《HIV新近感染检测技术简介医学PPT课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《HIV新近感染检测技术简介医学PPT课件.ppt（46页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、HIV新近感染检测技术简介新近感染检测技术简介xxxxxx新近感染检测技术背景新近感染检测技术背景uu目前，在我国一直没有进行HIV发病率监测。uu近年来，由于实验室技术的发展，使得HIV发病率监测成为可能。新的血清学检测方法可以区分新近感染和既往感染。利用这些检测方法可以获得国家和各地区的发病率数据。几个概念几个概念uu发病率：是指艾滋病在人群中的新近感染 率。uu估测发病率有两种方法。1.1.流行病学方法2.2.实验室方法几个概念几个概念 早期HIV-1感染是指从感染HIV到体内可检测到的HIV抗体这段时间（即血清阳转期）。几个概念几个概念 新近感染新近感染是指血清阳转后，能够测得到HIV
2、抗体的产生，但感染时间较短。既往感染既往感染相对于新近感染而言，感染时间相对较长。新近感染者的血清抗体反应在抗体滴度、所占比例、特异性、亚型以及亲和力等方面都与既往感染所产生的HIV抗体不同RNA+Ab-P24+Ab-血清阳转后的方法RNAp24Ab血清阳转抗体检测临界值时 间反应指标感染感染HIV-1 HIV-1 检测检测血清阳转前的方法早期早期早期早期HIV-1HIV-1感染感染感染感染 新近感染新近感染新近感染新近感染Vironostika-LS EIA 亲和力测定试验BED既往感染既往感染既往感染既往感染HIV早期感染检测方法早期感染检测方法RNA 或 DNA 测定p24抗原测定HIV
3、早期感染检测方法早期感染检测方法 RNA 或 DNA 测定：检测RNA或DNA的实验窗口期短，约为2周RNA测定主要使用血浆标本DNA测定主要用全血或PBMCHIV早期感染检测方法早期感染检测方法 P24抗原是HIV病毒主要的核心蛋白超敏感p24测定（Up24试验）将信号进行化学放大来提高检测的灵敏度。HIV早期感染检测方法早期感染检测方法uuRNA（DNA）或p24抗原测定要检测大量的阴性血清样品，因而上述方法不推荐用于监测。HIV 新感染检测方法新感染检测方法uuVironostika-LS EIA uu亲和力测定试验uuBED C-EIABED C-EIAHIV 新感染检测方法新感染检测
4、方法Vironostika-LSVironostika-LS EIAEIA(less-sensitive EIA(less-sensitive EIA，即低敏的即低敏的EIA)EIA)：是以新近感染和既往感染所产生的HIV抗体滴度不同为基础建立起来的。这种试验方法在美国得到了成功的应用。然而，该方法是以HIV-1 B亚型为检测对象，因而它仅对B亚型的HIV感染人群较为适用。HIV 新感染检测方法新感染检测方法亲和力测定试验亲和力测定试验：在HIV感染早期，抗体与抗原的亲和力较低，并且随着感染时间的增加而日益增强。变性剂可以将低亲和力的抗体从抗原抗体复合物中抽提出来，因而抗体的亲和力可以通过加入
5、变性剂的方法来测定。HIV 新感染检测方法新感染检测方法HIV-1 BEDHIV-1 BED发病率估算试验（发病率估算试验（BED C-EIABED C-EIA）：是一种采用将多亚型gp41抗原肽包被反应板的IgG捕获EIA。多亚型抗原肽能确保该实验方法对B亚型和非B亚型的人群都能适用。BED C-EIA概况概况目前，检测HIV新近感染的血清学方法中，研究和应用最多的是BED C-EIABED C-EIA用该方法可以准确的判别出HIV的新近感染者BED C-EIA概况概况从从20012001到到20052005年，美国年，美国CDCCDC先后举行了先后举行了5 5次专家咨询会，次专家咨询会，监
6、测、统计、实验室和传染病方面的专家研讨后，确定监测、统计、实验室和传染病方面的专家研讨后，确定了了BEDBED估计人群发病率为最佳方案。估计人群发病率为最佳方案。目前，美国目前，美国3333个州参加了新感染检测监测网络，并将用个州参加了新感染检测监测网络，并将用血清学方法监测发病率纳入了美国艾滋病常规监测体系。血清学方法监测发病率纳入了美国艾滋病常规监测体系。20062006年年6 6月美国月美国CDCCDC发布了资源有限国家发布了资源有限国家BEDBED检测检测/监测监测HIVHIV新近感染指南。新近感染指南。BED C-EIA概况概况uu在我国，国家CDC艾滋病参比实验室于2005年引进该
7、方法，并对该方法进行了系统和规范的评价，结果显示：该方法能较好的区分HIV新近感染和既往感染，准备在我国以静脉吸毒为主的地区开展试点工作，获得经验后进一步推广。BED C-EIA概况概况 参加试点地区新疆自治区广西省云南省四川省广东省重庆市BED C-EIA实验原理实验原理 HIV-1 BED发病率估算试验（BED C-EIA）是通过检测样本中HIV-1特异性的IgG抗体相对于总IgG抗体的比例来确定HIV-1感染的时间。HIV-1特异性IgG占总IgG抗体的比例随着感染时间的延长而增高，新近感染的HIV-1特异性IgG抗体的比例要比既往感染的低。BED-C EIA示意图示意图血浆/血清(1/
8、100)(1 h/37o C)BED-生物素肽段(gp41)(1 h/37o C)链亲和素-过氧化物酶(90 min/37o C)TMB底物(15 min/25o C)包被羊抗人IgG抗体BED C-EIA实验原理实验原理从抗体转阳至预先设定的临界值（可以区分新近感染和既往感染的OD值）的这段时间称为BED的平均窗口期。HIV的不同亚型的平均窗口期略微不同，但是计算人群发病率时平均窗口期约为155天。BED,一种分支的多亚型合成肽一种分支的多亚型合成肽(gp41-IDR)DQQLLGIWGCSGKLICTTA-C4-K-C4-G-OHDQQLLGIWGCSGKHICTTN-C4-KDQKFLG
9、LWGCSGKIICTTA-C4-KD C4D-(Biotin)D C4BED方法的理论依据方法的理论依据感染早期特异性HIV-IgG 所占比例较低，随时间延长比例逐渐增大。测定HIV-IgG比例的多少以确定新近感染情况低于临界值的样本可以归到早期感染样本之列 BED C-EIA重要特征重要特征是一种竞争性捕获实验（是一种竞争性捕获实验（HIV-IgGHIV-IgG和非和非HIV-IgGHIV-IgG）间接地测量特异性间接地测量特异性HIV-IgGHIV-IgG 在总在总IgGIgG所占比例所占比例多亚型抗原肽能确保该实验方法对多亚型抗原肽能确保该实验方法对B B亚型和非亚型和非B B亚亚型的
10、人群都能适用型的人群都能适用 BED C-EIA BED C-EIA 方法必须使用方法必须使用HIV-1HIV-1阳性的样本阳性的样本在在1/1001/100的比例来稀释样本进行实验的比例来稀释样本进行实验该实验能证实在检测前该实验能证实在检测前155155天内发生血清阳转。天内发生血清阳转。BED C-EIA 初步评估初步评估n n感染率:N=139;n=622n n22 BBI 22 BBI 血样血样 (B(B亚型亚型)n n90 90 血清阳转样本血清阳转样本 BMA IDU(BMA IDU(泰国泰国)n n 18 18 泰国泰国 B B亚型亚型n n 72 72 泰国泰国 E E亚型亚
11、型n n37 37 样本来自样本来自CDC CDC 血清阳转后血清阳转后OD-n的变化的变化美国美国美国美国 B/B/泰国泰国泰国泰国 B/EB/E亚型亚型亚型亚型 TPFNFPTN1.0/160 daysB亚型 E亚型 1.0/170 days1.0/150 days亚型分析窗口期进一步分析进一步分析n n用1.0作为临界值得到大约4的分类误差n n临界值降低到0.8 进一步减少分类误差(2-3%)n n泰国 B 亚型窗口期 140 天n n泰国 E 亚型窗口期 120 天n n更好的预期值进一步调整额外的阳转血清样本评估额外的阳转血清样本评估n n阿姆斯特丹,N=25,n=100,B亚型n
12、 n肯尼亚,N=34,n=97,A,D亚型n n埃塞俄比亚,N=21,n=115,C亚型n n津巴布韦,N=158,n=585,C亚型临界值临界值0.800时时 BED C-EIA方法方法的的“检测窗口期检测窗口期”亚型亚型亚型亚型 国家国家国家国家 窗口期窗口期窗口期窗口期(95%CI)(95%CI)ADAD肯尼亚肯尼亚 171(150-199)171(150-199)BB阿姆斯特丹阿姆斯特丹 127(113-152)127(113-152)BB泰国泰国 143(118-170)143(118-170)CC津巴布韦津巴布韦 181(165-198)181(165-198)C C埃塞俄比亚埃塞
13、俄比亚 167(154-180)167(154-180)EE泰国泰国 115(106-125)115(106-125)平均平均平均平均 153(146-165)153(146-165)Vironostika-LS 和和 BED方法一致性方法一致性Vironostika-LSVironostika-LSBED BED 方法方法方法方法新发感染新发感染新发感染新发感染既往感染既往感染既往感染既往感染新发感染新发感染新发感染新发感染4034037272既往感染既往感染既往感染既往感染83838878871445样本有1290样本结果相同=89%一致性Kappa=0.758(substantial)应
14、 用横断面队列研究横断面队列研究n nBMA IDU BMA IDU 筛查阳性样本筛查阳性样本(Thailand),n=594(Thailand),n=594n nBMA IDU VaxGen BMA IDU VaxGen 筛查样本筛查样本,n=1554,n=1554n n乌干达乌干达 VCT,n=2023VCT,n=2023n n南非南非 监测监测 2002,n=10002002,n=1000n n埃塞俄比亚埃塞俄比亚 WonjiWonji&监测监测,n=1600,n=1600n n柬埔寨监测样本柬埔寨监测样本,n=3600,n=3600n nEmory Grady Hospital pre
15、gnant women,n=300Emory Grady Hospital pregnant women,n=300n n卢旺达卢旺达,n=600,n=600n n泰国监测泰国监测n n印度印度,Chennai STD,Chennai STD 队列队列,n=300,n=300发病率和高危发病率和高危BMA-泰国的关系综合分析泰国的关系综合分析因素因素发病率发病率男性男性12.412.4女性女性4.94.9已婚已婚7.27.2未婚未婚14.514.5每日至少一次注射每日至少一次注射12.912.9每日不到一次注射每日不到一次注射5.15.1从业人员从业人员10.210.2未从业人员未从业人员15
16、.615.645 45 天的戒毒治疗天的戒毒治疗12.512.5美沙酮维持治疗美沙酮维持治疗5.65.6低发病率与有无工作关系的进一步综合分析低发病率与有无工作关系的进一步综合分析流行率 发病率低发病率与是否吸毒关系的进一步综合分析低发病率与是否吸毒关系的进一步综合分析流行率 发病率低发病率与年龄关系的进一步综合分析低发病率与年龄关系的进一步综合分析年龄年龄流行率 发病率应应 用用在个体水平上，由于个体间抗体生成的变异性，BED检测可能产生相当数目的假阳性和假阴性，结果的预测值偏低。在人群水平上，假阳性的数目与假阴性的数目相近，因此可以相互抵消彼此的作用。应应 用用美国FDA将BED C-EI
17、A归为“只应用于监测目的的实验”，没有批准将 BED C-EIA作为个体诊断实验，因此，实验结果只能用于人群发病率估计，结果不能反馈回个体或其监护人或看管场所COMMERCIAL KITBED C-EIA的干扰因素的干扰因素 免疫反应的个体差异AIDS 患者治疗中的患者较高的总IgG不适用于HIV-2或者O亚型不同人群总不同人群总IgG 水平水平 9.9 15.619.1 28.827.34 US Neg US Pos Thai Pos IVCO Pos IVCO-TB AIDS中值 BED C-EIA总结总结BED C-EIA方法是一种专门用于人群新发感染率研究的成熟的实验方法 该方法能够检测出平均窗口期155天内发生阳转的样本该方法已经应用于不同人群中大量数据的研究该方法已经被许多国家采用，应用于HIV-1新发感染率监测注意干扰因素的影响以及潜在的错误分类