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1、生物化学实验09 蛋白质的沉淀及变性电子课件 生物化学实验技术蛋白质的沉淀及变性实验类型：验证性实验类型：验证性教学时数：教学时数：33生物化学实验技术一、实验目的1.加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。2.了解蛋白质变性与沉淀的关系。3.学习沉淀蛋白质的几种方法。生物化学实验技术二、实验原理 水 溶 液 中 的 蛋 白 质 分 子 由 于 表 面 形 成 水 化层 和 双 电 层 而 成 为 稳 定 的 亲 水 胶 体 颗 粒，在 某些 理 化 因 素 的 影 响 下，蛋 白 质 颗 粒 可 因 水 化 层和双电层被破坏而发生沉淀。生物化学实验技术1.可逆性沉淀反应 蛋 白 质 分 子 的
2、结 构 尚 未 发 生 显 著 性 变 化，除 去 引 起 沉 淀 的 因 素 后，蛋 白 质 能 复 溶 于 原来的溶剂中，并保持其天然性质。如 分 段 盐 析、低 温 条 件 下 的 乙 醇 沉 淀 等，此类反应常用于蛋白质的提纯实验。生物化学实验技术2.不可逆性沉淀反应 蛋 白 质 分 子 的 结 构 发 生 重 大 改 变，即 蛋 白质 因 变 性 而 沉 淀，去 除 引 发 因 素，蛋 白 质 也 不再溶于原来的溶剂中。如 加 热、与 重 金 属 离 子 或 某 些 有 机 酸 的 反应 等。此 类 反 应 可 在 实 验 中 用 以 排 除 蛋 白 质，以避免对实验结果的干扰，如某
3、些临床检验。生物化学实验技术三、仪器与试剂1、仪器：离心机。2、试剂：(NH4)2SO4结晶粉末，饱和的(NH4)2SO4溶液，5%卵清蛋白，3%硝酸银，5%三氯乙酸，95%乙醇。生物化学实验技术四、实验内容1、盐析：取5%的卵清蛋白溶液5mL，加入50%的(NH4)2SO4溶液5mL 静置数分钟，待球蛋白析出。过滤，向滤液中加(NH4)2SO4结晶粉末直到不能溶解为止，待清蛋白析出。离心，取出沉淀，向沉淀中加水，看是否溶解。生物化学实验技术2、重金属离子沉淀蛋白质：取5%卵清蛋白溶液2mL，加入1-2 滴3%的硝酸银，观察沉淀析出。离心，取出沉淀，向沉淀中加水，观察是否溶解。3、有机酸沉淀蛋白质：取5%卵清蛋白溶液2mL，加入1mL 5%三氯乙酸溶液，振荡试管，观察沉淀的生成。放置片刻倾出上清液，向沉淀中加少量水，观察是否溶解。生物化学实验技术4、有机溶剂沉淀蛋白质：取1支试管加入2mL蛋白质溶液和2mL 95%乙醇溶液，混匀，观察沉淀生成，取沉淀加水观察沉淀是否溶解。