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1、微生物的培养技术及应用微生物的培养技术及应用微生物的基本培养技术微生物的基本培养技术本节聚焦：本节聚焦：1.1.什么是培养基？如何配置？什么是培养基？如何配置？2.2.什么是无菌技术？什么是无菌技术？无细胞结构无细胞结构原核细胞原核细胞真核细胞真核细胞微生物微生物真菌真菌:酵母菌、毛霉等；酵母菌、毛霉等；原生生物原生生物:草履虫、变形虫等草履虫、变形虫等微生物微生物：难以用肉眼观察的微小生物的统称。：难以用肉眼观察的微小生物的统称。病毒病毒:SARS:SARS、新冠病、新冠病毒、毒、HIVHIV、等、等RANRAN病毒；病毒；噬菌体等噬菌体等DNADNA病毒病毒细菌细菌:蓝细菌、大肠蓝细菌、大
2、肠杆菌、乳酸菌等；杆菌、乳酸菌等；放线菌放线菌：链霉菌等：链霉菌等研究和应用微生物的前提研究和应用微生物的前提?实验室培养微生物条件实验室培养微生物条件?一、培养基的配制阅读教材阅读教材9 9页页-10-10页相关内容，回答以下问题：页相关内容，回答以下问题：1.培养基的概念？培养基的种类？培养基的作用？2.培养基的成分？各成分的作用？3.培养基能直接培养病毒吗？1.1.概念概念2.2.类型类型及用途及用途液体培养基：液体培养基：表面生长表面生长表面生长表面生长（需氧型）（需氧型）（需氧型）（需氧型）均匀混浊生长（兼性厌养型）均匀混浊生长（兼性厌养型）均匀混浊生长（兼性厌养型）均匀混浊生长（兼
3、性厌养型）沉淀生长沉淀生长沉淀生长沉淀生长（厌养型）（厌养型）（厌养型）（厌养型）半固体培养基：半固体培养基：(是否运动是否运动)无动力无动力无动力无动力有动力有动力有动力有动力(弥散弥散弥散弥散)固体培养基：菌落固体培养基：菌落几种菌落及其形态划分标准划分标准培养基种类培养基种类特点特点用途用途物理性质物理性质化学成分化学成分天然培养基天然培养基合成培养基合成培养基用途用途鉴别培养基鉴别培养基培养基的种类培养基的种类不加凝固剂不加凝固剂加凝固剂，如加凝固剂，如琼脂琼脂工业生产，工业生产，扩大培养扩大培养观察微生物的运动观察微生物的运动微生物微生物分离、鉴分离、鉴定定、活菌、活菌计数计数、保存
4、保存菌种菌种含化学成分不明确天然物质含化学成分不明确天然物质工业生产工业生产培养基成分明确培养基成分明确分类、鉴定分类、鉴定在培养基中在培养基中加入加入某种化学物某种化学物质质,以以抑制不需要抑制不需要的微生物的微生物的生长的生长,促进所需要促进所需要的微生的微生物的生长物的生长富集富集、分离分离出出特定微生物特定微生物在培养基中在培养基中加入某种指示剂加入某种指示剂或化学药品或化学药品,用以用以鉴别鉴别不同不同种类的微生物种类的微生物鉴别鉴别不同种不同种类微生物类微生物选择培养基选择培养基液体培养基液体培养基半固体培养基半固体培养基固体培养基固体培养基3.3.培养基的成分培养基的成分（1）基
5、本成分：碳源、氮源、水、无机盐碳源：无机碳源：无机碳源：COCO2 2、NaHCONaHCO3 3有机碳源：有机碳源：葡萄糖、蛋白质、牛肉膏等葡萄糖、蛋白质、牛肉膏等氮源：无机氮源：无机氮源：NHNH3 3、N N2 2、铵盐等、铵盐等、铵盐等、铵盐等有机氮源：有机氮源：牛肉膏牛肉膏、蛋白胨、蛋白胨、尿素、尿素、氨基酸氨基酸氨基酸氨基酸等等作用：作用：构成生物体细胞的物质和一些代谢产物构成生物体细胞的物质和一些代谢产物 有些是异养生物的能源物质有些是异养生物的能源物质作用：合成蛋白质、核酸及含氮代谢产物等物质所必需的作用：合成蛋白质、核酸及含氮代谢产物等物质所必需的组分组分含量含量提供的主要营
6、养提供的主要营养牛肉膏牛肉膏5g5g碳源、氮源、磷酸盐和维生素等碳源、氮源、磷酸盐和维生素等蛋白胨蛋白胨 10g10g碳源、氮源和维生素等碳源、氮源和维生素等NaClNaCl5g5g无机盐无机盐H H2 2O O定容至定容至1000mL1000mL水水表1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成（2）在主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长的条件有哪些？例子？二、无菌技术阅读教材阅读教材1010页页-11-11页相关内容，回答以下问题：页相关内容，回答以下问题：1.1.获得纯净的微生物培养物的关键是什么？获得纯净的微生物培养物的关键是什么？2.2.消毒和灭菌的概念？它们的区别？
7、消毒和灭菌的概念？它们的区别？3.3.常用的消毒和灭菌方法有哪些？常用的消毒和灭菌方法有哪些？4.4.各种方法适用的对象？各种方法适用的对象？1.获得纯净的微生物培养物的关键是_。防止杂菌污染2.无菌技术主要包括 。消毒和灭菌消毒：是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。灭菌：是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。3.具体操作：实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触 为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在超净工作台并在酒精灯火焰附
8、近进行。3.消毒和灭菌的概念消毒：是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。灭菌：是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。煮沸消毒法：100煮沸5-6min。巴氏消毒法：62-65下煮30min 或 80-90下煮30s-1min。化学药剂消毒法：用70%酒精擦拭双手；氯气消毒水源。紫外线消毒法：用紫外灯照射接种室、接种箱、超净工作台。4.常用的消毒方法实例：牛奶实例：牛奶 优点？优点？湿热灭菌：利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌。高压蒸汽灭菌效果最好，100 kPa、121下维持15-30 min，常用于培养基、无菌水等的灭菌。干热灭菌
9、：160-170下加热2-3h。常用于玻璃器皿（吸管、培养皿等）和金属器具（耐高温的和需要保持干燥的物品）。灼烧灭菌：常用于接种工具，如涂布器、接种环、接种针或其它金属用具，试管口、瓶口等的灭菌。直接在酒精灯火焰的充分燃烧层（外焰）灼烧。5.常用的灭菌方法思考：无菌技术除用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么作用？避免操作者被微生物感染避免操作者被微生物感染三、微生物的纯培养阅读教材阅读教材1111页页-13-13页相关内容，回答以下问题：页相关内容，回答以下问题：1.培养物、纯培养物、纯培养的概念？2.菌落、单菌落的概念？获得单菌落的方法？3.酵母菌纯培养的方法步骤？4.倒平
10、板的步骤和注意事项？5.平板划线法的步骤和注意事项？1.培养物、纯培养物、纯培养的概念2.菌落、单菌落的概念3.获得单菌落的方法平板划线法和稀释涂布平板法微生物群微生物群分散分散或或稀释稀释单个细胞单个细胞单个菌落单个菌落繁殖繁殖4.酵母菌纯培养的方法步骤（1）制备培养基配制培养基灭菌培养基？培养皿？倒平板 待培养基冷却到50左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到5050左右时，才能用来倒平板。你用左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？什么办法来估计培养基的温度？2.2.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的
11、在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.怎么确定所倒平板未被杂菌污染？怎么确定所倒平板未被杂菌污染？将所倒平板放入37的恒温箱中培养，观察是否有菌落形成，以确定是否被污染或灭菌是否彻底。（2）接种和分离酵母菌连续划线法分区划线法平板划线法的具体操作：1.将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环的金属丝烧红。2.在火焰旁冷却接种环。同时，拔出装有酵母菌培养液的试管的棉塞 3.试管口通过火焰 4.在火焰附近用接种环蘸取一环
12、菌液 5.试管口通过火焰，并塞上棉塞 6.在火焰附近将皿盖打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖。7.灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。注意不要将最后一次的划线与第一次划线相连。12345第1区划线接种环灭菌第2区划线接种环灭菌第3区划线接种环灭菌接种环灭菌蘸取菌液冷却冷却冷却平板划线法注意事项:接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次划线首尾不能相接每次划线前接种环进行灭菌划线后,培养皿倒置培养接种环灼烧次数 =区域数+1（3）培养酵母菌 完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一
13、个未接种的平板倒置，放入28左右（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）的恒温培养箱中培养24-48h.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？思考思考讨论讨论项目目的蘸取菌液前灼烧每次划线前灼烧划线操作结束后灼烧避免接种环上可能存在的微生物污染菌种避免接种环上可能存在的微生物污染菌种杀死上一次划线结束后接种环上残留的杀死上一次划线结束后接种环上残留的菌种，菌种，使下一次划线时接种环上的菌种使下一次划线时接种环上的菌种直接来源于上一次划线的末端直接来源于上一次划线的末端及时杀死接种环上残留的菌种，避免菌及时杀死接种环上残留的菌种，
14、避免菌种污染环境和感染操作者种污染环境和感染操作者2.在第二次划线以及以后的操作时，为什么要从上一次划线的末端开始划线？3.为什么最后一次的划线不能与第一次的划线相连？思考思考讨论讨论 使细菌的数目随划线次数的增加而逐渐减少，最终分离得到单菌落。使细菌的数目随划线次数的增加而逐渐减少，最终分离得到单菌落。最后一次划线已经将细菌稀释成单个的细胞，如果与第一次划线相连，最后一次划线已经将细菌稀释成单个的细胞，如果与第一次划线相连，则增加了细菌的数目，得不到纯化的效果。则增加了细菌的数目，得不到纯化的效果。1.培养基的概念、种类、作用及营养成分2.获得纯净培养物的关键？消毒和灭菌的概念、方法及作用对象。3.培养物、纯培养物、菌落和单菌落的概念？获得单菌落的方法？4.酵母菌纯培养的方法步骤？5.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？6.平板划线法的操作步骤（熟读）7.划线第一步以及每次划线之前和操作结束后都要灼烧接种环的目的分别是？8.在第二次划线以及以后的操作时，为什么要从上一次划线的末端开始划线？9.为什么最后一次的划线不能与第一次的划线相连？10.10.怎么确定所倒平板未被杂菌污染？怎么确定所倒平板未被杂菌污染？背背 诵诵