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1、第一节定量分析样品的前处理第一节定量分析样品的前处理u一、概述一、概述u研究对象：含金属或含卤素，硫，磷，硒等特殊元素药物分析前处理。研究对象：含金属或含卤素，硫，磷，硒等特殊元素药物分析前处理。u二、不经有机破坏的分析方法二、不经有机破坏的分析方法u三、经有机破坏的分析方法三、经有机破坏的分析方法第1页/共69页 一、概述一、概述原料原料:不经特殊处理直接测定不经特殊处理直接测定原料原料:经有机破坏后测定经有机破坏后测定 制剂制剂:排除处方中干扰组分排除处方中干扰组分药物药物第2页/共69页二、不经有机破坏的分析方法二、不经有机破坏的分析方法（一）直接测定法（一）直接测定法1.1.配位滴定法
2、配位滴定法2.2.氧化还原法氧化还原法（二）经水解后测定法（二）经水解后测定法1.1.碱水解后测定法碱水解后测定法2.2.酸水解后测定法酸水解后测定法（三）经还原分解后测定（三）经还原分解后测定第3页/共69页二、不经有机破坏的分析方法二、不经有机破坏的分析方法（一）直接测定法（一）直接测定法1.1.配位滴定法配位滴定法 葡萄糖酸钙葡萄糖酸钙 【含量测定含量测定】取本品取本品0.5g0.5g，精密称定，加水，精密称定，加水100ml100ml，微热使溶，微热使溶解，加氢氧化钠试液解，加氢氧化钠试液 15ml15ml与钙紫红素指示剂与钙紫红素指示剂0.1g0.1g，用乙二胺四，用乙二胺四醋酸二钠
3、滴定液醋酸二钠滴定液(0.05mol/L)(0.05mol/L)滴定至溶液自紫滴定至溶液自紫 色转变为纯蓝色。色转变为纯蓝色。每每1ml1ml乙二胺四醋酸二钠滴定液（乙二胺四醋酸二钠滴定液（0.05mol/L 0.05mol/L）相当于）相当于22.42mg 22.42mg 的的 C12H22CaO14.H2OC12H22CaO14.H2O。第4页/共69页二、不经有机破坏的分析方法二、不经有机破坏的分析方法（一）直接测定法（一）直接测定法2.2.氧化还原法氧化还原法 葡萄糖酸锑钠葡萄糖酸锑钠 【含量测定含量测定】取本品约取本品约0.3g0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加，精密称定，置具塞
4、锥形瓶中，加水水100ml 100ml、盐酸、盐酸15 ml15 ml与碘化钾试液与碘化钾试液10ml10ml，密塞，振摇后，在，密塞，振摇后，在暗处静置暗处静置1010分钟，用分钟，用硫代硫酸钠硫代硫酸钠滴定液滴定液(0.1mo l/L)(0.1mo l/L)滴定，至近滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白果用空白 试验校正。每试验校正。每1ml1ml硫代硫酸钠滴定液硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)相当相当于于6.088mg 6.088mg 的的SbSb。第5页/共69页二、不经有
5、机破坏的分析方法二、不经有机破坏的分析方法（二）经水解后测定法（二）经水解后测定法1.1.碱水解后测定法碱水解后测定法 三氯叔丁醇三氯叔丁醇 【含量测定含量测定】取本品约取本品约0.1g0.1g，精密称定，加乙醇，精密称定，加乙醇5ml 5ml，溶解后，加，溶解后，加2020氢氧化钠氢氧化钠 溶液溶液5ml 5ml，加热回流，加热回流1515分钟，放冷至室温，加水分钟，放冷至室温，加水20ml20ml与硝酸与硝酸5ml 5ml，精密加硝酸银滴定液，精密加硝酸银滴定液 (0.1mol/L)30ml(0.1mol/L)30ml，再加邻苯二甲酸二丁酯，再加邻苯二甲酸二丁酯5ml 5ml，密塞，强力振
6、摇后，加硫酸铁铵指示液，密塞，强力振摇后，加硫酸铁铵指示液 2ml 2ml，用，用硫氰酸铵滴定液硫氰酸铵滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml1ml的的 硝酸银滴硝酸银滴定液定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)相当于相当于6.216mg 6.216mg 的的C4H7Cl3O.1/2H2OC4H7Cl3O.1/2H2O。第6页/共69页二、不经有机破坏的分析方法二、不经有机破坏的分析方法（二）经水解后测定法（二）经水解后测定法2.2.酸水解后测定法酸水解后测定法 硬脂酸镁硬脂酸镁 【含量测定含量测定
7、】取本品约取本品约1g1g，精密称定，精密加，精密称定，精密加硫酸滴定液硫酸滴定液(0.05mol/L)50ml(0.05mol/L)50ml，煮，煮 沸至油层澄清，继续加热沸至油层澄清，继续加热1010分钟，放分钟，放冷至室温，加甲基橙指示液冷至室温，加甲基橙指示液1 1 2 2 滴，用氢氧化钠滴，用氢氧化钠 滴定液滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)滴定。每滴定。每1ml1ml硫酸滴定液硫酸滴定液(0.05mol/L)(0.05mol/L)相当于相当于2.016mg 2.016mg 的的MgOMgO。第7页/共69页二、不经有机破坏的分析方法二、不经有机破坏的分析方法（三）经还原
8、分解后测定法（三）经还原分解后测定法1.1.碱性还原后测定碱性还原后测定2.2.酸性还原后测定酸性还原后测定3.3.利用可游离的金属离子的氧化性测定含量利用可游离的金属离子的氧化性测定含量第8页/共69页三、经有机破坏的分析方法三、经有机破坏的分析方法一、湿法破坏一、湿法破坏二、干法破坏二、干法破坏1.1.高温炽灼法高温炽灼法2.2.氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法第9页/共69页三、经有机破坏的分析方法三、经有机破坏的分析方法一、湿法破坏一、湿法破坏 凯氏定氮法凯氏定氮法（Kjeldahl nitrogen determination)Kjeldahl nitrogen determination)适用
9、：含氨基或酰胺结构的药物适用：含氨基或酰胺结构的药物原理原理:含氮药物与硫酸共热含氮药物与硫酸共热,将有机氮转变成无机氨将有机氮转变成无机氨,然后测定氮的含量。然后测定氮的含量。第10页/共69页三、经有机破坏的分析方法三、经有机破坏的分析方法 一、湿法破坏一、湿法破坏 凯氏定氮法凯氏定氮法 双氯非那胺双氯非那胺 【含量测定含量测定】取本品约取本品约0.3g0.3g，精密称定，照氮测定法（附录，精密称定，照氮测定法（附录 D D 第一法）测定。第一法）测定。每每1ml1ml硫酸滴定液硫酸滴定液(0.05mol/L)(0.05mol/L)相当于相当于15.26mg 15.26mg 的的C6H6C
10、l2N2O4S2 C6H6Cl2N2O4S2。第11页/共69页三、经有机破坏的分析方法三、经有机破坏的分析方法 一、干法破坏一、干法破坏 氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法适用适用含卤素或硫、磷等元素的有机药物的鉴别、限度检查或含量含卤素或硫、磷等元素的有机药物的鉴别、限度检查或含量测定及药物中杂质硒的检查。测定及药物中杂质硒的检查。第12页/共69页三、经有机破坏的分析方法三、经有机破坏的分析方法一、干法破坏一、干法破坏 氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法碘苯酯碘苯酯 【含量测定含量测定】取本品约取本品约20mg20mg，精密称定，照氧瓶燃烧法（附录，精密称定，照氧瓶燃烧法（附录 C C）进行有机破）进行有机破 坏，
11、用氢氧化钠试液坏，用氢氧化钠试液2ml 2ml 与水与水10ml10ml为吸收液，俟吸收完全后，加溴醋酸溶液（取醋酸为吸收液，俟吸收完全后，加溴醋酸溶液（取醋酸钾钾 10g 10g，加冰醋酸适量使溶解，加溴，加冰醋酸适量使溶解，加溴0.4ml 0.4ml，再加冰醋酸使成，再加冰醋酸使成100ml100ml）10ml10ml，密塞，密塞，振摇，振摇，放置数分钟，加甲酸约放置数分钟，加甲酸约1ml 1ml，用水洗涤瓶口，并通入空气流约，用水洗涤瓶口，并通入空气流约3 3 5 5 分钟以除分钟以除去剩余的去剩余的 溴蒸气，加碘化钾溴蒸气，加碘化钾2g2g，密塞，摇匀，用硫代硫酸钠滴定液，密塞，摇匀，
12、用硫代硫酸钠滴定液(0.02mol/L)(0.02mol/L)滴定，滴定，至近终点至近终点 时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失,并将滴定的结果用空白试验校正。并将滴定的结果用空白试验校正。每每1ml1ml硫代硫代 硫酸钠滴定液硫酸钠滴定液(0.02mol/L)(0.02mol/L)相当于相当于1.388mg 1.388mg 的的C19H29IO2C19H29IO2。第13页/共69页第二节第二节 定量分析方法的特点定量分析方法的特点一、容量分析法一、容量分析法 （1 1）适用于化学原料药的含量测定适用于化学原料药的含量测定 （2 2）容量分析法的有关计算）
13、容量分析法的有关计算 （3 3）含量测定）含量测定二、光谱分析法二、光谱分析法三、色谱分析法三、色谱分析法 第14页/共69页第二节第二节 定量分析方法的特点定量分析方法的特点一、容量分析法的特点一、容量分析法的特点 装置简单，操作简便、快速，方法耐用性高，测定结果准确（装置简单，操作简便、快速，方法耐用性高，测定结果准确（RSDRSD0.2%0.2%）；专属性差，适用于含量较高）；专属性差，适用于含量较高的样品分析，常用于的样品分析，常用于化学原料药化学原料药的含量测定。的含量测定。掌握含量测定的掌握含量测定的计算公式和方法。计算公式和方法。第15页/共69页第二节第二节 定量分析方法的特点
14、定量分析方法的特点二、光谱分析法二、光谱分析法（1 1）紫外分光光度法）紫外分光光度法特点：特点：1.1.灵敏度高，灵敏度高，1010-4-4-10-10-7-7g/mlg/ml。2.2.准确度高，准确度高，RSD%RSD%：2%-5%2%-5%。3.3.仪器价廉物美，操作简便，易于普及。仪器价廉物美，操作简便，易于普及。4.4.应用广泛。应用广泛。第16页/共69页第二节第二节 定量分析方法的特点定量分析方法的特点二、光谱分析法二、光谱分析法（1 1）紫外分光光度法）紫外分光光度法 含量测定方法含量测定方法 1.1.对照品比较法对照品比较法 2.2.吸收系数法吸收系数法 3.3.计算分光分度
15、法。计算分光分度法。4.4.比色法比色法第17页/共69页第二节第二节 定量分析方法的特点定量分析方法的特点二、光谱分析法二、光谱分析法（2 2）荧光分析法）荧光分析法 特点特点1.1.灵敏度高，灵敏度高，1010-10-10 10 10-12-12g/mlg/ml。2.2.在低浓度溶液中进行。在低浓度溶液中进行。3.3.在测定供试品溶液时在测定供试品溶液时,用基准溶液代替对照品溶液校正仪器的灵敏度。用基准溶液代替对照品溶液校正仪器的灵敏度。4.4.用荧光衍生试剂用荧光衍生试剂,提高分析方法的灵敏度和选择性。提高分析方法的灵敏度和选择性。第18页/共69页第二节第二节 定量分析方法的特点定量分
16、析方法的特点三、色谱分析法三、色谱分析法 （一）高效液相色谱法（一）高效液相色谱法特点特点 高灵敏度（高灵敏度（1010-12-12-10-10-15-15g/mlg/ml ）、高选择性、高效能、高速度及应用）、高选择性、高效能、高速度及应用广泛。广泛。第19页/共69页第二节第二节 定量分析方法的特点定量分析方法的特点三、色谱分析法三、色谱分析法 （一）高效液相色谱法（一）高效液相色谱法系统适用性系统适用性（1 1）理论板数）理论板数 （2 2）分离度）分离度 （3 3）重复性）重复性 （4 4）拖尾因子）拖尾因子含量测定方法含量测定方法（1 1）内标法）内标法 （2 2）外标法）外标法 第
17、20页/共69页第三节第三节 药品分析方法的验证药品分析方法的验证 目目 的的 证明建立和采用的方法适合相应检测的要求。证明建立和采用的方法适合相应检测的要求。内内 容容 准确度准确度 精密度，专属性，检测限，定量限，线性，线性精密度，专属性，检测限，定量限，线性，线性范围和耐用性范围和耐用性 第21页/共69页第三节第三节 药品分析方法的验证药品分析方法的验证一、准确度（一、准确度（Accuracy)Accuracy)指方法测定的结果与真实值或参考值接近的指方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用回收率表示。程度，用回收率表示。第22页/共69页第三节第三节 药品分析方法的验证药品分析方
18、法的验证二、精密度（二、精密度（Precision)Precision)指平行测定的各测量值（实验值）之间互指平行测定的各测量值（实验值）之间互相接近的程度。相接近的程度。第23页/共69页第三节第三节 药品分析方法的验证药品分析方法的验证三、专属性三、专属性 指其它组分可能存在下，采用的方法能准指其它组分可能存在下，采用的方法能准确测定出被测物的特性。确测定出被测物的特性。第24页/共69页第三节第三节 药品分析方法的验证药品分析方法的验证四、检测限（四、检测限（Limit of detection,LOD)Limit of detection,LOD)指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量
19、。指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量。第25页/共69页第三节第三节 药品分析方法的验证药品分析方法的验证五、定量限（五、定量限（Limit of quantitation,Limit of quantitation,LOQ)LOQ)指试样中被测物能被定量测定的最低量。指试样中被测物能被定量测定的最低量。第26页/共69页第三节第三节 药品分析方法的验证药品分析方法的验证六、线六、线 性性 指在一定范围内，试样浓度与响应值呈正比。指在一定范围内，试样浓度与响应值呈正比。第27页/共69页第三节第三节 药品分析方法的验证药品分析方法的验证七、范七、范 围围 指一种分析方法的精密度，准确度都符
20、合要指一种分析方法的精密度，准确度都符合要求的试验结果成线性时供试物浓度的变化范求的试验结果成线性时供试物浓度的变化范围。围。第28页/共69页第三节第三节 药品分析方法的验证药品分析方法的验证 八、耐八、耐 用用 性性 指在测定条件有小的变动时，测定结果不受指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为于常规检验提供依据。影响的承受程度，为于常规检验提供依据。第29页/共69页药品分析方法验证内容药品分析方法验证内容准确度准确度耐用性耐用性精密度精密度专属性专属性线性与线性范围线性与线性范围检测限与定量限检测限与定量限Text第30页/共69页第四节第四节 体内药物分析简介体内药物
21、分析简介 重要性：重要性：为了达到药物在临床上的使用安全、合理和有效，人们越来越要求了解和提供药物在体内的更多信息，即为了达到药物在临床上的使用安全、合理和有效，人们越来越要求了解和提供药物在体内的更多信息，即需要对药物及其制剂的体内需要对药物及其制剂的体内吸收、分布、代谢和排泄过程、作用机制及药物效应吸收、分布、代谢和排泄过程、作用机制及药物效应进行研究，因而促使药物进行研究，因而促使药物动力学、生物药剂学、临床药理学等一些新兴边缘学科的发展与建立。动力学、生物药剂学、临床药理学等一些新兴边缘学科的发展与建立。第31页/共69页第四节第四节 体内药物分析简介体内药物分析简介 定义：定义：体内
22、药物分析是通过分析手段了解药物在体内药物分析是通过分析手段了解药物在体内数量与质量的变化，获得各种体内数量与质量的变化，获得各种药物动力药物动力学学参数，参数，代谢的方式和途径代谢的方式和途径等信息。等信息。第32页/共69页第四节第四节 体内药物分析简介体内药物分析简介任务：任务：1 1）进行体内各种体液、组织，器官和排泄物中药物及代谢物的分离测定。）进行体内各种体液、组织，器官和排泄物中药物及代谢物的分离测定。2 2）进行新测定方法的研究、开发，以供临床常规测定之用。）进行新测定方法的研究、开发，以供临床常规测定之用。3 3）进行分析质量管理工作，提高测定技术和效率，以便获得迅速，准确，）
23、进行分析质量管理工作，提高测定技术和效率，以便获得迅速，准确，可靠的测定结果。可靠的测定结果。4 4）进行方法学研究，及时为相关学科的研究提供合理的最佳分析条件与）进行方法学研究，及时为相关学科的研究提供合理的最佳分析条件与方法，估计、评定各种方法能达到的灵敏、专属和准确的程度。方法，估计、评定各种方法能达到的灵敏、专属和准确的程度。5 5）参与相关学科研究中对获得的分析结果的阐明工作，使所得的测定数）参与相关学科研究中对获得的分析结果的阐明工作，使所得的测定数据更有助于说明问题。据更有助于说明问题。第33页/共69页第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的基本要求基本要求 一、样品
24、的种类一、样品的种类 凡是体内药物到达之处，如各种体液，器官组织和排泄物等，都是体内凡是体内药物到达之处，如各种体液，器官组织和排泄物等，都是体内药物分析的对象。药物分析的对象。血液血液是最常用的生物样品。是最常用的生物样品。第34页/共69页第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的基本要求基本要求 一、样品的种类一、样品的种类 (一一)血液血液 (1)(1)血浆血浆 全血中加入抗凝剂全血中加入抗凝剂(肝素、枸橼酸、肝素、枸橼酸、草酸盐、草酸盐、EDTAEDTA等），经离心后取上清液。等），经离心后取上清液。（2 2）血清）血清 全血不加抗凝剂，由血液中纤维蛋白全血不加抗凝剂，由血液
25、中纤维蛋白原等影响下原等影响下,引起血液凝结而析出的澄清黄色液体引起血液凝结而析出的澄清黄色液体,离心后取上清液。离心后取上清液。（3 3）全血）全血 加入抗凝剂混匀，以防凝血。加入抗凝剂混匀，以防凝血。第35页/共69页第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的 基本要求基本要求 一、样品的种类一、样品的种类 (二二)尿样尿样 尿药测定主要用于药物剂量回收，药物肾清除尿药测定主要用于药物剂量回收，药物肾清除率、药物体内代谢及率、药物体内代谢及 生物利用度研究，也可用于乙生物利用度研究，也可用于乙酰化代谢快、慢型测定等。酰化代谢快、慢型测定等。尿样浓度与血样浓度相关性差。尿样浓度与血样
26、浓度相关性差。第36页/共69页第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的 基本要求基本要求 一、样品的种类一、样品的种类 (三三)唾液唾液 唾液中的药物浓度通常与血液浓度相关，可用唾液中的药物浓度通常与血液浓度相关，可用唾液中的药物浓度来反应血浆浓度。唾液中的药物浓度来反应血浆浓度。唾液的采集一般是在漱口后唾液的采集一般是在漱口后1515分钟，收集，离心分钟，收集，离心后，取上清液。后，取上清液。第37页/共69页第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的 基本要求基本要求 二、样品的储存二、样品的储存 血浆和血清都必须在采血后即时分离。否则，血浆和血清都必须在采血后即时分离
27、。否则，血凝后冰冻保存，则因冰冻时引起细胞溶解，而阻血凝后冰冻保存，则因冰冻时引起细胞溶解，而阻碍血浆或血清的分出，同时因溶血而影响药物浓度碍血浆或血清的分出，同时因溶血而影响药物浓度变化。变化。尿样宜立即测定，否则应加入防腐剂或低温冷尿样宜立即测定，否则应加入防腐剂或低温冷藏。藏。第38页/共69页第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的 基本要求基本要求 三、生物样品分析前处理技术、生物样品分析前处理技术 微量药物存在于大量生物介质中，若直接微量药物存在于大量生物介质中，若直接进行测定，内源性物质可能干扰，药物浓度进行测定，内源性物质可能干扰，药物浓度太低将会达不到仪器灵敏度要求
28、。因此，生太低将会达不到仪器灵敏度要求。因此，生物样品中的药物必须经过物样品中的药物必须经过分离、纯化与浓集分离、纯化与浓集，必要时还需对待测组分进行化学改性处理，必要时还需对待测组分进行化学改性处理，从而为最后测定创造良好的条件。从而为最后测定创造良好的条件。第39页/共69页第四节第四节 生物样品分析方法生物样品分析方法的的 基本要求基本要求 三、生物样品分析前处理技术三、生物样品分析前处理技术 (一一)蛋白质的去除蛋白质的去除 （二）缀合物的水解（二）缀合物的水解 （三）有机破坏（三）有机破坏 （四）分离、纯化和浓集（四）分离、纯化和浓集 （五）化学衍生化法（五）化学衍生化法 第40页/
29、共69页第四节第四节 生物样品分析方法生物样品分析方法的的 基本要求基本要求(一一)蛋白质的去除蛋白质的去除目的：目的：1 1）使于蛋白质结合的药物释放出来，以便准确地测）使于蛋白质结合的药物释放出来，以便准确地测定药物及其代谢产物的浓度。定药物及其代谢产物的浓度。2 2）减免后续溶剂萃取过程中乳化现象）减免后续溶剂萃取过程中乳化现象3 3）保护仪器性能）保护仪器性能 第41页/共69页第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的 基本要求基本要求(一一)蛋白质的去除方法蛋白质的去除方法1 1）加入与水混溶的有机溶剂）加入与水混溶的有机溶剂 可使蛋白质分子内及分子间的氢键发生变化可使蛋白
30、质分子内及分子间的氢键发生变化而使蛋而使蛋 白质凝聚，进而使与之结合的药物释放出来。白质凝聚，进而使与之结合的药物释放出来。第42页/共69页第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的 基本要求基本要求2 2）加入中性盐）加入中性盐 可使溶液的离子强度发生变化，能使蛋白质脱水后沉淀下来，离心后可获得含有可使溶液的离子强度发生变化，能使蛋白质脱水后沉淀下来，离心后可获得含有药物及其代谢物的上层清液。药物及其代谢物的上层清液。第43页/共69页第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的 基本要求基本要求3 3）加入强酸）加入强酸 使蛋白质分子的阳离子形成不溶性盐而沉淀，条件是使蛋白
31、质分子的阳离子形成不溶性盐而沉淀，条件是pHpH值要值要低低于蛋白质的等电点。于蛋白质的等电点。第44页/共69页第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的 基本要求基本要求4 4）加入含锌盐及铜盐的沉淀剂）加入含锌盐及铜盐的沉淀剂 当当pHpH值值高高于蛋白质的等电点时，蛋白质分子中带负电荷的羧基与金属离子形成不于蛋白质的等电点时，蛋白质分子中带负电荷的羧基与金属离子形成不溶性的盐而沉淀。溶性的盐而沉淀。第45页/共69页第四节第四节 生物样品分析方法生物样品分析方法的的 基本要求基本要求）酶解法）酶解法 最常用蛋白水解酶：最常用蛋白水解酶：枯草菌溶素枯草菌溶素可使蛋白质分解而放出药
32、物。可使蛋白质分解而放出药物。第46页/共69页第四节第四节 生物样品分析方法生物样品分析方法的的 基本要求基本要求(二二)缀合物的水解缀合物的水解 尿中药物多呈缀合状态。一些含尿中药物多呈缀合状态。一些含-OH-OH，-COOH-COOH，-NH-NH3 3，-SH-SH的药物可与内源性物质的药物可与内源性物质葡萄糖酸或硫酸形成葡糖酸苷或硫酸缀合物。葡萄糖酸或硫酸形成葡糖酸苷或硫酸缀合物。1 1）酸水解）酸水解2 2）酶水解）酶水解 第47页/共69页第四节第四节 生物样品分析方法生物样品分析方法的的基本要求基本要求(三三)有机破坏有机破坏 尿中药物多呈缀合状态。一些含尿中药物多呈缀合状态。
33、一些含-OH-OH，-COOH-COOH，-NH-NH3 3，-SH-SH的药物可与内源性物质的药物可与内源性物质葡萄糖酸或硫酸形成葡糖酸苷或硫酸缀合物。葡萄糖酸或硫酸形成葡糖酸苷或硫酸缀合物。1 1）酸水解）酸水解2 2）酶水解）酶水解 第48页/共69页第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的 基本要求基本要求(四四)分离、纯化与浓集分离、纯化与浓集1 1、生物样本的分离与纯化、生物样本的分离与纯化（1 1）液）液-液萃取（液萃取（liquid-liquid extraction,LLEliquid-liquid extraction,LLE）（2 2）液）液-固萃取（固萃取（l
34、iquid-solid,LSEliquid-solid,LSE）第49页/共69页第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的基本要求基本要求（1 1）液）液-液萃取（液萃取（liquid-liquid liquid-liquid extraction,LLEextraction,LLE）亲脂性的药物亲脂性的药物与强极性的与强极性的内源性水溶性内源性水溶性物质，物质，通过有机溶剂可以除去大部分干扰性物质。通过有机溶剂可以除去大部分干扰性物质。注意：注意：1)1)所用溶剂对被测组分溶解度大所用溶剂对被测组分溶解度大,与水不混溶与水不混溶,无无毒毒,化学稳定化学稳定,不易乳化。不易乳化。常用
35、：乙醚，叔丁基甲醚，氯仿，乙酸乙酯等常用：乙醚，叔丁基甲醚，氯仿，乙酸乙酯等2 2）有机相：水相）有机相：水相=1=1：1 1（2 2：1 1）3 3）水相最佳）水相最佳pHpH值的选择与药物的值的选择与药物的pKapKa有关有关第50页/共69页第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的基本要求基本要求(2(2）液）液-固萃取（固萃取（LSELSE）优点优点：1)1)引入杂质少引入杂质少 2 2）无乳化现象）无乳化现象3 3）萃取效率高，样品用量少）萃取效率高，样品用量少4 4）水作溶剂，安全性高）水作溶剂，安全性高5 5）速度快，室温下操作）速度快，室温下操作缺点缺点：成本高，重现
36、性稍差：成本高，重现性稍差分类分类：亲水性，疏水性：亲水性，疏水性第51页/共69页第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的基本要求基本要求(）生物样品在待测组分中的浓集）生物样品在待测组分中的浓集生物样品在萃取过程中，微量待测组生物样品在萃取过程中，微量待测组分往往分布于较大体积的萃取溶剂中，分往往分布于较大体积的萃取溶剂中，不能直接供和测定。不能直接供和测定。第52页/共69页第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的基本要求基本要求(五）化学衍生化法五）化学衍生化法1 1）使样品中的药物转化成具有可被分离的性质）使样品中的药物转化成具有可被分离的性质2 2）提高检测灵敏
37、度）提高检测灵敏度3 3）增强药物的稳定性）增强药物的稳定性4 4）提高对光学异构体的分离能力）提高对光学异构体的分离能力第53页/共69页第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的 基本要求基本要求 三、生物样品分析方法的验证三、生物样品分析方法的验证 (一一)特异性特异性 （二）标准曲线与线性范围（二）标准曲线与线性范围 （三）精密度与准确度（三）精密度与准确度 （四）灵敏度（四）灵敏度 （五）稳定性（五）稳定性 第54页/共69页第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的 基本要求基本要求三、生物样品分析方法的验证三、生物样品分析方法的验证 特异性特异性稳定性稳定性精密度
38、与准确度精密度与准确度标准曲线标准曲线灵敏度灵敏度线性范围线性范围Text第55页/共69页第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的基本要求基本要求 三、生物样品分析方法的验证三、生物样品分析方法的验证 (一一)特异性特异性1 1）空白生物样本色谱图）空白生物样本色谱图2 2）空白样品标样）空白样品标样3 3）服药后生物样本色谱图）服药后生物样本色谱图 第56页/共69页第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的基本要求基本要求 三、生物样品分析方法的验证三、生物样品分析方法的验证 (三三)精密度与准确度精密度与准确度1 1）精密度）精密度日内精密度（日内精密度（intra-
39、day):intra-day):同一天内，多次测量的精密度同一天内，多次测量的精密度日间精密度日间精密度 (inter-day)(inter-day)不同时间内测定结果的变异性不同时间内测定结果的变异性第57页/共69页第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的基本要求基本要求 三、生物样品分析方法的验证三、生物样品分析方法的验证 (三三)精密度与准确度精密度与准确度1 1）准确度）准确度绝对回收率：绝对回收率：%.%.相对回收率相对回收率:又称方法回收率又称方法回收率第58页/共69页第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的基本要求基本要求 三、生物样品分析方法的验证三、生
40、物样品分析方法的验证 (四四)灵敏度灵敏度1 1）检测限）检测限(LOD):S/N=3(LOD):S/N=3时的被测物的浓度时的被测物的浓度.2)2)定量限定量限(LOQ):(LOQ):能满足测定个半衰期时样品中药物浓度或能满足测定个半衰期时样品中药物浓度或maxmax的的1/10-1/201/10-1/20时的药物浓度时的药物浓度第59页/共69页第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的基本要求基本要求 三、生物样品分析方法的验证三、生物样品分析方法的验证 (五五)稳定性稳定性1 1）短期室温条件下的稳定性考察）短期室温条件下的稳定性考察2)2)长期低温条件下的稳定性考察长期低温条
41、件下的稳定性考察3)3)冷冻解冻（冻融）稳定性考察冷冻解冻（冻融）稳定性考察第60页/共69页第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的基本要求基本要求 三、生物样品分析方法的验证三、生物样品分析方法的验证 (六六)质量控制质量控制样品样品（七）测定结果（七）测定结果详细记录实验过程和结果详细记录实验过程和结果第61页/共69页思考题思考题一、简述含金属或含卤素，硫、磷、硒等特殊元素的一、简述含金属或含卤素，硫、磷、硒等特殊元素的药物分析前处理方法有哪些？药物分析前处理方法有哪些？二、简述凯氏定氮法的实验原理二、简述凯氏定氮法的实验原理,操作过程及适用范操作过程及适用范围围?方法中为何
42、要选用硼酸作吸收液方法中为何要选用硼酸作吸收液?硼酸吸收液的硼酸吸收液的浓度是否需要标定浓度是否需要标定?所取体积是否必须准确量取所取体积是否必须准确量取?改改用硫酸或盐酸用吸收液用硫酸或盐酸用吸收液,行吗行吗?三、简述氧瓶燃烧法的实验原理、装置构成及适用范三、简述氧瓶燃烧法的实验原理、装置构成及适用范围？围？四、简述容量分析法的特点及计算公式？四、简述容量分析法的特点及计算公式？五、紫外吸收光谱有什么特征？哪些特征和常数可作五、紫外吸收光谱有什么特征？哪些特征和常数可作为鉴定药物的定性定量指标？为鉴定药物的定性定量指标？第62页/共69页思考题思考题六、简述紫外分光光度法在药品质量标准中的六
43、、简述紫外分光光度法在药品质量标准中的应用。应用。七、简述七、简述HPLCHPLC法中系统适用性试验的意义与内法中系统适用性试验的意义与内容。容。八、八、HPLCHPLC法定量的分析方法哪些？各人何特点法定量的分析方法哪些？各人何特点？九、药物分析方法的选择原则？比较几种定量九、药物分析方法的选择原则？比较几种定量分析方法的特点并指出适用范围。分析方法的特点并指出适用范围。十、简述准确度与精确度的定义以及它们之间十、简述准确度与精确度的定义以及它们之间的关系？的关系？十一、什么叫有效数字？如何正确运用有效数十一、什么叫有效数字？如何正确运用有效数字的运算规则来表示分析结果字的运算规则来表示分析
44、结果？第63页/共69页思考题思考题十二、简述体内药物分析的对象及特点。十二、简述体内药物分析的对象及特点。十三、生物样品分析前处理技术有哪些十三、生物样品分析前处理技术有哪些?简述各自特点。简述各自特点。十四、试比较一般分析方法与体内药物分析方法验证内容有何异同？各有何特十四、试比较一般分析方法与体内药物分析方法验证内容有何异同？各有何特点？点？第64页/共69页习习 题题十五、用重铬酸钾法测得十五、用重铬酸钾法测得FeSO4.7H2OFeSO4.7H2O中铁的含量为：中铁的含量为：20.03%,20.04%,20.05%20.03%,20.04%,20.05%和和20.06%20.06%计
45、计?算算1)1)分析结果的平均值分析结果的平均值?2)?2)平均偏差平均偏差 3)3)相对平均偏差相对平均偏差?4)?4)标准偏差标准偏差5)5)相对标准偏差相对标准偏差 答案答案)1)20.04%(2)0.12%(3)0.06%(4)1)20.04%(2)0.12%(3)0.06%(4)0.016%(5)0.08%)0.016%(5)0.08%)。第65页/共69页习习 题题十六、取维生素十六、取维生素B2 20B2 20片片,精密称得重量为精密称得重量为1.6011g1.6011g，研细，精密称取片粉，研细，精密称取片粉0.1518g0.1518g，置于，置于000ml000ml量瓶中，溶
46、解于量瓶中，溶解于444nm444nm波长处测得吸收度为波长处测得吸收度为0.312,0.312,按按C C1717H H2020N N4 4O O6 6的吸光系数为的吸光系数为323323计算。求维生素的标示百分含量计算。求维生素的标示百分含量（标示量（标示量mg/mg/片）片）(101.9%)(101.9%)。第66页/共69页习习 题题十七、称取维生素十七、称取维生素C 0.0500g,C 0.0500g,溶于溶于100ml100ml的的0.05mol/L0.05mol/L硫酸溶液中，再量取硫酸溶液中，再量取mlml，准确稀释至，准确稀释至100ml,100ml,取此溶液在取此溶液在cmcm石英池中，于石英池中，于4 4nmnm波长处测得吸波长处测得吸收度为收度为0.551,0.551,按吸光系数为按吸光系数为560560计算。求维生素计算。求维生素C C的百分含量的百分含量(98.4%)(98.4%)。第67页/共69页 Thank you!第68页/共69页感谢您的观看！第69页/共69页