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1、YU N N AN N O R M AL U N IVERS ITY发酵工程学实验报告实验三、乳酸菌的分离和酸奶的制作学院生命科学学院专业应用生物教育班级12应生A班姓.名 李顺昌学号124120218实验课程.乳酸菌的分离和酸奶的制作指导教师 许波开课学期 2014-2015学年下学期实验三、乳酸菌的分离和酸奶的制作小组合作：是 小组成员：李顺昌、李媛媛、方淑萍、周玉坤一、实验目的1 .掌握分离纯化微生物的基本方法2 .掌握酸奶制作的基本原理3 .学会酸奶的制作方法二、实验设备与材料1、仪器设备：三角瓶、平皿、试管、移液管、玻璃涂布棒、灭菌锅、超净 工作台、培养箱、恒温摇床、冰箱等。2、材料
2、：市售酸奶、奶粉、白糖、棉花、酸奶瓶（自备，1个/人）等。3、培养基：乳酸菌分离用乳酸菌分离用培养基：牛肉膏：0.5%；酵母膏：0.5%；蛋白陈：1%； 葡萄糖:1%；乳糖：0.5%； NaCl： 0.5%；琼脂：2.5%； pH6.8。配制250mL/组，装于2个三角瓶三、实验原理1、酸奶制作的基本原理（1）酸奶：以牛奶为主要原料，接入一定量乳酸菌，经发酵后制成的一种 乳制品饮料。（2）生理生化原理牛奶（乳糖）一接种乳酸菌一B-D-半乳糖甘酶一乳糖（半乳糖和葡萄糖） 一乳酸发酵（葡萄糖）一乳酸一破坏钙-酪蛋白-磷酸复合物的稳定性一蛋白质凝 结一酸奶2、提供适宜的生长条件、采用一定的微生物分离
3、纯化方法，就能够从酸奶 中分离出乳酸菌。3、酸奶中含有乳酸菌的菌体及代谢产物，因而对人体的肠胃消化道疾病有 良好的治疗效果。四、实验方法步骤（一）乳酸菌的分离纯化一一稀释涂布平板法1、倒平板（约6块/100ml）2、制备酸奶稀释液（1）将0.5mL酸奶吸入4.5mL无菌水（自备）中，摇动5min；（2）用无菌吸管吸出0.5mL酸奶悬液，加入盛有4.5mL无菌水的试管中, 充分混匀，制备得到10-2稀释液；（3）再从中吸出0.5mL加入盛有4.5mL无菌水的大试管中，混匀后得到 10-3稀释液；（4）以此类推，分别制备得到10-4、10-5、10-6酸奶稀释液。3、涂布用无菌吸管分别吸取10-3
4、、10-4和10-5稀释液各0.1mL,对号放入已经 写好记号的平板中央，用无菌玻璃涂棒涂匀（每个稀释度涂2块平板）。4、培养：37倒置培养2-3d5、观察菌落特征（周二中午）扁平型菌落：大小为2-3mm,边缘不整齐，很薄，近似透明状，染色镜 检为细杆状；半球状隆起菌落：大小为l-2mm隆起成半球状，高约0.5mm,边缘整齐 且四周可见酪蛋白水解透明圈，染色镜检为链球状；礼帽形突起菌落：大小为l-2mm,边缘基本整齐，菌落中央呈隆起状， 四周较薄，有酪蛋白水解透明圈，染色镜检亦为链球状。6、分离纯化：（周二）挑取符合上述特征的单菌落，划线于平板，37倒 置培养约2d （下周四中午）；如发现杂菌
5、需重复上述步骤（纯化）直到获得纯培 养。（二）酸奶的制作1、菌种的制备（1）将分离纯化所得到的乳酸菌分别接种于LB培养基中（30ml/瓶）（下 周4早上）;（2） 37 200r/min摇瓶培养约48h （下周5晚）。2、牛奶的配制复原牛奶（以组为单位，1瓶/人）：奶粉+开水+ 8%白糖（可据个人口 味调整）新鲜牛奶：新鲜牛奶+8%白糖3、装瓶、包扎：约200mL/瓶，两层牛皮纸4、灭菌：将牛奶和移液管于120灭菌20min、冷却至约40。5、接种：接种后用无菌吸管充分搅拌均匀，包扎并在牛皮纸上写上姓名。接种市售酸奶：按牛奶量的5%,用无菌吸管接种市售酸奶（1人操作/ 组）。接种分离所得乳酸菌
6、：按（复原）牛奶量的5%,用无菌吸管接种液体 培养的乳酸菌一一嗜热乳链球菌和保加利亚乳杆菌（1： 1）。6、培养：42-43C的温箱中培养数小时（视凝乳情况而定），培养过程中 切勿摇动。7、冷藏：酸奶在发酵形成凝块后，应在4-7C的低温下保持24小时以上, 称为后熟阶段，以获得酸奶特有的风味和口感。8、品味（下周1早10点）：酸奶质量的评定以品尝为标准，通常有凝 块状态、表层光洁度、酸度及香味等多项指标。五、实验报告L第一部分实验：乳酸菌的分离纯化（一）实验现象、数据及结果（二）分析与讨论（三）结论（四）实验总结1、本次实验成败之处及其原因分析2、本实验的关键环节及改进措施做好本实验需要把握的关键环节；若重做本实验，为实现预期效果，仪器操作和实验步骤应 如何改善。3、对实验的自我评价2.第二部分实验：酸奶的制作（一）实验现象、数据及结果（二）分析与讨论（三）结论（四）实验总结1、本次实验成败之处及其原因分析2、本实验的关键环节及改进措施做好本实验需要把握的关键环节;若重做本实验，为实现预期效果，仪器操作和实验步骤应 如何改善。3、对实验的自我评价六、思考题