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1、阴道微生态评价阴道微生态评价及其适宜技术及其适宜技术 个旧市人民医院检验科个旧市人民医院检验科 王锐王锐 护理生殖道护理生殖道关注微生态关注微生态 最重要！最重要！阴道阴道阴道阴道粘膜粘膜粘膜粘膜阴道阴道阴道阴道正常正常正常正常菌群菌群菌群菌群阴道阴道阴道阴道免疫免疫免疫免疫系统系统系统系统阴道微生态概念阴道微生态概念阴道防卫系统阴道防卫系统阴道微生态是阴道最重要的防卫系统阴道微生态是阴道最重要的防卫系统阴道原籍菌阴道原籍菌(乳酸杆菌乳酸杆菌)数量数量:8x107 cfu/ml5%95%123 正常育龄妇女阴道菌群由六种不同种类的正常育龄妇女阴道菌群由六种不同种类的细菌以及念珠菌、支原体等组成
2、细菌以及念珠菌、支原体等组成。正常阴道内有正常阴道内有100种微生物存在。种微生物存在。这些微生物在阴道内形成生态平衡。这些微生物在阴道内形成生态平衡。阴道菌群（阴道的微生态系统）阴道菌群（阴道的微生态系统）阴道微生态概念阴道微生态概念CFU(Colony-Forming Units)经培育所得菌簇形成单位的英文缩写。细菌（可见）和真菌的测量单位。cfu:colony-forming unit，菌落形成单位，将稀释后的确定量的菌液通过浇注或涂布的方法，让其内的微生物单细胞一一分散在琼脂平板上，待培育后，每一活细胞就形成一个菌落。与常规利用显微镜对微生物数量进行测量不同，主要是对可见（即多数状况
3、下形成菌落）的细菌数量进行测量的单位。意思就是每毫升菌液中含有多少单细胞！阴道粘膜上皮细胞阴道粘膜上皮细胞纵切面示意图纵切面示意图纵切面示意图纵切面示意图（过路菌）（过路菌）乳杆菌（原籍菌）乳杆菌（原籍菌）（条件致病菌）（条件致病菌）是由不同种属是由不同种属的宿主传来的的宿主传来的是其自身宿主个体对其是其自身宿主个体对其无免疫反应或低免疫反应，无免疫反应或低免疫反应，是宿主个体固有的菌群是宿主个体固有的菌群 是由同种属不同是由同种属不同宿主个体传来的宿主个体传来的阴道微生态概念阴道微生态概念乳杆菌的作用机制乳杆菌的作用机制u分解糖原，维持阴道酸性环境。u产生多种抑菌物质：乙酸、16-18碳脂肪
4、酸u H202、乳酸菌素、硬脂酸等。u竞争粘附：也称占位性爱护。u竞争养分物质：大量定位于阴道中的乳杆菌处u 于竞争优势状态，利用阴道上皮u 细胞中的糖原，削减其他细菌的u 碳源供应，通过竞争养分物质而u 干扰一些厌氧菌如白色假丝酵母u 菌（白念）的生长。维持酸性环境维持酸性环境形成爱护性菌膜形成爱护性菌膜杀灭致病菌杀灭致病菌乳酸杆菌乳酸杆菌正常阴道菌群作用正常阴道菌群作用阴道微生态平阴道微生态平衡的核心：衡的核心：维持乳酸菌特殊是产H2O2乳酸菌在阴道菌群中的优势地位！在阴道粘膜表面形成一层爱护性菌膜，在阴道粘膜表面形成一层爱护性菌膜，防止入侵微生物在阴道粘膜上定植防止入侵微生物在阴道粘膜上
5、定植 乳酸菌产生的乳酸使阴道乳酸菌产生的乳酸使阴道分泌物维持酸性环境；分泌物维持酸性环境；乳酸菌产生的乳酸菌产生的H2O2可可杀灭入侵的致病菌。杀灭入侵的致病菌。阴道微生态概念阴道微生态概念 乳杆菌乳杆菌数量削减，生数量削减，生化指化指标变标变更，更，阴道微生阴道微生 态态破坏破坏阴道菌阴道菌群失调群失调 各类各类阴道炎阴道炎 加重加重阴道菌阴道菌群失调群失调各种各种诱因诱因各类阴道炎的共性各类阴道炎的共性-源于或伴有微生态破坏！源于或伴有微生态破坏！为什么要关注阴道微生态为什么要关注阴道微生态菌群演化造成菌群结构变更，特点：菌群演化造成菌群结构变更，特点：1、厌氧菌需氧菌、等条件致病菌大量增
6、加、厌氧菌需氧菌、等条件致病菌大量增加 2、乳酸菌特殊是产过氧化氢乳酸菌削减或消逝、乳酸菌特殊是产过氧化氢乳酸菌削减或消逝全部的阴道感染全部的阴道感染都源于或伴有阴都源于或伴有阴道微生态变更道微生态变更 通过形态学、生物化学、通过形态学、生物化学、免疫学和分子生物学免疫学和分子生物学 等等 方法所获得的阴道菌群方法所获得的阴道菌群 数量和功能方面的信息数量和功能方面的信息 分析阴道分析阴道菌群结构菌群结构的演替的演替正常优势菌正常优势菌的菌群数量的菌群数量与功能变化与功能变化条件致病条件致病微生物菌微生物菌群数量与群数量与功能功能变更更外来致病外来致病微生物菌微生物菌群数量与群数量与功能功能变
7、变更更 机体反机体反应水平水平如何评价阴道微生态？如何评价阴道微生态？-阴道微生态评价阴道微生态评价的内涵的内涵为什么要关注阴道微生态为什么要关注阴道微生态形态学生物标记物形态学生物标记物 菌群数量与功能的变更菌群数量与功能的变更形态学评价形态学评价-菌群数量的变更菌群数量的变更：形态学的方法形态学的方法系统的方法系统的方法-阴道微生态评价内阴道微生态评价内容容阴道微生态评价的内容阴道微生态评价的内容 标本中细菌分布、排列的密集程度，即每克或每毫升标本中的菌落数。分级标准(放大倍10100视察每视野平均细菌数)I级（记为“+”）1个9个 II级（记为“+”）10个99个 III级（记为“+”）
8、100个以上 IV级（记为“+”）细菌聚集成团(涂片中所见细菌种类涂片中所见细菌种类)I级级（记为（记为“+”）能辨别能辨别13种细菌；种细菌；II级级（记为（记为“+”）能辨别能辨别46种细菌；种细菌；III级级（记为（记为“+”）能辨能辨别别710种细菌；种细菌；IV级级（记为（记为+）能辨别能辨别11种种以上细菌。以上细菌。(局部有无炎症局部有无炎症-菌群的致病性菌群的致病性)有无白细胞、脓有无白细胞、脓细胞渗出，细胞渗出，有无吞噬现象等。有无吞噬现象等。？菌群的密集度菌群的密集度机体炎性反应机体炎性反应菌群的多样性菌群的多样性优势菌优势菌阴道微生态形态学评价阴道微生态形态学评价 存在的
9、问题存在的问题 形态学评价结果的牢靠性形态学评价结果的牢靠性 与试验室人员的技能和责任有关与试验室人员的技能和责任有关 不能了解阴道菌群中正常优势菌和有害菌的功能不能了解阴道菌群中正常优势菌和有害菌的功能阴道微生态评价的内容阴道微生态评价的内容 A、正常优势菌功能生物学标记、正常优势菌功能生物学标记 B、致病微生物与条件致病微生、致病微生物与条件致病微生 物增殖的生物学标记物增殖的生物学标记 C、机体反应性的生物学标记、机体反应性的生物学标记了解菌群数量的变更了解菌群数量的变更形态学评价形态学评价生物标记物生物标记物了解菌群了解菌群数量与功数量与功能的变更能的变更阴道微生态阴道微生态系统系统评
10、价评价阴道微生态评价的内容阴道微生态评价的内容唾液酸苷酶唾液酸苷酶BV 门冬酰胺蛋白酶门冬酰胺蛋白酶霉菌性阴道炎霉菌性阴道炎胱胺酰蛋白酶胱胺酰蛋白酶滴虫性阴道炎滴虫性阴道炎乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶急性化脓性阴道炎急性化脓性阴道炎透亮质酸酶透亮质酸酶BV、淋菌性阴道炎、淋菌性阴道炎白细胞酯酶白细胞酯酶宫颈炎及各种阴道感染宫颈炎及各种阴道感染 短链脂肪酸（如乙酸、琥珀酸）增加短链脂肪酸（如乙酸、琥珀酸）增加 单胺和多胺增加（胺试验阳性）单胺和多胺增加（胺试验阳性）菌胞壁糖类（如阿拉伯醇糖）增加菌胞壁糖类（如阿拉伯醇糖）增加微生物微生物代谢产物代谢产物细菌、衣原体等病原体大量增殖细菌、衣原体等病原体大量
11、增殖白细胞白细胞吞噬病原体过多吞噬病原体过多病原体释放的水解酶和病原体释放的水解酶和毒素分解白细胞壁毒素分解白细胞壁白细胞酯酶释放到胞白细胞酯酶释放到胞外外分泌物中白细胞酯酶活性增高。分泌物中白细胞酯酶活性增高。过氧化氢浓度过氧化氢浓度SNA活性活性LE活性活性生态优势菌指标生态优势菌指标致病菌指标致病菌指标宿主反应指标宿主反应指标卫生部十年百生部十年百项支配推广支配推广项目目江西省星火支配江西省星火支配项目目浙江省医浙江省医药卫生科技重点推广生科技重点推广项目目 了解阴道菌群结构了解阴道菌群结构和功能的变更，和功能的变更，评价阴道的微生态状况评价阴道的微生态状况阴道微生态评价适宜技术阴道微生
12、态评价适宜技术 阴道微生阴道微生态评态评价适宜技价适宜技术术-细细菌性阴道病菌性阴道病联联合合测测定技定技术术介介绍绍标本采集要规范标本采集要规范 各种病原体的性质和检测各种病原体的性质和检测要求的不同，确定了标本的种类、要求的不同，确定了标本的种类、取材部位、和保存条件标本运输取材部位、和保存条件标本运输方式等都有不同，采集标本上如方式等都有不同，采集标本上如有错误或疏忽，都会影响检验结有错误或疏忽，都会影响检验结果。果。标本采集的规范标本采集的规范 一般阴道感一般阴道感 染诊断的取染诊断的取 材，须取阴材，须取阴 道后穹隆部道后穹隆部 位的分泌物。位的分泌物。取材前，要用一取材前，要用一取
13、材前，要用一取材前，要用一支棉签揩去取材支棉签揩去取材支棉签揩去取材支棉签揩去取材 部位积累的脓液，部位积累的脓液，部位积累的脓液，部位积累的脓液，用另一支棉签取用另一支棉签取用另一支棉签取用另一支棉签取材，为提高阳性材，为提高阳性材，为提高阳性材，为提高阳性率，还可接受重率，还可接受重率，还可接受重率，还可接受重复两次取材或两复两次取材或两复两次取材或两复两次取材或两个部位的标本混个部位的标本混个部位的标本混个部位的标本混 合后检验的方法。合后检验的方法。合后检验的方法。合后检验的方法。要尽量运用要尽量运用 大一些的棉大一些的棉 签取样，要签取样，要 将棉签在取将棉签在取 材部位旋转材部位旋
14、转 并停留并停留20秒秒 要运用试剂盒要运用试剂盒 配套的保存液配套的保存液 保存标本。标保存标本。标 本在本在2-8保存保存 不宜超过不宜超过2天。天。取材之前取材之前24小时小时内，应无性交、内，应无性交、无盆浴或阴道冲无盆浴或阴道冲洗；在洗；在48小时内小时内未运用阴道润滑未运用阴道润滑剂或阴道剂或阴道“兴奋剂兴奋剂”等化学物质等化学物质一般要求一般要求取材部位要精确取材部位要精确取材方法要得当取材方法要得当标本量要足够标本量要足够标本要正确保存标本要正确保存刚好检验刚好检验正确取材要把握一下几点正确取材要把握一下几点标本采集的规范标本采集的规范检验原理检验原理nH2O2阴道乳酸杆菌标记
15、物n唾液酸苷酶NAase加德纳菌、游动弯曲杆n 菌等BV致病菌的标记物。n白细胞酯酶炎性细胞的标记物。H2O2（反应装置上部的反应孔）阴道液中过氧化氢经过过氧化物酶作用，释放出新生态氧，后者在4-氨基安替吡啉存在下，使3,5-二氯-2-羟基苯磺酸氧化成红色或紫色，在反应系统中加入3,5-二氯-2-羟基苯磺酸的拮抗物，当标本中H2O2浓度2mol/L，反应结果呈红色或紫色，呈色深度与H2O2 浓度成正比，标本中H2O2浓度 2mol/L，反应结果呈蓝色。结果判读：u 阴性：显红色、紫色或蓝紫色u 阳性：蓝色u参考范围：2mol/L为阴性唾液酸苷酶活性测定（反应装置中部的反应孔）唾液酸苷酶水解5-
16、溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸盐，释放出溴吲哚基遇重氮盐起反应呈红色或紫色，呈色深度与唾液酸苷酶活性呈正比。结果判读：u阴性：不显色或黄色u阳性：红色、紫色或蓝色，显蓝色表示唾液酸 苷酶活性浓度很高。u参考范围：7U/ml为阴性白细胞酯酶（反应装置下部的反应孔）白细胞酯酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐，释放出溴吲哚基，后者在氧的条件下呈蓝色或绿色，呈色深度与白细胞酯酶活性成正比。结果判读：参照比色板比色判读结果u阴性：“-”或“”u阳性：“+”、“+”、“+”u参考范围：白细胞酯酶7U/ml为阴性 产过氧化氢乳酸产过氧化氢乳酸 菌占优势地位菌占优势地位 粘膜修复粘膜修复 炎症消逝炎症消逝 无
17、引发无引发BV的的 细菌繁殖细菌繁殖正正 常常正正 常常阴阴 性性异异 常常增增 高高阳阳 性性过氧化氢浓度过氧化氢浓度LE活性活性SNa活性活性乳酸菌削减或消逝乳酸菌削减或消逝各种阴道感染各种阴道感染致病菌、条件致致病菌、条件致病菌增加病菌增加阴道微生态评价适宜技术阴道微生态评价适宜技术订正了以白细胞上升才为“炎症”的生殖道感染的概念阴道感染诊断阴道感染诊断治疗思路的新治疗思路的新突破突破临床用途临床用途指导妇产科临床医师从微生态角度重指导妇产科临床医师从微生态角度重新谛视妇科感染性疾病；新谛视妇科感染性疾病；关注感染及治疗后的阴道微生态状况，关注感染及治疗后的阴道微生态状况，树立树立“将阴
18、道微生态复原正常作为阴道将阴道微生态复原正常作为阴道炎治疗的最终目标炎治疗的最终目标”的理念。的理念。A、弥补现有白带常规检查只做形态学检查、不做、弥补现有白带常规检查只做形态学检查、不做生化检查，不能精确推断感染的程度及阴道微生生化检查，不能精确推断感染的程度及阴道微生态、不能评价预后等不足；态、不能评价预后等不足；B、阴道微生态评价阴道微生态评价C、从微生态角度评价阴道炎是否治愈；、从微生态角度评价阴道炎是否治愈；D、阴道生态制剂的用药指标；、阴道生态制剂的用药指标；E、了解产后阴道生态，确定是否复原性生活；、了解产后阴道生态，确定是否复原性生活；F、BV诊断与疗效评价，需氧菌阴道炎、衣原
19、体诊断与疗效评价，需氧菌阴道炎、衣原体感染筛查。感染筛查。阴道微生态评价意义阴道微生态评价意义机体反应的生化标记物机体反应的生化标记物 白细胞对细菌的吞噬过程白细胞对细菌的吞噬过程阴道微生态评价的内容阴道微生态评价的内容 白细胞数量与白细胞数量与白细胞酯酶的关系白细胞酯酶的关系 白细胞酯酶与被破坏的白细胞数量成正白细胞酯酶与被破坏的白细胞数量成正比比而白细胞数量与采样、涂片、月经周期有关而白细胞数量与采样、涂片、月经周期有关检测结果参考阴道分泌物检验结果线索细胞（clue cell）在脱落的阴道鳞状上皮细胞上粘附有大量的加德纳尔菌,上皮细胞相互粘连成团,细胞边缘不齐似锯齿壮,表面粗糙,有很多大小不等的颗粒或斑点,似撒有一层胡椒粉。核结构模糊不清或碎解,有时细胞呈溶解样。