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1、细胞生物学实验报告细胞原代培养 姓名： 学号： 班级: 专业： 同组成员：一、实验原理 细胞培养就是生物学与医学研究中最常用得手段之一，可分为原代培养与传代培养两种。原代培养就是直接从生物体获取组织或器官得一部分进行培养。由于培养得细胞刚刚从活体组织分离出来，故更接近于生物体内得生活状态。这一方法可为研究生物体细胞得生长、代谢、繁殖提供有力得手段.同时也为以后传代培养创造条件。 原代培养得方法： 1、组织块法在平皿中用弯头剪把组织尽量剪碎，每个组织块小于1mm大小.用Hnk液洗涤23次，自然沉淀。用吸管吸去上清液。将组织块贴于培养瓶进行培养。 2、酶消化法 将1mm3大小得组织块放入1个三角瓶
2、内加入1030m得0、125得胰蛋白酶。370磁棒搅拌消化0分钟.然后终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液,离心00rpm 50分钟收集细胞。弃上清,加入带有双抗得培养基，放入培养瓶培养。 取材注意事项: 取材要注意新鲜与保鲜.取材应严格无菌。取材与原代细胞制作时，要用锋利得器械,如手术刀或剃须刀片切碎组织，尽可能减少对细胞得机械损伤.要仔细去除所取材料上得血液(血块)、脂肪、坏死组织及结缔组织，切碎组织时应避免组织干燥，可在含少量培养液得器皿中进行。取材应注意组织类型、分化程度、年龄等，一般来讲,胚胎组织较成熟个体组织容易培养,分化低得较分化高得组织容易生长，肿瘤组织较正常组织容易培养。
3、二、实验目得、理解细胞原代培养原理、熟悉细胞原代培养方法与过程3、了解细胞原代培养得应用、独立进行细胞原代培养操作三、实验材料手术小直剪刀、眼科直镊子、眼科弯镊子、玻璃平皿、培养瓶、试管、移液管、巴斯德吸管、废液缸、75酒精棉球、酒精灯。动物：912日龄得鸡胚蛋四、实验步骤、购买912日龄鸡胚蛋。放入孵化箱中孵养待用。、取鸡胚蛋一枚放入超净工作台中，用酒精棉球擦拭鸡蛋壳后，气室处擦拭两遍,用镊子小心去除气室部分得蛋壳。、取haks液按1:10加入双抗。、换用洁净得无菌镊子揭开膜，再用洁净得无菌弯头镊子取出鸡胚至灭菌得培养皿中，并用Dans液冲洗鸡胚三遍.5、用眼科剪去除鸡胚得头部、四肢以及内脏
4、，然后用anks液充分洗涤躯干部分三遍.6、将洗涤过得躯干移至干净得培养皿,吸去多余得液体，然后用眼科剪将躯干充分剪碎(约四分之一米粒大小）.7、向碎块中加入一滴管胎牛血清将组织碎块切散,用滴管将组织碎块接入培养瓶中,静置一分钟，再加入5ml完全培养液，将瓶子翻转倒置后在7度培养箱中放置23小时,待组织块微干与瓶壁贴牢后再将瓶子翻转过来,于培养箱中培养。8、将用过得试剂仪器等摆回原处,将超净台打扫干净,关闭照明灯及抽风机.、实验后数小时后去观察组织块中细胞迁移情况，并拍摄照片.五、实验结果 原代培养过夜后第二天中午一点拍照，观察细胞迁移情况,以下就是我们小组得实验结果. 鸡胚成纤维细胞原代培养
5、（倒置显微镜20） 鸡胚成纤维细胞原代培养(倒置显微镜20)显微镜下可观察到鸡胚组织块附近有大量细胞迁移.迁移出来得细胞呈纤维状，贴壁生长.实验结果比较理想，细胞迁移较多,大部分细胞活性较好，呈梭形附着与瓶壁上，且没有污染发生.操作时应注意得问题:原代培养要注意无菌操作，实验过程中要保持组织块浸润在缓冲液中，接种组织块到培养瓶中后应待组织略干燥，能黏附于瓶壁时再使之与培养液接触,翻转培养瓶时要轻,勿使组织块漂浮起来。如果组织块没有粘壁，则细胞不易生长，既使生长也因没有贴在瓶壁上，而无法收集到。六、思考题1、从细胞增殖及调控角度来瞧哪种组织与器官适用于原代培养实验？取材应注意组织类型、分化程度、
6、年龄等，一般来讲，胚胎组织较成熟个体组织容易培养,分化低得较分化高得组织容易生长，肿瘤组织较正常组织容易培养。、如何提高原代细胞培养得成功率？ 取材要注意新鲜与保鲜,取材应严格无菌。取材与原代细胞制作时，要用锋利得器械,如手术刀或剃须刀片切碎组织，尽可能减少对细胞得机械损伤。要仔细去除所取材料上得血液（血块）、脂肪、坏死组织及结缔组织，切碎组织时应避免组织干燥，可在含少量培养液得器皿中进行.取材应注意组织类型、分化程度、年龄等，一般来讲，胚胎组织较成熟个体组织容易培养，分化低得较分化高得组织容易生长,肿瘤组织较正常组织容易培养。 操作过程要时刻注意无菌操作，不能污染,仪器尽量靠无菌操作台内放.
7、在处理胚胎得时候要干净利落.在剪碎细胞得时候,尽量剪得碎一点。翻转培养瓶应待组织块略干燥，能粘附于瓶壁时再使之与培养液接触。翻转时要轻，勿使组织块漂浮起来。3、鸡胚成纤维细胞得应用?鸡胚成纤维细胞具有相对容易获得、增殖能力强、适应性强、良好得耐受性,性状比较稳定等特点，使得其广泛得被应用于分子与细胞生物学研究得许多方面。鸡胚成纤维细胞良好得耐受性使之易于进行从基因转染到微注射等较多领域得研究，还被广泛应用于病毒学领域得相关研究,同时也就是疫苗生产得一种重要得细胞资源。现在它被用来生产各种鸡得疫苗,如传染性法氏囊病、马立克病、新城疫疫苗等,也被用来表达一些基因工程产物。鸡胚成纤维细胞得原代培养在分子生物学、细胞学、遗传学、免疫学、肿瘤学及细胞工程学等领域,已发展成为一门重要得生物技术，并取得显著成就.【参考文献】1桑建利， 谭信、 细胞生物学实验指导、 北京:科学出版社， 2010、 北京师范大学生命科学学院、细胞生物学实验、北京：北京师范大学生命科学学院，015、9、