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1、阴道微生态评价第1 页，本讲稿共32 页护理生殖道关注微生态 最重要！第2 页，本讲稿共32 页阴道阴道粘膜粘膜阴道阴道正常正常菌群菌群阴道阴道免疫免疫系统系统阴道微生态概念阴道防御系统阴道微生态是阴道最重要的防御系统第3 页，本讲稿共32 页阴道原籍菌(乳酸杆菌)数量:8x107 cfu/ml5%95%123 正常育龄妇女阴道菌群由六种不同种类的细菌以及念珠菌、支原体等组成。正常阴道内有100 种微生物存在。这些微生物在阴道内形成生态平衡。n 阴道菌群（阴道的微生态系统）阴道微生态概念第4 页，本讲稿共32 页CFU(Colony-Forming Units)经培养所得菌簇形成单位的英文缩写
2、。细菌（可见）和真菌的测量单位。cfu:colony-forming unit，菌落形成单位，将稀释后的一定量的菌液通过浇注或涂布的方法，让其内的微生物单细胞一一分散在琼脂平板上，待培养后，每一活细胞就形成一个菌落。与常规利用显微镜对微生物数量进行测量不同，主要是对可见（即多数情况下形成菌落）的细菌数量进行测量的单位。意思就是每毫升菌液中含有多少单细胞！第5 页，本讲稿共32 页阴道粘膜上皮细胞纵切面示意图 纵切面示意图（过路菌）乳杆菌（原籍菌）（条件致病菌）是由不同种属的宿主传来的是其自身宿主个体对其无免疫反应或低免疫反应，是宿主个体固有的菌群 是由同种属不同宿主个体传来的阴道微生态概念第6
3、 页，本讲稿共32 页乳杆菌的作用机制u 分解糖原，维持阴道酸性环境。u 产生多种抑菌物质：乙酸、16-18 碳脂肪酸 H202、乳酸菌素、硬脂酸等。u 竞争粘附：也称占位性保护。u 竞争营养物质：大量定位于阴道中的乳杆菌处 于竞争优势状态，利用阴道上皮 细胞中的糖原，减少其他细菌的 碳源供应，通过竞争营养物质而 干扰一些厌氧菌如白色假丝酵母 菌（白念）的生长。第7 页，本讲稿共32 页维持酸性环境形成保护性菌膜杀灭致病菌乳酸杆菌正常阴道菌群作用阴道微生态平衡的核心：维持乳酸菌特别是产H2O2 乳酸菌在阴道菌群中的优势地位！在阴道粘膜表面形成一层保护性菌膜，防止入侵微生物在阴道粘膜上定植 乳酸
4、菌产生的乳酸使阴道分泌物维持酸性环境；乳酸菌产生的H2O2可杀灭入侵的致病菌。阴道微生态概念第8 页，本讲稿共32 页 乳杆菌数量减少，生化指标改变，阴道微生 态破坏阴道菌群失调 各类阴道炎 加重阴道菌群失调各种诱因各类阴道炎的共性-源于或伴有微生态破坏！为什么要关注阴道微生态第9 页，本讲稿共32 页菌群演变造成菌群结构改变，特点：1、厌氧菌需氧菌、等条件致病菌大量增加 2、乳酸菌特别是产过氧化氢乳酸菌减少或消失所有的阴道感染都源于或伴有阴道微生态改变第10 页，本讲稿共32 页 乳酸菌%厌氧菌%加德纳菌%支原体%LB-LB正常 80-100 70-100 10-40 0-30 20-40宫
5、颈炎 10-40 10-30 30-50 20-40 60-80BV 0-20 0-10 40-70 60-80 40-60滴虫阴道炎 10-40 0-20 10-30 0-30 20-40霉菌阴道炎 20-50 0-40 20-30 10-40 20-30 老年性阴道炎 0-20 0-10 40-60 20-40 50-60第11 页，本讲稿共32 页 通过形态学、生物化学、免疫学和分子生物学 等 方法所获得的阴道菌群 数量和功能方面的信息 分析阴道菌群结构的演替正常优势菌的菌群数量与功能变化条件致病微生物菌群数量与功能变化外来致病微生物菌群数量与功能变化 机体反应水平如何评价阴道微生态？-
6、阴道微生态评价的内涵为什么要关注阴道微生态第12 页，本讲稿共32 页形态学生物标志物 菌群数量与功能的变化形态学评价-菌群数量的变化：形态学的方法系统的方法-阴道微生态评价内容阴道微生态评价的内容第13 页，本讲稿共32 页 标本中细菌分布、排列的密集程度，即每克或每毫升标本中的菌落数。分级标准(放大倍10100 观察每视野平均细菌数)I 级（记为“+”）1 个9 个 II 级（记为“+”）10 个99 个 III 级（记为“+”）100个以上 IV级（记为“+”）细菌聚集成团(涂片中所见细菌种类)I 级（记为“+”）能辨别1 3 种细菌；II 级（记为“+”）能辨别4 6 种细菌；III
7、级（记为“+”）能辨别7 10 种细菌；IV级（记为+）能辨别11 种以上细菌。(局部有无炎症-菌群的致病性)有无白细胞、脓细胞渗出，有无吞噬现象等。？菌群的密集度机体炎性反应菌群的多样性优势菌阴道微生态形态学评价 存在的问题 形态学评价结果的可靠性 与实验室人员的技能和责任有关 不能了解阴道菌群中正常优势菌和有害菌的功能阴道微生态评价的内容第14 页，本讲稿共32 页 A、正常优势菌功能生物学标志 B、致病微生物与条件致病微生 物增殖的生物学标志 C、机体反应性的生物学标志了解菌群数量的变化形态学评价生物标志物了解菌群数量与功能的变化阴道微生态系统评价阴道微生态评价的内容第15 页，本讲稿共
8、32 页唾液酸苷酶 BV 门冬酰胺蛋白酶霉菌性阴道炎胱胺酰蛋白酶 滴虫性阴道炎乳酸脱氢酶急性化脓性阴道炎透明质酸酶BV、淋菌性阴道炎白细胞酯酶宫颈炎及各种阴道感染 短链脂肪酸（如乙酸、琥珀酸）增加 单胺和多胺增加（胺试验阳性）菌胞壁糖类（如阿拉伯醇糖）增加微生物代谢产物细菌、衣原体等病原体大量增殖 白细胞吞噬病原体过多病原体释放的水解酶和毒素分解白细胞壁白细胞酯酶释放到胞外分泌物中白细胞酯酶活性增高。第16 页，本讲稿共32 页过氧化氢浓度SNA 活性LE 活性n 生态优势菌指标n 致病菌指标n 宿主反应指标卫生部十年百项计划推广项目江西省星火计划项目浙江省医药卫生科技重点推广项目 了解阴道菌
9、群结构和功能的变化，评价阴道的微生态状况阴道微生态评价适宜技术 阴道微生态评价适宜技术-细菌性阴道病联合测定技术介绍第17 页，本讲稿共32 页标本采集要规范 各种病原体的性质和检测要求的不同，决定了标本的种类、取材部位、和保存条件标本运输方式等都有不同，采集标本上如有错误或疏忽，都会影响检验结果。标本采集的规范第18 页，本讲稿共32 页 一般阴道感 染诊断的取 材，须取阴 道后穹隆部 位的分泌物。取 取材 材前 前，要 要用 用一 一支 支棉 棉签 签揩 揩去 去取 取材 材 部 部位 位堆 堆积 积的 的脓 脓液 液，用 用另 另一 一支 支棉 棉签 签取 取材 材，为 为提 提高 高阳
10、 阳性 性率 率，还 还可 可采 采用 用重 重复 复两 两次 次取 取材 材或 或两 两个 个部 部位 位的 的标 标本 本混 混 合 合后 后检 检验 验的 的方 方法 法。要尽量使用 大一些的棉 签取样，要 将棉签在取 材部位旋转 并停留 20秒 要使用试剂盒 配套的保存液 保存标本。标 本在 2-8 保存 不宜超过 2天。取材之前 24 小时内，应无性交、无盆浴或阴道冲洗；在 48小时内未使用阴道润滑剂或阴道“兴奋剂”等化学物质一般要求 取材部位要准确取材方法要得当标本量要充足标本要正确保存及时检验正确取材要把握一下几点标本采集的规范第19 页，本讲稿共32 页检验原理n H2O2阴道
11、乳酸杆菌标志物n 唾液酸苷酶NAase 加德纳菌、游动弯曲杆 菌等BV 致病菌的标志物。n 白细胞酯酶炎性细胞的标志物。第20 页，本讲稿共32 页H2O2（反应装置上部的反应孔）阴道液中过氧化氢经过过氧化物酶作用，释放出新生态氧，后者在4-氨基安替吡啉存在下，使3,5-二氯-2-羟基苯磺酸氧化成红色或紫色，在反应系统中加入3,5-二氯-2-羟基苯磺酸的拮抗物，当标本中H2O2浓度2mol/L，反应结果呈红色或紫色，呈色深度与H2O2 浓度成正比，标本中H2O2浓度 2mol/L，反应结果呈蓝色。结果判读：n 阴性：显红色、紫色或蓝紫色n 阳性：蓝色n 参考范围：2mol/L 为阴性第21 页
12、，本讲稿共32 页唾液酸苷酶活性测定（反应装置中部的反应孔）唾液酸苷酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸盐，释放出溴吲哚基遇重氮盐起反应呈红色或紫色，呈色深度与唾液酸苷酶活性呈正比。结果判读：u 阴性：不显色或黄色u 阳性：红色、紫色或蓝色，显蓝色表示唾液酸 苷酶活性浓度很高。u 参考范围：7U/ml 为阴性第22 页，本讲稿共32 页白细胞酯酶（反应装置下部的反应孔）白细胞酯酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐，释放出溴吲哚基，后者在氧的条件下呈蓝色或绿色，呈色深度与白细胞酯酶活性成正比。结果判读：参照比色板比色判读结果n 阴性：“-”或“”n 阳性：“+”、“+”、“+”n 参考范围：白
13、细胞酯酶7U/ml 为阴性第23 页，本讲稿共32 页 产过氧化氢乳酸 菌占优势地位 粘膜修复 炎症消失 无引发BV 的 细菌繁殖正 常正 常 阴 性异 常 增 高 阳 性过氧化氢浓度 LE 活性SNa 活性乳酸菌减少或消失 各种阴道感染致病菌、条件致病菌增加阴道微生态评价适宜技术第24 页，本讲稿共32 页纠正了以白细胞升高才为“炎症”的生殖道感染的概念阴道感染诊断治疗思路的新突破临床用途指导妇产科临床医师从微生态角度重新审视妇科感染性疾病；关注感染及治疗后的阴道微生态状况，树立“将阴道微生态恢复正常作为阴道炎治疗的最终目标”的理念。A、弥补现有白带常规检查只做形态学检查、不做生化检查，不能
14、准确判断感染的程度及阴道微生态、不能评价预后等不足；B、阴道微生态评价C、从微生态角度评价阴道炎是否治愈；D、阴道生态制剂的用药指标；E、了解产后阴道生态，确定是否恢复性生活；F、BV 诊断与疗效评价，需氧菌阴道炎、衣原体感染筛查。阴道微生态评价意义第25 页，本讲稿共32 页机体反应的生化标志物 白细胞对细菌的吞噬过程阴道微生态评价的内容第26 页，本讲稿共32 页 白细胞数量与白细胞数量与白细胞酯酶的关系白细胞酯酶的关系 白细胞酯酶与被破坏的白细胞数量成正比而白细胞数量与采样、涂片、月经周期有关第27 页，本讲稿共32 页检测结果参考第28 页，本讲稿共32 页序号 过氧化氢浓度 唾液酸苷
15、酶 白细胞酯酶 临 床 判 读1 2mol/L-正常、无致病菌感染2 2mol/L-+阴道清洁度下降，阴道炎症3 2mol/L+-BV 致病菌感染早期4 2mol/L+BV 感染早期，并有可能伴有其他混合感染，如宫颈炎。5 2mol/L+-细菌性阴道炎6 2mol/L-月经期、阴道冲洗后，阴道生态平衡遭破坏7 2mol/L-+其他生殖道感染8 2mol/L+细菌性阴道病，预后不良，伴有其他感染。第29 页，本讲稿共32 页阴道分泌物检验结果第30 页，本讲稿共32 页线索细胞（clue cell）在脱落的阴道鳞状上皮细胞上粘附有大量的加德纳尔菌,上皮细胞互相粘连成团,细胞边缘不齐似锯齿壮,表面粗糙,有许多大小不等的颗粒或斑点,似撒有一层胡椒粉。核结构模糊不清或碎解,有时细胞呈溶解样。第31 页，本讲稿共32 页第32 页，本讲稿共32 页