毛，无芽革兰阴性杆菌，或微弯，单端鞭毛，无
22、芽胞，无荚膜胞，无荚膜o营养要求营养要求 不高，嗜盐性，最适盐浓度不高，嗜盐性，最适盐浓度3.53.5NaClNaCl，超过，超过8%8%不能生长无盐培养基不生不能生长无盐培养基不生长长o最适最适pHpH为为7.78.07.78.0，但，但pH9.5pH9.5时仍能生长，时仍能生长，最适生长温度为最适生长温度为30373037o在碱性胨水中经在碱性胨水中经6969h h增菌可形成菌膜增菌可形成菌膜oTCBSTCBSTCBSTCBS：形成不发酵蔗糖的绿色菌落：形成不发酵蔗糖的绿色菌落：形成不发酵蔗糖的绿色菌落：形成不发酵蔗糖的绿色菌落o神奈川现象：致病性副溶血性弧菌能溶解人神奈川现象：致病性副溶
23、血性弧菌能溶解人神奈川现象：致病性副溶血性弧菌能溶解人神奈川现象：致病性副溶血性弧菌能溶解人或兔红细胞，不溶解马红细胞或兔红细胞，不溶解马红细胞或兔红细胞，不溶解马红细胞或兔红细胞，不溶解马红细胞o嗜盐性选择平板嗜盐性选择平板嗜盐性选择平板嗜盐性选择平板:较大，圆形，隆起，稍浑浊，较大，圆形，隆起，稍浑浊，较大，圆形，隆起，稍浑浊，较大，圆形，隆起，稍浑浊，半透明或不透明，无粘性半透明或不透明，无粘性半透明或不透明，无粘性半透明或不透明，无粘性oSSSSSSSS平板平板平板平板:扁平，无色半透明，蜡滴状菌落，有扁平，无色半透明，蜡滴状菌落，有扁平，无色半透明，蜡滴状菌落，有扁平，无色半透明，蜡
24、滴状菌落，有辛辣味，不易刮下，辛辣味，不易刮下，辛辣味，不易刮下，辛辣味，不易刮下，48484848h h h h后牢固粘着培养基上，后牢固粘着培养基上，后牢固粘着培养基上，后牢固粘着培养基上，部分菌株不能生长部分菌株不能生长部分菌株不能生长部分菌株不能生长o麦康凯平板麦康凯平板麦康凯平板麦康凯平板:部分菌株不生长部分菌株不生长部分菌株不生长部分菌株不生长o伊红美兰琼脂和中国兰琼脂培养基不能用于本伊红美兰琼脂和中国兰琼脂培养基不能用于本伊红美兰琼脂和中国兰琼脂培养基不能用于本伊红美兰琼脂和中国兰琼脂培养基不能用于本菌的初次分离菌的初次分离菌的初次分离菌的初次分离2024/3/30402024/
25、3/3041副溶血弧菌副溶血弧菌q“副溶血副溶血”是为了纪念首次发现时该菌的特是为了纪念首次发现时该菌的特殊溶血现象：殊溶血现象：q普通血平板呈普通血平板呈r r或或a a溶血，但在含溶血，但在含7 7高盐甘高盐甘露醇的人露醇的人O O型血或兔血的平板上呈型血或兔血的平板上呈溶血。该溶血。该溶血现象称神奈川现象溶血现象称神奈川现象。现已证明产生该现现已证明产生该现象的菌株（象的菌株（KPKP）即为产毒株即为产毒株临床意义临床意义q具有嗜盐性具有嗜盐性q存在于近海的海水、海底的沉淀物、鱼虾存在于近海的海水、海底的沉淀物、鱼虾类和贝壳及盐渍加工的海产品中类和贝壳及盐渍加工的海产品中q主要引起食物中
26、毒和急性腹泻主要引起食物中毒和急性腹泻q是我国沿海地区及海岛食物中毒的最常见是我国沿海地区及海岛食物中毒的最常见病原菌病原菌q胃肠炎临床表现有：恶心、呕吐、腹痛、胃肠炎临床表现有：恶心、呕吐、腹痛、低热、寒战等。腹泻呈水样便，偶尔血性，低热、寒战等。腹泻呈水样便，偶尔血性，恢复较快，病程恢复较快，病程23天，通常为自限性天，通常为自限性q还可引起伤口感染和菌血症还可引起伤口感染和菌血症致病物质致病物质q通过菌毛的粘附通过菌毛的粘附通过菌毛的粘附通过菌毛的粘附q毒素毒素毒素毒素 耐热直接溶血素耐热直接溶血素耐热直接溶血素耐热直接溶血素(TDH(TDH）分子量为分子量为分子量为分子量为21 000
27、21 000，有，有，有，有2 2个亚单位组成，能耐个亚单位组成，能耐个亚单位组成，能耐个亚单位组成，能耐1001001010minmin不被破坏不被破坏不被破坏不被破坏 溶血毒性，溶血毒性，溶血毒性，溶血毒性，TDHTDH对人和兔红细胞的溶血性较高，对马红细胞不溶对人和兔红细胞的溶血性较高，对马红细胞不溶对人和兔红细胞的溶血性较高，对马红细胞不溶对人和兔红细胞的溶血性较高，对马红细胞不溶血血血血 细胞毒性，对多种培养细胞如细胞毒性，对多种培养细胞如细胞毒性，对多种培养细胞如细胞毒性，对多种培养细胞如HelaHela细胞、细胞、细胞、细胞、FLFL细胞、细胞、细胞、细胞、L L细胞及鼠心细胞及
28、鼠心细胞及鼠心细胞及鼠心肌细胞有细胞毒性肌细胞有细胞毒性肌细胞有细胞毒性肌细胞有细胞毒性 心脏毒性，可导致心电图异常表现如心脏毒性，可导致心电图异常表现如心脏毒性，可导致心电图异常表现如心脏毒性，可导致心电图异常表现如ST-TST-T改变、房室传导阻滞、改变、房室传导阻滞、改变、房室传导阻滞、改变、房室传导阻滞、室颤或心跳骤停及心肌损伤室颤或心跳骤停及心肌损伤室颤或心跳骤停及心肌损伤室颤或心跳骤停及心肌损伤 肠毒性，使肠粘膜的毛细血管通透性增高，向肠腔分泌亢进肠毒性，使肠粘膜的毛细血管通透性增高，向肠腔分泌亢进肠毒性，使肠粘膜的毛细血管通透性增高，向肠腔分泌亢进肠毒性，使肠粘膜的毛细血管通透性
29、增高，向肠腔分泌亢进 其结构基因其结构基因其结构基因其结构基因tdhtdh也存在于其他致病性弧菌当中也存在于其他致病性弧菌当中也存在于其他致病性弧菌当中也存在于其他致病性弧菌当中耐热直接溶血素相关溶血素（耐热直接溶血素相关溶血素（耐热直接溶血素相关溶血素（耐热直接溶血素相关溶血素（TRHTRH），），），），生物学特性与生物学特性与生物学特性与生物学特性与TDHTDH相似相似相似相似生物学特性生物学特性1.1.形态形态n革兰阴性杆菌，有鞭毛（极单毛），无荚膜，革兰阴性杆菌，有鞭毛（极单毛），无荚膜，无芽胞无芽胞2.2.抗原结构抗原结构 n耐热的菌体（耐热的菌体（O O）抗原，具有群特征性，副溶
30、抗原，具有群特征性，副溶血性弧菌的血性弧菌的O O抗原有抗原有1313种种n鞭毛抗原，不耐热，无型特异性鞭毛抗原，不耐热，无型特异性3培养特性培养特性o营养要求不高营养要求不高o在无盐培养基上不能生长，最适合生长的在无盐培养基上不能生长，最适合生长的氯化钠浓度为氯化钠浓度为3.5%3.5%，超过，超过8%8%不能生长不能生长o最适最适pHpH为为7.78.07.78.0，但，但pH9.5pH9.5时仍能生长，时仍能生长，最适生长温度为最适生长温度为30373037o在碱性胨水中经在碱性胨水中经6969h h增菌可形成菌膜增菌可形成菌膜oTCBSTCBS琼脂平板琼脂平板:0.52.00.52.0
31、mmmm大小，蔗糖不发酵而呈蓝绿色菌大小，蔗糖不发酵而呈蓝绿色菌落落o普通血平板普通血平板:不溶血或只产生不溶血或只产生溶血溶血o从腹泻患者中分离到的菌株从腹泻患者中分离到的菌株95%95%以上在我妻琼脂上产生以上在我妻琼脂上产生溶溶血现象，称为神奈川现象（血现象，称为神奈川现象（KPKP）o嗜盐性选择平板嗜盐性选择平板:较大，圆形，隆起，稍浑浊，半透明或较大，圆形，隆起，稍浑浊，半透明或不透明，无粘性不透明，无粘性oSSSS平板平板:扁平，无色半透明，蜡滴状菌落，有辛辣味，不扁平，无色半透明，蜡滴状菌落，有辛辣味，不易刮下，易刮下，4848h h后牢固粘着培养基上，部分菌株不能生长后牢固粘着
32、培养基上，部分菌株不能生长o麦康凯平板麦康凯平板:部分菌株不生长部分菌株不生长o伊红美兰琼脂和中国兰琼脂培养基不能用于本菌的初次分伊红美兰琼脂和中国兰琼脂培养基不能用于本菌的初次分离离抵抗力抵抗力o抵抗力弱抵抗力弱o不耐热，不耐热，90 190 1minmin即被杀死即被杀死o淡水中不超过淡水中不超过2 2日，但海水中能存活日，但海水中能存活4747天以上天以上o耐碱怕酸，耐碱怕酸，1%1%醋酸或醋酸或50%50%食醋中食醋中1 1minmin死亡死亡 微生物检验微生物检验1.1.检验程序检验程序 微生物检验微生物检验 2.2.标本采集标本采集:可采集患者的粪便，肛门拭子可采集患者的粪便，肛门
33、拭子和可疑食物。应及时接种，或置碱性胨水或和可疑食物。应及时接种，或置碱性胨水或卡卡-布运送培养基中送检布运送培养基中送检3.分离培养与鉴定分离培养与鉴定(1)(1)增菌培养增菌培养n标本接种标本接种1%1%NaClNaCl碱性胨水或碱性胨水或4%4%NaClNaCl蛋白胨水蛋白胨水 中进行选择性增菌中进行选择性增菌 (2)(2)分离培养分离培养n标本直接接种或增菌后接种标本直接接种或增菌后接种TCBSTCBS平板或嗜盐菌平板或嗜盐菌 选择平板选择平板nTCBSTCBS平板：绿色或蓝绿色菌落，不透明，直径平板：绿色或蓝绿色菌落，不透明，直径 12 12mmmm微突起菌落微突起菌落n嗜盐菌选择性
34、平板：较大、圆形、隆起，稍混嗜盐菌选择性平板：较大、圆形、隆起，稍混 浊、半透明或不透明、无粘性菌落浊、半透明或不透明、无粘性菌落（3）鉴定）鉴定o氧化酶阳性，氧化酶阳性，O/129O/129（150g150g）敏感敏感o发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇产酸，不发酵发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇产酸，不发酵蔗糖、乳糖。蔗糖、乳糖。o吲哚试验阳性吲哚试验阳性o大部分菌株脲酶阴性，大部分菌株脲酶阴性，V-PV-P阴性阴性oNaClNaCl生长试验生长试验n在不含在不含NaClNaCl和含和含10%10%的蛋白胨水中不生长，在的蛋白胨水中不生长，在3%3%和和7%7%NaClNaCl 蛋白胨水中生长蛋白胨水中
35、生长o赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶阳性，精氨酸双赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶阳性，精氨酸双水解酶阴性水解酶阴性o神奈川现象阳性神奈川现象阳性o毒素测定毒素测定n用免疫学方法测定用免疫学方法测定TDHTDH和和TRHTRH。n用基因探针和用基因探针和PCRPCR方法直接测定毒素基因方法直接测定毒素基因tdhtdh或或trhtrh2024/3/3052抵抗力抵抗力o抵抗力弱抵抗力弱o不耐热，不耐热，90 1min即被杀死即被杀死o淡水中不超过淡水中不超过2日，但海水中能存活日，但海水中能存活47天以上天以上o耐碱怕酸，耐碱怕酸，1%醋酸或醋酸或50%食醋中食醋中1min死亡死亡 2024/3/3054
36、其他致病性弧菌其他致病性弧菌q溶藻性弧菌：曾称副溶血弧菌溶藻性弧菌：曾称副溶血弧菌2 2型，最耐型，最耐盐细菌，盐细菌，1010NaclNacl，TCBSTCBS大、黄菌落大、黄菌落,最常见于外耳、中耳感染患者，也常见最常见于外耳、中耳感染患者，也常见于伤口感染是弧菌属细菌中耐盐性最强于伤口感染是弧菌属细菌中耐盐性最强的致病菌的致病菌2024/3/3055q创伤弧菌：创伤弧菌：创伤弧菌：创伤弧菌：1976197619761976年首次被认识。在致病性弧菌中，年首次被认识。在致病性弧菌中，年首次被认识。在致病性弧菌中，年首次被认识。在致病性弧菌中，该菌引起的疾病最为严重，引起的菌血症和伤口该菌引
37、起的疾病最为严重，引起的菌血症和伤口该菌引起的疾病最为严重，引起的菌血症和伤口该菌引起的疾病最为严重，引起的菌血症和伤口感染的病程进展非常快而致命。感染的病程进展非常快而致命。感染的病程进展非常快而致命。感染的病程进展非常快而致命。发酵水杨酸和发酵水杨酸和发酵水杨酸和发酵水杨酸和ONPGONPGONPGONPG阳性阳性阳性阳性 感染通常发生在气温较高季节，通过生食海产品，感染通常发生在气温较高季节，通过生食海产品，感染通常发生在气温较高季节，通过生食海产品，感染通常发生在气温较高季节，通过生食海产品，侵入肠粘膜淋巴结和门静脉，侵入血流导致菌血侵入肠粘膜淋巴结和门静脉，侵入血流导致菌血侵入肠粘膜
38、淋巴结和门静脉，侵入血流导致菌血侵入肠粘膜淋巴结和门静脉，侵入血流导致菌血症，死亡率症，死亡率症，死亡率症，死亡率50%50%50%50%青年人好发，特别是酒精性肝功能损伤或免疫缺青年人好发，特别是酒精性肝功能损伤或免疫缺青年人好发，特别是酒精性肝功能损伤或免疫缺青年人好发，特别是酒精性肝功能损伤或免疫缺陷人，与转铁蛋白有关陷人，与转铁蛋白有关陷人，与转铁蛋白有关陷人，与转铁蛋白有关 引起创口感染，导致蜂窝织炎，偶尔可侵入血流引起创口感染，导致蜂窝织炎，偶尔可侵入血流引起创口感染，导致蜂窝织炎，偶尔可侵入血流引起创口感染，导致蜂窝织炎，偶尔可侵入血流导致菌血症而死亡。导致菌血症而死亡。导致菌血
39、症而死亡。导致菌血症而死亡。致病机理尚不明确，但产生的胶原酶、蛋白酶和致病机理尚不明确，但产生的胶原酶、蛋白酶和致病机理尚不明确，但产生的胶原酶、蛋白酶和致病机理尚不明确，但产生的胶原酶、蛋白酶和细胞毒素可造成组织严重损害细胞毒素可造成组织严重损害细胞毒素可造成组织严重损害细胞毒素可造成组织严重损害2024/3/3056其他致病性弧菌其他致病性弧菌q河流弧菌：曾称霍乱弧菌河流弧菌：曾称霍乱弧菌F F群，腹泻，易群，腹泻，易于亲水气单胞菌混淆于亲水气单胞菌混淆q拟态弧菌：曾称霍乱弧菌拟态弧菌：曾称霍乱弧菌V V群，腹泻群，腹泻q霍利斯弧菌：霍利斯弧菌：TCBSTCBS不生长，腹泻不生长，腹泻q弗
40、尼斯弧菌：极似河流弧菌，腹泻弗尼斯弧菌：极似河流弧菌，腹泻q辛辛那提弧菌：败血症辛辛那提弧菌：败血症临床意义临床意义o临床标本中分离的病原性弧菌都应认为有临临床标本中分离的病原性弧菌都应认为有临床意义床意义o特别是从粪便标本中分离到霍乱弧菌特别是从粪便标本中分离到霍乱弧菌O1O1群、群、O139O139群和副溶血性弧菌群和副溶血性弧菌o从任何临床标本分离到创伤弧菌，均应通知从任何临床标本分离到创伤弧菌，均应通知临床医师，并根据我国传染病防治法有临床医师，并根据我国传染病防治法有关规定及时作传染病报告，并将报告和菌种关规定及时作传染病报告，并将报告和菌种一起报送到各级法定部门。一起报送到各级法定
41、部门。2024/3/3058 试试试试 验验验验霍霍霍霍乱乱乱乱弧弧弧弧菌菌菌菌拟拟拟拟态态态态弧弧弧弧菌菌菌菌麦麦麦麦氏氏氏氏弧弧弧弧菌菌菌菌霍霍霍霍利利利利斯斯斯斯弧弧弧弧菌菌菌菌海海海海鱼鱼鱼鱼弧弧弧弧菌菌菌菌河河河河弧弧弧弧菌菌菌菌弗弗弗弗尼尼尼尼斯斯斯斯弧弧弧弧菌菌菌菌溶溶溶溶藻藻藻藻弧弧弧弧菌菌菌菌副副副副溶溶溶溶血血血血性性性性弧弧弧弧菌菌菌菌创创创创伤伤伤伤弧弧弧弧菌菌菌菌辛辛辛辛辛辛辛辛那那那那提提提提弧弧弧弧菌菌菌菌沙沙沙沙鱼鱼鱼鱼弧弧弧弧菌菌菌菌精氨酸（精氨酸（精氨酸（精氨酸（a a a al l l l）0 00 060600 0959593931001000 00 0
42、0 00 00 0赖氨酸（赖氨酸（赖氨酸（赖氨酸（a a a al l l l）999910010035350 050500 00 0999910010099995757100100鸟氨酸（鸟氨酸（鸟氨酸（鸟氨酸（a a a al l l l）999999990 00 00 00 00 05050959555550 00 0葡萄糖产气葡萄糖产气葡萄糖产气葡萄糖产气0 00 00 00 010100 01001000 00 00 00 00 0麦芽糖麦芽糖麦芽糖麦芽糖999999991001000 01001001001001001001001009999100100100100100100甘露
43、醇甘露醇甘露醇甘露醇9999999996960 00 0979710010010010010010045451001005050水杨苷水杨苷水杨苷水杨苷1 10 09 90 00 00 00 04 41 195951001000 0蔗糖蔗糖蔗糖蔗糖1001000 01001000 05 510010010010099991 115151001005050致病性弧菌属生化特性致病性弧菌属生化特性（阳性百分率）（阳性百分率）2024/3/3059试试试试 验验验验霍霍霍霍乱乱乱乱弧弧弧弧菌菌菌菌拟拟拟拟态态态态弧弧弧弧菌菌菌菌麦麦麦麦氏氏氏氏弧弧弧弧菌菌菌菌霍霍霍霍利利利利斯斯斯斯弧弧弧弧菌菌菌菌
44、海海海海鱼鱼鱼鱼弧弧弧弧菌菌菌菌河河河河弧弧弧弧菌菌菌菌弗弗弗弗尼尼尼尼斯斯斯斯弧弧弧弧菌菌菌菌溶溶溶溶藻藻藻藻弧弧弧弧菌菌菌菌副副副副溶溶溶溶血血血血性性性性弧弧弧弧菌菌菌菌致致致致伤伤伤伤弧弧弧弧菌菌菌菌辛辛辛辛辛辛辛辛那那那那提提提提弧弧弧弧菌菌菌菌沙沙沙沙鱼鱼鱼鱼弧弧弧弧菌菌菌菌氧化酶氧化酶氧化酶氧化酶1001001001000 010010095951001001001001001001001001001001001001001009494909050500 00 0404035350 05 5757586860 0硝酸盐硝酸盐硝酸盐硝酸盐99991001000 0100100100
45、100100100100100100100100100100100100100100100a a a al l l l1001001001000 00 00 00 00 00 00 00 00 00 0a a a al l l l1 10 044440 00 071717878949480800 062620 0敏感敏感敏感敏感9999959590904040909031310 01919202098982525100100枸橼酸盐枸橼酸盐枸橼酸盐枸橼酸盐9797999975750 00 093931001001 13 3757521210 0致病性弧菌属生化特性致病性弧菌属生化特性（阳性百分
46、率）（阳性百分率）试试试试 验验验验霍乱霍乱霍乱霍乱VcVcVcVc拟态拟态拟态拟态VmimVmimVmimVmim麦氏麦氏麦氏麦氏VmetVmetVmetVmet辛辛那提辛辛那提辛辛那提辛辛那提VcinVcinVcinVcin霍利斯霍利斯霍利斯霍利斯VhVhVhVh海鱼海鱼海鱼海鱼VdVdVdVd河流河流河流河流VfluVfluVfluVflu弗尼斯弗尼斯弗尼斯弗尼斯VfurVfurVfurVfur溶藻溶藻溶藻溶藻VaVaVaVa副溶血副溶血副溶血副溶血VpVpVpVp创伤创伤创伤创伤VvVvVvVv沙鱼沙鱼沙鱼沙鱼VcarVcarVcarVcara a a al l l l中生长中生长中生
47、长中生长1 1 1 1a a a al l l l中生长中生长中生长中生长氧化酶氧化酶氧化酶氧化酶硝酸盐硝酸盐硝酸盐硝酸盐精氨酸精氨酸精氨酸精氨酸赖氨酸赖氨酸赖氨酸赖氨酸鸟氨酸鸟氨酸鸟氨酸鸟氨酸肌醇肌醇肌醇肌醇 弧菌属的分群鉴定弧菌属的分群鉴定气单胞菌属检验程序气单胞菌属检验程序标本标本增菌增菌 分离培养分离培养（血平板、（血平板、Mac）全面生化反应全面生化反应可疑菌落可疑菌落肠毒素测定肠毒素测定初步生化反应初步生化反应 涂片涂片染色镜检染色镜检血标本血标本氧化酶氧化酶TCBSTCBS生长生长O/129O/129耐盐试验耐盐试验2024/3/3062气单胞菌属气单胞菌属o形态染色：革兰阴性杆
48、菌，或球杆状、形态染色：革兰阴性杆菌，或球杆状、丝状，极端鞭毛，无芽胞丝状，极端鞭毛，无芽胞o生长条件：兼性厌氧，营养要求不高，生长条件：兼性厌氧，营养要求不高，生长温度较宽，生长温度较宽，004545，嗜冷菌嗜冷菌3737以下生长，嗜温菌以下生长，嗜温菌10104242生长生长2024/3/3063气单胞菌属气单胞菌属o生长现象：生长现象：TCBSTCBS上不生长，血平板：上不生长，血平板：灰白、光滑、凸起菌落，肠道选择平灰白、光滑、凸起菌落，肠道选择平板：形成不发酵乳糖菌落板：形成不发酵乳糖菌落o生化反应：氧化酶、触酶、发酵生化反应：氧化酶、触酶、发酵葡萄糖产酸产气、葡萄糖产酸产气、6.5
49、6.5NaClNaCl不生长、不生长、O129O129耐受耐受o多数菌株产多数菌株产-内酰胺酶，对青霉素内酰胺酶，对青霉素耐药耐药2024/3/3064气单胞菌属临床意义气单胞菌属临床意义o致病物质：溶血毒素、细胞毒素致病物质：溶血毒素、细胞毒素o所致疾病：所致疾病：肠道感染是夏季腹泻常见病原菌肠道感染是夏季腹泻常见病原菌肠外感染有败血症、伤口感染等肠外感染有败血症、伤口感染等2024/3/3065鉴定依据鉴定依据o革兰阴性杆菌，丛鞭毛革兰阴性杆菌，丛鞭毛o肠道选择平板上无色透明菌落肠道选择平板上无色透明菌落o氧化酶、葡萄糖发酵氧化酶、葡萄糖发酵oO/129O/129：R RoTCBSTCBS
50、：o7.07.0NaClNaCl：邻单胞菌属检验程序邻单胞菌属检验程序标本标本标本标本增菌增菌增菌增菌 分离培养分离培养分离培养分离培养（血平板、（血平板、（血平板、（血平板、MacMac）全面生化反应全面生化反应全面生化反应全面生化反应可疑菌落可疑菌落可疑菌落可疑菌落肠毒素测定肠毒素测定肠毒素测定肠毒素测定初步生化反应初步生化反应初步生化反应初步生化反应 涂片涂片涂片涂片染色镜检染色镜检染色镜检染色镜检血标本血标本血标本血标本氧化酶氧化酶氧化酶氧化酶TCBSTCBSTCBSTCBS生长生长生长生长O/129O/129O/129O/129耐盐试验耐盐试验耐盐试验耐盐试验2024/3/3067邻