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1、第一节 定量分析样品的前处理方法一、概述 含金属或卤素、硫、磷、硒等有机药物的分析方法1、不经有机破坏的分析方法2、经有机破坏的分析方法 第1页/共101页三氯叔丁醇三氯叔丁醇六氯对二甲苯六氯对二甲苯第2页/共101页碘他拉酸碘他拉酸第3页/共101页二、不经有机破坏的分析方法 适用于含金属有机药物或结合不牢固的卤素等药物的分析 直接测定法 经水解后测定法 经还原分解后测定法第4页/共101页（一）直接测定法 金属原子不直接与碳原子相连的含金属药物直接相连但结合不牢固的有机金属药物1.1.配位滴定法 葡萄糖酸钙2.2.氧化还原滴定法 富马酸亚铁第5页/共101页富马酸亚铁的含量测定富马酸亚铁的
2、含量测定 Ch.P (2005)取本品约0.3g，精密称定，加稀硫酸 15ml，加热溶解后，放冷，加新沸过的冷水50ml与邻二氮菲指示液2 滴，立即用硫酸铈滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml硫酸铈滴定液(0.1mol/L)相当于16.99mg 。第6页/共101页原理Fe2+Ce4+Ce3+Fe3+Fe2+eFe3+红色浅蓝色OOCCHOHCCO+Fe2+第7页/共101页（二）经水解后测定法 1 1、碱水解后测定法 适于含卤素有机药物中卤素原子结合不牢固的药物，如卤素与脂肪碳链相连者。第8页/共101页CCl3-C(CH3)2-OH+4NaOH 回流回流(
3、CH3)2-CO+3NaCl+HCOONa+2H2ONaCl+AgNO3 AgCl+NaNO3 三氯叔丁醇的测定 Ch.PCh.P（20052005）过量定量第9页/共101页AgNO3+NH4SCNAgSCN +NH4NO3（淡棕红色淡棕红色）Fe3+SCN Fe(SCN)2+三氯叔丁醇的测定 Ch.PCh.P（20052005）指示剂 硫氰酸氨滴定第10页/共101页2 2、酸水解后测定法 将含金属的有机药物与适当的矿酸（如盐酸）共热，将不溶性金属盐类水解置换为可溶性盐，然后用配位滴定法或剩余的酸碱滴定法测定。例：十一烯酸锌第11页/共101页 （三）经还原分解后测定法 将含碘有机药物在碱
4、性下，加还原剂（如锌粉）加热回流，药物产生还原裂解反应，使其转变为无机的碘，然后采用银量法测定。第12页/共101页泛影酸泛影酸第13页/共101页例例 泛影酸的测定泛影酸的测定 ChP(2005)取本品约0.4g，精密称定，加氢氧化钠溶液30ml与锌粉1.0g，加热回流30min，放冷，冷凝管用少量水洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水洗涤3次，每次15ml，洗液与滤液合并，加冰醋酸5ml与曙红钠指示液5滴，用硝酸银滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于20.46mg的C11H9 I 3N2O4。第14页/共101页COOHINHCOCH3IIH3COCHN+1
5、1NaOH +Zn回流COONaN H2 H2N+3NaI +2CH3COONa+2Na2ZnO2 +H2ONaI+AgNO3 AgI +NaNO3第15页/共101页三、经有机破坏的分析方法目的：将药物分析中有机结构部分完全破坏，使有机结合形式的待测原子转变为可测定的无机离子。方法 湿法破坏 干法破坏第16页/共101页（一）湿法破坏 适用于含氮有机合成药物分析的前处理 在生物制品分析中用于氮（包括蛋白质）、磷、硫柳汞及氯化钠测定法的前处理 用于生物样品中金属元素测定时生物基质的去除第17页/共101页方法 以硫酸为分解剂，加入氧化剂（硝酸、高氯酸、过氧化氢等）作辅助分解剂 硫酸-硝酸法 硫
6、酸-高氯酸法 硫酸-硫酸盐法 硝酸-高锰酸钾法第18页/共101页凯氏定氮法(kjeldahl nitrogen(kjeldahl nitrogen determination)determination)用于含氮有机药物的定量分析。以H2SO4-SO42-为有机破坏试剂（消解剂），通过消解-蒸馏-滴定三步操作完成含氮药物的定量测定。R-NH2H2SO4K2SO4(NH4)2SO4(NH4)HSO4NaOHNH3NH3+H3BO3NH4BO2 H2SO4滴定滴定第19页/共101页 将含氮药物与硫酸在凯氏烧瓶中共热，药物分子中有机结构被氧化分解成二氧化碳和水，有机结合的氮则转变为无机氨，并与过
7、量的硫酸结合为硫酸氢铵及硫酸铵，经氢氧化钠碱化后释放出氨气，并随水蒸气馏出，用硼酸溶液或定量的酸滴定液吸收后，再用酸或碱滴定液滴定。第20页/共101页1.1.仪器装置 凯氏烧瓶为30-50ml(30-50ml(半微量法）或500ml500ml（常量法）硅玻璃或硼玻璃制成的硬质茄形烧瓶。常量法（含氮量25-30mg)25-30mg)第一法半微量法（含氮量1.0-2.0mg)1.0-2.0mg)第二法第21页/共101页第22页/共101页第23页/共101页2.2.消解剂 硫酸中加入硫酸钾（或无水硫酸钠）提高硫酸沸点，以提高消解温度加入催化剂加快消解速度，以缩短消解时间。常用催化剂：汞或汞盐、
8、硒粉、铜盐、二氧化锰等硫酸铜最常用（价廉、无挥发性、毒性低）第24页/共101页难以分解的药物辅助氧化剂 30%30%过氧化氢和高氯酸 不能在高温时加入，应待消解液放冷后加入，并再次加热继续消解第25页/共101页3.3.应用范围：含有氨基或酰胺结构的药物含量 偶氮或肼结构的含氮药物，在消解过程易生成氮气而损失，在消解前加入锌粉还原 杂环中的氮不易断键而难以消解，可用氢碘酸或红磷还原为氢化杂环后在消解 含氮量超过10%10%的样品，在消解液中加入少量多碳化合物，如蔗糖、淀粉等还原剂，以利于氮转变为氨。第26页/共101页（二）干法破坏 适用于含卤素、硫、磷等有机药物分析的前处理，亦用于某些药物
9、中硒和砷盐的检查。高温炽灼法 氧瓶燃烧法第27页/共101页1.1.高温炽灼法 将含待测元素（卤素、磷、砷盐)的有机药物经高温灼烧灰化，使有机结构分解而待测元素转化为无机元素或可溶性无机盐。常加入无水碳酸钠、硝酸镁、氢氧化钙、氧化锌等辅助灰化第28页/共101页2.2.氧瓶燃烧法oxygen flask combustion methodoxygen flask combustion method 适用于含卤素或硫、磷等元素的有机药物的鉴别、限量检查或含量测定 亦可用于药物中杂质硒的检查第29页/共101页 原理 将有机药物放入充满氧气的密闭燃烧瓶中充分燃烧，有机结构彻底分解为二氧化碳和水，待
10、测元素转化为氧化物（或无氧酸），被吸收于适当的吸收液中，然后根据欲测物质的性质，采用适宜的方法进行分析第30页/共101页 1.仪器装置 燃烧瓶为500、1000或2000ml磨口、厚壁、硬质玻璃锥型瓶；瓶塞空心，底部熔封铂丝一根，下端呈螺旋状或网状第31页/共101页2.2.吸收液的选择 吸收液的作用 将样品经燃烧分解所产生的各种价态的卤素、硫、磷、硒等，定量地吸收并转变为一定的便于测定的价态（单一价态）第32页/共101页吸收液的选择氟 水 氯 水-NaOHNaOH溶液溴 水-NaOH-NaOH-二氧化硫饱和溶液碘 直接法 水-NaOH-NaOH-二氧化硫饱和溶液 间接法 水-NaOHNa
11、OH溶液硫 浓H H2 2O O2 2溶液与水 磷 水硒 硝酸溶液（1 13030）第33页/共101页3.3.样品制备 固体样品（研细）无灰滤纸 液体样品 纸袋第34页/共101页第35页/共101页（4）操作方法燃烧瓶燃烧前的准备 用洗液洗净后，按各药品项下的规定加入吸收液，将瓶口用水湿润，小心急速地通入氧气1min，立即用表面皿覆盖瓶口。样品的准备 取样品适量，精密称定后按规定方法包裹，固定于铂丝下端的网内或螺旋处。第36页/共101页样品的燃烧 点燃包有供试品的滤纸尾部，迅速放入燃烧瓶中，按紧瓶塞，加水少量封闭瓶口，俟燃烧完毕（应无黑色碎片），充分振摇，使生成的烟雾完全吸入吸收液中，放
12、置15min，用水少量冲洗瓶塞及铂丝，合并洗液及吸收液，同法另做空白试验。然后按各药品项下规定的方法进行鉴别、检查或含量测定。第37页/共101页根据被燃烧分解的样品量选用适宜大小的燃烧瓶。（5）注意事项 Ch.P（2005）规定的燃烧瓶体积为500、1000或2000ml三种，采用常量或半微量分析第38页/共101页测定含氟有机药物时，用石英制燃烧瓶铂丝燃烧时起催化作用应同时做空白试验燃烧时要注意防爆燃烧要完全燃烧产生的烟雾完全被吸收第39页/共101页碘苯酯碘苯酯I第40页/共101页例1.1.氧瓶燃烧法中的装置有A.A.磨口硬质玻璃锥形瓶B.B.磨口软质玻璃锥形瓶C.C.铂丝 D.D.铁
13、丝 E.E.铝丝第41页/共101页例2 2选择氧瓶燃烧法所必备的实验物品A.A.磨口硬质玻璃锥形瓶B.B.铂丝 C.C.普通滤纸D.D.氢气 E.E.无灰滤纸第42页/共101页例3 3氧瓶燃烧法测定含氯有机药物时所用的吸收液多数为A.HA.H2 2O O2 2溶液B.HB.H2 2O O2 2NaOHNaOH溶液C.NaOHC.NaOH溶液 D D硫酸肼饱和液E.NaOHE.NaOH硫酸肼饱和液第43页/共101页例4.4.氧瓶燃烧法可用于A.A.含卤素有机药物的含量测定B.B.醚类药物的含量测定C.C.检查甾体激素类药物中的氟D.D.检查甾体激素类药物中的硒E.E.芳酸类药物的含量测定第
14、44页/共101页本章要求掌握凯氏定氮法及氧瓶燃烧法的原理及所加试剂、掌握凯氏定氮法及氧瓶燃烧法的原理及所加试剂、操作要点操作要点熟悉各种定量分析样品的前处理方法的适用范围熟悉各种定量分析样品的前处理方法的适用范围第45页/共101页第二节第二节 定量分析方法特点定量分析方法特点 测定药物的测定药物的含量含量是评价药品质量优劣的重要是评价药品质量优劣的重要手段手段p容量分析法容量分析法p光谱法光谱法p色谱法色谱法第46页/共101页一一.容量分析法容量分析法（一）容量分析法的特点（一）容量分析法的特点 回收率：回收率：99.799.7100.3100.3相对误差相对误差 0.20.2操作简便、
15、快速、所用仪器普通易操作简便、快速、所用仪器普通易得得专属性较差，用于含量较高的试样专属性较差，用于含量较高的试样化学原料药化学原料药的含量测定的含量测定第47页/共101页 （二）容量分析法的有关计算（二）容量分析法的有关计算1.1.滴滴定定度度：指指每每1ml1ml规规定定浓浓度度的的滴滴定定液所相当的被测药物的质量。液所相当的被测药物的质量。2.2.滴滴定定度度（T T）的的计计算算：在在容容量量分分析析中中，被被测测药药物物（A A）与与滴滴定定液液（B B）之间都按一定的摩尔比进行反应的之间都按一定的摩尔比进行反应的 aA+bB aA+bB 产物产物 a ba b 第48页/共101
16、页 aA+bB aA+bB 产物产物 a ba bT=(a/b)mT=(a/b)mM (mgM (mgmLmL-1-1)a a被测药物的摩尔数被测药物的摩尔数 b b滴定液摩尔数滴定液摩尔数 m m滴定液的摩尔浓度滴定液的摩尔浓度 M M被测药物的毫摩尔质量被测药物的毫摩尔质量 第49页/共101页 在在实实际际工工作作中中，所所配配制制的的滴滴定定液液的的摩摩尔尔浓浓度度与与药药典典中中规规定定的的摩摩尔尔浓浓度度不一定恰好符合，即不一定恰好符合，即 T TTFTF F F实实际际摩摩尔尔浓浓度度/规规定定的的摩摩尔尔浓浓度度第50页/共101页（3 3）含量计算）含量计算直接滴定法：直接滴
17、定法：含量（含量（)=(V)=(VT T/W)100%/W)100%(VTF/W)100%(VTF/W)100%uW W供试品质量；供试品质量；mgmg；uV V消耗的滴定液体积，消耗的滴定液体积，mlml；uT T药典规定的滴定度，药典规定的滴定度，mg/mlmg/ml；uF F校正因数校正因数 第51页/共101页（2 2）间接滴定法1 1）生成物滴定法含量（)=(VT/W)100%=(VTF/W)100%第52页/共101页 例例 葡萄糖酸锑钠葡萄糖酸锑钠的的测定测定 Ch.P（2005）取本品约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加水100ml、盐酸15ml与碘化钾试液10ml，密塞、
18、振摇后，在暗处静置10min，用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验 校 正。每 lml的 硫 代 硫 酸 钠 滴 定 液(0.1mol/L)相当于6.088mg的Sb。第53页/共101页T=ma/bM=0.11/2121.76T=ma/bM=0.11/2121.76=6.088(mg/ml)=6.088(mg/ml)第54页/共101页2 2）剩余量滴定法（回滴定法）剩余量滴定法（回滴定法）此此法法是是在在被被测测药药物物中中加加入入定定量量过过量量的的滴滴定定液液A A，反反应应完完全全后后，再再用用另另一一滴滴
19、定定液液B B回回滴滴反反应应中中剩剩余余的的滴滴定定液。液。本法常需本法常需空白试验空白试验校正校正第55页/共101页含量（%）=（V V0 0B B-V-VS SB B）F FB BTTA A/W100%/W100%T TA A滴定液对被测物的滴定度，mg/mlmg/ml；V V0 0B B空白消耗回滴定液体积，mLmL；V VS SB B回滴定液体积，mLmL；F FB B 回滴定液的浓度校正因数；W W 供试品质量；mgmg；第56页/共101页司可巴比妥钠司可巴比妥钠 ChP（2000）：）：取取本本品品约约0.1g，精精密密称称定定，置置250ml碘碘瓶瓶中中，加加水水10m1，
20、振振摇摇使使溶溶解解，精精密密加加溴溴滴滴定定液液（0.05mol/L）25ml，再再加加盐盐酸酸5m1，立立即即密密塞塞并并振振摇摇1min，在在暗暗处处静静置置15min后后，注注意意微微开开瓶瓶塞塞，加加碘碘化化钾钾试试液液10m1，立立即即密密塞塞，摇摇匀匀后后，用用硫硫代代硫硫酸酸钠钠滴滴定定液液（0.1mol/L）滴滴定定，至至近近终终点点时时，加加淀淀粉粉指指示示液液，继继续续滴滴定定至至蓝蓝色色消消失失，并并将将滴滴定定结结 果果 用用 空空 白白 试试 验验 校校 正正。每每 1ml溴溴 滴滴 定定 液液（0.05mo1/L）相当于）相当于13.01mg的的C12H17N2N
21、aO3。第57页/共101页已已 知知：司司 可可 巴巴 比比 妥妥 钠钠 的的 摩摩 尔尔 质质 量量M=260.23M=260.23，司司可可巴巴比比妥妥钠钠与与溴溴反反应应的的摩摩尔尔比比为为1 1：1 1；供供试试品品的的量量W=0.1022gW=0.1022g，硫硫代代硫硫酸酸钠钠滴滴定定液液(0.1mol/L)(0.1mol/L)浓浓度度校校正正因因数数F=1.038F=1.038；供供试试品品滴滴定定消消耗耗硫硫代代硫硫酸酸钠钠滴滴定定液液15.73ml15.73ml，空空白白试试验验消消耗硫代硫酸钠滴定液耗硫代硫酸钠滴定液23.21ml23.21ml。第58页/共101页T=m
22、a/bM=0.051/1260.23T=ma/bM=0.051/1260.23 =13.01(mg/ml)=13.01(mg/ml)含量（）（V V0 0-V-VS S）F FB BTTA A/W100%/W100%=(23.21-15.73)=(23.21-15.73)1.03813.01 1.03813.01 1000/0.10221000/0.1022 100%100%=98.8%=98.8%第59页/共101页 二、光谱分析法二、光谱分析法 （一）紫外（一）紫外-可见分光光度法可见分光光度法 200nm200nm760nm760nm 1.1.朗伯朗伯-比耳定律比耳定律 A=ECLA=E
23、CL第60页/共101页2.2.特点灵敏度高，可达1010-4-4g gmlml-1-11010-7-7g gmlml-1-1准确度高，相对误差为2 25 5；仪器价廉，操作简单；应用广泛第61页/共101页 RSD一般不大于一般不大于1 回收率回收率一般应在一般应在 98102 线性线性 A A一般在一般在0.30.30.70.7 浓度点浓度点n n5 5 r r应大于应大于0.9990.999 截距应近于截距应近于零零第62页/共101页3.3.对溶剂的要求 溶剂置1cm1cm石英比色池中，以空气为空白测定吸光度，溶剂和吸收池的吸光度 220220240nm240nm不得超过0.400.4
24、0；241241 250nm250nm不得超过0.200.20；251251 300nm300nm不得超过0.100.10；在300nm 300nm 以上不得超过0.050.05第63页/共101页 4.4.测定法测定法 测测定定时时，应应以以配配制制供供试试品品溶溶液液的的同同批溶剂为空白对照批溶剂为空白对照 供供试试品品溶溶液液的的吸吸光光度度，应应减减去去空空白白读数读数 吸吸收收度度读读数数在在0.30.30.70.7之之间间的的误误差差较小。较小。第64页/共101页 （1 1）对照品比较法）对照品比较法 供试品溶液供试品溶液 A A供供 对照品溶液对照品溶液 1001001010
25、A A对对 第65页/共101页C C供（A A供/A/A对）C C对原料药含量（）（C C供D/D/W W）100%100%A A供E E1%1%1cm1cml Cl C供A A对E E1%1%1cm1cml Cl C对 D D稀释倍数；W W供试品取样量 第66页/共101页称取苯巴比妥称取苯巴比妥0.1585克，加克，加pH9.6缓冲溶液缓冲溶液稀释至稀释至100ml，精密量取，精密量取5ml,同法稀释同法稀释 至至200ml，摇匀，滤过，再取续滤液，摇匀，滤过，再取续滤液25.0ml稀稀释至释至100.0ml作为供试品溶液；另精密量取作为供试品溶液；另精密量取苯巴比妥对照品适量苯巴比妥
26、对照品适量，同法稀释制成，同法稀释制成10.1g/ml的溶液作为对照品溶液。取上述的溶液作为对照品溶液。取上述两种溶液，照分光光度法，在两种溶液，照分光光度法，在240nm的波的波长处分别测得供试品溶液和对照品溶液的长处分别测得供试品溶液和对照品溶液的吸收度分别为吸收度分别为0.427和和0.438，试计算苯巴比，试计算苯巴比妥的含量。妥的含量。第67页/共101页固体制剂标示量(%)=(C(%)=(C供D WD W平/W B)100%/W B)100%W W平为单位制剂的平均重量（或装量）B B为制剂的标示量 第68页/共101页液体制剂标示量(%)=(C(%)=(C供D VD V平/V B
27、)100%/V B)100%V V平为单位制剂的标示装量 V V为供试品的量取体积 B B为制剂的标示量 第69页/共101页（2 2）吸收系数法）吸收系数法 供试品溶液：供试品溶液：A A 已知已知E E1%1%1cm1cm 计算含量计算含量C C供供A A供供/（100 100 （E E1%1%1cm1cm）供供）第70页/共101页维生素B2含量测定取本品约75mg，精密称定，置烧杯中，加冰醋酸1ml与水75ml，加热溶解后，加水稀释，放冷，移置500ml量瓶中，再加水稀释至刻度，摇匀；精密量取10ml，置100ml量瓶中，加1.4%醋酸钠溶液7ml，并用水稀释至刻度，摇匀，照分光光度法
28、在444nm的波长处测定吸收度，按维生素B2的吸收系数E1%1cm为323计算，求含量？A=0.4923 W=76.28mg第71页/共101页（3 3）计算分光光度法）计算分光光度法 双波长分光光度法双波长分光光度法 解线性方程组法解线性方程组法 三波长法三波长法 导数光谱法导数光谱法第72页/共101页（4 4）比色法 供试品本身在紫外-可见光区没有强吸收，或在紫外光区虽有吸收，但为了避免干扰或提高灵敏度，加入适当的显色剂后进行测定的方法。第73页/共101页取标示量为0.3g/0.3g/片的干酵母片2020片，重量为10.0120g10.0120g，研细，精密称取其片粉0.5507g0.
29、5507g，经消化蒸馏，用2%2%硼酸溶液50ml50ml吸收，加甲基红-溴甲酚绿指示剂，用硫酸滴定液（0.05145mol/L)0.05145mol/L)滴定至终点，消耗19.02ml,19.02ml,空白消耗该溶液0.08ml,0.08ml,求干酵母片蛋白质的标示量%。1ml1ml硫酸（0.05mol/L0.05mol/L）相当于1.401mg1.401mg的氮.蛋白质的含氮量为16%16%第74页/共101页本课要求掌握滴定度的定义掌握滴定度的定义掌握容量分析法和光谱分析法的计掌握容量分析法和光谱分析法的计算算熟悉容量分析法和光谱分析法的特熟悉容量分析法和光谱分析法的特点点第75页/共1
30、01页 三、色谱分析法三、色谱分析法 色谱分析法是一种分离分析方法色谱分析法是一种分离分析方法是分析混合物的最有力手段是分析混合物的最有力手段特点特点高灵敏度高灵敏度:10:10-12-12g gmlml-1-11010-15-15g gmlml-1-1高效能、高速度高效能、高速度应用广泛应用广泛第76页/共101页1.1.对仪器的一般要求 以C C1818为固定相的反相色谱系统，流动相为甲醇-水，间或加有乙腈、缓冲液、反离子物质等 第77页/共101页中国药典中国药典正文规定的条件除正文规定的条件除固固定相种类、流动相组成、检测器定相种类、流动相组成、检测器类型类型不得任意改动外，其他条件不
31、得任意改动外，其他条件均可适当改变，以适应色谱系统均可适当改变，以适应色谱系统并达到系统适应性试验的要求。并达到系统适应性试验的要求。第78页/共101页2.2.系统适应性试验系统适应性试验(1)(1)色谱柱的理论板数（色谱柱的理论板数（n)n)n=5.54n=5.54(t(tR R/W/Wh/2h/2)2 2(2)(2)分离度分离度:R=2(tR=2(tR2R2-t-tR1R1)/(W)/(W1 1+W+W2 2)R R应大于应大于1.51.5第79页/共101页(3)(3)重复性：同一样进重复性：同一样进5 5次相对偏差次相对偏差2.0%2.0%(4)(4)T=W0.05h/2d1T=W0
32、.05h/2d1 T=0.95 T=0.951.051.05第80页/共101页3.3.测定法测定法（1 1）内内标标法法加加校校正正因因子子测测定定供供试试品品中中主主成分含量成分含量 计算校正因子计算校正因子 测定含量测定含量 第81页/共101页 内标法 将一个已知含量，样品中不含有的纯物质，加至待测样品溶液中，以此纯物质的量为标竿，对比测定待测组分的含量的方法谓内标法。优点：定量结果与进样量无关（不超载条件下）。第82页/共101页对内标物的要求：内标物是原样品中不含有的组分内标物的保留时间应与待测成分相近，分离度R1.5R1.5。内标物必须是纯度合乎要求的纯物质。第83页/共101页
33、校正因子的计算精密称（量）取药物对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子（f）测定用的含内标的对照品溶液。取一定量注入仪器，记录色谱图。测量对照品和内标物质的峰面积（或峰高）计算校正因子：校正因子（f）（As/CsAs/Cs）内标/（Ai/CiAi/Ci）对照第84页/共101页含量测定含量测定含量（含量（C C供供）f fA A供供/（A As/Cs/Cs s）内标内标 配供试品溶液和上述内标溶液，同配供试品溶液和上述内标溶液，同法配成含内标的供试品溶液，取一定法配成含内标的供试品溶液，取一定量注入仪器，记录色谱图，量注入仪器，记录色谱图，测量供试品中待测成分和内标物质的
34、测量供试品中待测成分和内标物质的峰面积峰面积或峰高（或峰高（A A或或h h）第85页/共101页地塞米松的HPLCHPLC法测定：取本品精密称定，质量为0.0697g0.0697g，置50ml50ml量瓶中，加30ml30ml乙醇溶解，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml5ml，置25ml25ml量瓶中，加0.2mg/ml0.2mg/ml甲基睾丸素液5.0ml5.0ml，用流动相稀释至刻度，摇匀，取2020l l进样，测得地塞米松的峰面积为13131313，甲基睾丸素的峰面积为10321032，质量校正因子为1.051.05，求其含量。第86页/共101页地塞米松%=（fAfAX X ）/A
35、/AS SCCs s D/W 100%D/W 100%=（1.0513131.051313）/10320.2250/69.7100%/10320.2250/69.7100%=96.8%=96.8%第87页/共101页(2)(2)外标法测定供试品中主成分含量外标法测定供试品中主成分含量 外外标标法法是是以以供供试试品品的的对对照照品品或或标标准准品品作作对对照照物物质质，相相比比较较以以求求得得供试品的含量。供试品的含量。第88页/共101页 方法方法 精精密密称称（量量）取取对对照照品品和和供供试试品品，分分别别配配制制成成对对照照品品溶溶液液（C C对对）和和供供试试品品溶溶液液（C C供供
36、），分分别别精精密密量量取取一一定定量量，注注入入仪仪器器，记记录录色色谱谱图图，测测量量对对照照品品的的峰峰面面积积（A A对对）和和供供试试品品待待测测成成分分的的峰峰面面积积（A A供供）（或或峰峰高），按下式计算含量：高），按下式计算含量：C C供供（A A供供/A/A对对）C C对对第89页/共101页（二）气相色谱法标准溶液加入法 精密称（量）取待测成分对照品适量，配制成适当浓度的对照品溶液，取一定量，精密加入到供试品溶液中，根据外标法或内标法测定含量，再扣除加入的对照品溶液含量，即得。C C供=C=CX X/（A AISIS/A/A供）-1-1 CX为所加入的已知浓度的待测成分对
37、照品的浓度 A Aisis为加入对照品后组分的色谱峰面积第90页/共101页手动进样 内标法自动进样 可用外标法顶空进样 标准加入法 各方法结果不同时，以标准加入法结果为准第91页/共101页 本课学习要求 掌握容量分析法、光谱分析法、色谱分析的特点，应用及计算 第92页/共101页第四节 生物样品分析方法的基本要求一、常用样品 血样 唾液 尿样第93页/共101页血样 作为体内药物浓度的可靠指标血浆 全血加抗凝剂，离心，取上清血清 全血静置，离心，取上清全血 加抗凝剂长时间保存置-20或-80第94页/共101页尿液 药物以原型（母体药物）或代谢物及其缀合物等从尿液中排出 用于药物剂量回收、
38、尿清除率、生物利用度、以及药物代谢物及其代谢途径、类型、速率等可加入防腐剂后置冰箱冷藏防腐剂：甲苯、二甲苯、三氯甲苯、醋酸、盐酸第95页/共101页二、生物样品分析前处理技术（一）蛋白质的去除1.1.加入与水混溶的有机溶剂：乙腈、甲醇、丙酮、四氢呋喃2.2.加入中性盐：饱和硫酸铵、硫酸钠、镁盐、磷酸盐及枸橼酸盐第96页/共101页3.加入强酸：10%三氯醋酸、6%高氯酸、5%偏磷酸4.加入含锌盐及铜盐的沉淀剂：CuSO4-Na2WO4 ZnSO4-NaOH5.酶解法第97页/共101页（二）缀合物的水解酸水解 盐酸溶液酶水解 葡糖酸苷酶 硫酸酯酶（三）有机破坏 金属离子第98页/共101页（四）分离、纯化与浓集1.液-液萃取法2.液-固萃取法3.被测组分的浓集 a 末次萃取时加入的萃取液尽量少 b 挥去萃取溶剂法（五）化学衍生法第99页/共101页三、定量分析方法的验证质量控制 每个分析批均应建立相应的标准曲线，并随行测定高、中、低3个浓度的QC样品，每个浓度至少双样本并应均匀分布在未知样品测试顺序中。样本数多时，QC样品数大于未知样品总数的5%QC测定结果 偏差15%，低浓度20%，最多允许1/3不在同一浓度的QC样品结果超标。第100页/共101页感谢您的观看！第101页/共101页