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1、第四章第四章 药物定量分析与分析方法验证药物定量分析与分析方法验证 第二节第二节 分析样品的前处理方法分析样品的前处理方法 第一节第一节 定量分析方法定量分析方法第三节第三节 药品分析方法验证药品分析方法验证练习与思考练习与思考基本要求基本要求 一、掌握定量分析方法及验证的效能指标。一、掌握定量分析方法及验证的效能指标。二、熟悉定量分析方法的特点二、熟悉定量分析方法的特点 三、熟悉样品的前处理方法。三、熟悉样品的前处理方法。四、了解定量分析样品的前处理方法的进展四、了解定量分析样品的前处理方法的进展 及在药物分析中的应用。及在药物分析中的应用。n重量分析法重量分析法n容量分析法容量分析法n光谱
2、分析法光谱分析法n色谱分析法色谱分析法第一节第一节 定量分析方法定量分析方法一、重量分析法一、重量分析法生成的沉淀而进行分析的方法生成的沉淀而进行分析的方法生成沉淀生成沉淀滤过滤过洗涤洗涤灼烧灼烧恒重。恒重。特点：特点：1 1、操作繁琐、操作繁琐2 2、结果准确、结果准确很少用很少用 （一）容量分析法的（一）容量分析法的特点特点 操作简单、快速；操作简单、快速；比较准确（相对误差比较准确（相对误差0.2%0.2%）；）；仪器普通易得仪器普通易得 常用于测定高含量或中含量组分，原料药含量测定首选常用于测定高含量或中含量组分，原料药含量测定首选二、容量分析法二、容量分析法 （二）容量分析法的（二）
3、容量分析法的计算计算问题问题 1.1.滴定度滴定度（T T）：）：每每1 1mlml规定浓度的滴定液相当于被测物质的质量规定浓度的滴定液相当于被测物质的质量(mg)mg)2.2.滴定度的计算滴定度的计算 aAaA（待测物）（待测物）+bB bB（滴定液）（滴定液）cC cC+dD dD a ba b T/MT/M 1 1m m T=ma/bMm：滴定液浓度：滴定液浓度(mol/L)M：被测物分子量：被测物分子量WA=TVB 3.百分含量的计算百分含量的计算 （1）直接滴定法）直接滴定法W W：供试品取样量供试品取样量 设至终点时，消耗滴定液体积为设至终点时，消耗滴定液体积为V ml则药物实测质
4、量为则药物实测质量为VT浓度校正因数浓度校正因数 （2 2）间接滴定法）间接滴定法 1 1）生成物滴定法（略）生成物滴定法（略）药物药物 +A B 滴定滴定2 2）剩余滴定法（回滴法）剩余滴定法（回滴法）药物药物 +A（定、过量）（定、过量）剩余的剩余的 A+B （回滴）（回滴）V 空白试验空白试验V0滴定剂滴定剂 （3）以相当于标示量）以相当于标示量%表示表示n光谱光谱n光谱分析法光谱分析法n分光光度法分光光度法n分类分类 紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法 红外分光光度法红外分光光度法 原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法 荧光分光光度法荧光分光光度法 三、光谱分析法三、光谱分析法 三
5、、光谱分析法三、光谱分析法 （一）紫外（一）紫外-可见分光光度法可见分光光度法 吸收光谱范围：紫外：吸收光谱范围：紫外：200200400nm400nm 可见：可见：400400760nm760nm 灵敏度高，可达灵敏度高，可达10-4g/ml 10-7g/ml 1.特点特点 准确度高，准确度高，RE（%）为为2%5%5%仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用广泛仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用广泛 2.2.朗伯朗伯-比耳定律比耳定律 A=ECLA=ECL 吸收系数：摩尔吸收系数吸收系数：摩尔吸收系数 研究分子结构研究分子结构 百分吸收系数百分吸收系数 含量测定含量测定 3.3.测定方法测定
6、方法 要求供试品溶液的要求供试品溶液的A A应在应在0.3 0.3 1 1）对照品比较法：）对照品比较法：A A供供A A对对C C供供C C对对制剂：制剂：原料药：原料药：A AX XA AR RW WX XW WR R2）吸收系数法：）吸收系数法：注意：注意：应应100 应注意仪器的校正和检定：应注意仪器的校正和检定：作为计算浓作为计算浓度的因数进行定量的方法，不是任何情况下都度的因数进行定量的方法，不是任何情况下都适用的，特别是单色光不纯的情况下，适用的，特别是单色光不纯的情况下，A会随会随仪器不同而变化，误差较大。仪器不同而变化，误差较大。但若认定一台仪器，固定其工作状态和测但若认定一
7、台仪器，固定其工作状态和测定条件，则定条件，则C和和A间的关系在多数情况下仍符合间的关系在多数情况下仍符合LambertBeer定律。定律。3）计算分光光度法：）计算分光光度法：多种，具体按每种药物规定的方法进行多种，具体按每种药物规定的方法进行 如：如：VA的三点校正法的三点校正法4）比色法）比色法 加入显色剂后，按照对照品比较法测定加入显色剂后，按照对照品比较法测定 影响显色因素很多，故需注意平行操作影响显色因素很多，故需注意平行操作 空白溶剂：溶剂空白溶剂：溶剂+显色剂，同法处理显色剂，同法处理 （二）荧光分析法（二）荧光分析法 灵敏度高灵敏度高，可达，可达10-10g/ml 10-12
8、g/ml 在在低浓度低浓度进行测定，防止自熄灭作用进行测定，防止自熄灭作用 1.特点特点 用用基准溶液基准溶液校正校正仪器灵敏度仪器灵敏度 制备荧光制备荧光衍生物衍生物，可提高灵敏度和选择性，可提高灵敏度和选择性 干扰因素多干扰因素多，需做需做空白实验空白实验 样品用样品用量少量少，操作，操作简单简单，应用，应用范围范围较较广广 2.含量测定含量测定 原理：当激发光强度、波长、所用溶剂及温度原理：当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件固定时，物质在一定浓度范围内，其荧等条件固定时，物质在一定浓度范围内，其荧光强度光强度R与与该物质浓度该物质浓度C成正比成正比 方法：对照品比较法方法：对照品比
9、较法 计算：计算：根据混合物中各组分的根据混合物中各组分的色谱行为差异色谱行为差异，先，先行分离后再在线或离线对各组分逐一进行分析行分离后再在线或离线对各组分逐一进行分析的方法，的方法，是分离分析混合物的最有力手段是分离分析混合物的最有力手段。按分离原理：吸附；分配；离子交换；排阻色谱按分离原理：吸附；分配；离子交换；排阻色谱分类分类 按分离方法：按分离方法：PC；TLC；柱色谱；柱色谱；GC；HPLC 特点：高灵敏度、特点：高灵敏度、高效能、高速度、应用广泛高效能、高速度、应用广泛四、色谱分析法四、色谱分析法 1.对仪器一般要求对仪器一般要求 固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变固
10、定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变 其他均可适当改变其他均可适当改变 色谱图色谱图20分钟分钟内记录完毕内记录完毕 2.系统适用性试验系统适用性试验 色谱柱的色谱柱的理论板数理论板数：n=5.54(tR/Wh/2)2 分离度分离度：R=2（tR1 tR2)/(W1+W2);重复性：重复性：对照液连续进样对照液连续进样5次，峰面积次，峰面积RSD 拖尾因子拖尾因子：T=W/2d1 应在应在0.9 （一）（一）HPLC法法流动相流动相真空脱气机真空脱气机四元泵四元泵自动进样器自动进样器紫外检测器紫外检测器荧光检测器荧光检测器蒸发光散射检测器蒸发光散射检测器液质联用仪液质联用仪质谱检测器质
11、谱检测器流动相：对于以流动相：对于以C18为固定相的为固定相的反相色谱系统反相色谱系统，常用甲醇常用甲醇-水水，间或加以乙腈、缓冲液等为流动，间或加以乙腈、缓冲液等为流动相，有机溶剂比例通常不低于相，有机溶剂比例通常不低于5四元泵四元泵自动进样器自动进样器色谱柱色谱柱填充剂常用：十八烷基硅烷键合硅胶填充剂常用：十八烷基硅烷键合硅胶检测器检测器3.测定方法测定方法 1)内标法加校正因子测定供试品中主成分含量内标法加校正因子测定供试品中主成分含量对照液（对照液（R）：）：AR CR 峰面积峰面积 含量含量内标液（内标液（S）：）：AS CS供试液（供试液（X）：）：AX CXf=AS/CSAR/C
12、Rf=AS/CSAx/CxCx=f AxAS/CS例例2)外标法测定供试品中主成分含量外标法测定供试品中主成分含量对照液（对照液（R）：）：AR CR 供试液（供试液（X）：）：AX CXCX CRAX ARCXCR AXAR要求：进样量准确、操作条件稳定要求：进样量准确、操作条件稳定 （二）（二）GC法法 1.对对GC仪器一般要求仪器一般要求 载载 气：气：氮气氮气 色谱柱：色谱柱：填充柱或毛细管柱填充柱或毛细管柱 填充柱：内径填充柱：内径24mm，长，长110m，内装吸附剂，内装吸附剂 高分子多孔小球或涂渍固定液的载体高分子多孔小球或涂渍固定液的载体 毛细管柱毛细管柱：内径，长：内径，长10100m，一般为空心柱，内壁或载体经涂渍或一般为空心柱，内壁或载体经涂渍或 交联固定液交联固定液检测器：检测器：氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器色谱图：色谱图：30分钟内记录完毕分钟内记录完毕 2.色谱适用性实验：同色谱适用性实验：同HPLC 3.测定法：同测定法：同HPLC