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1、1第五章：植物激素的生物测定由于植物体内植物激素含量很少，难以提取，无法大规模在农业生产上应用。随着研究的深入，人们合成(或从微生物中提取)了多种与植物激素有相似生理作用的物质，称为植物生长调节剂(plant growth regulators)。第1页/共39页2第五章：植物激素的生物测定五大类植物激素是：生长素类、赤霉素类（见下图）、细胞分裂素类、脱落酸和乙烯。第2页/共39页3第3页/共39页4第五章：植物激素的生物测定植物激素的测定分析采用薄层层析(thin layer chromatography,TLC)、气相色谱(gas chromatography,GC)、高效液相层析(hig
2、h performance liquid chromatography,HPLC)和质谱分析(mass spectrography,MS)等，其原理大都是基于不同物质在不同介质中有不同的分配系数。第4页/共39页5第五章：植物激素的生物测定免疫分析法被用来定性、定量测定各种植物激素，它是基于动物体对进入其血液的外来物质的免疫性。抗原通常是蛋白质，植物激素如生长素不是抗原，但只要把它们化学结合到蛋白质分子上(如人血清蛋白)，就可转化成抗原分子，当将此抗原注射到兔子中，几十天后便会形成对生长素的专一抗体。第5页/共39页6 第6页/共39页7第五章：植物激素的生物测定生物测定法是通过测定激素作用于
3、植株或离体器官后所产生的生理生化效应的强度，从而推算植物激素含量的方法。第7页/共39页8第五章：植物激素的生物测定植物激素的生物测定法要求有较强的专一性,较高的灵敏性和较短的实验周期,尤其是对粗提物的未知激素的粗筛,常可得到定性定量的相对结果。测定时,对环境条件和植物材料都有较严格的要求。第8页/共39页9一、生长素的生物测定方法 生长素的生物测定技术最早是基于生长素对细胞伸长的促进作用,所用材料为燕麦或小麦胚芽鞘、豌豆茎和番茄下胚轴等。由于生长素也能促进细胞分裂和分化,所以又发展出菊芋块根称重法和绿豆根法。第9页/共39页10一、生长素的生物测定方法 第10页/共39页11一、生长素的生物
4、测定方法 第11页/共39页121 1、燕麦弯曲法燕麦种子在黑暗中萌发,当根达到2mm时,将幼苗固定在支柱上,使其在水培条件下生长。选择直的幼苗切去胚芽鞘顶端,将切下的胚芽鞘尖放在琼脂薄片上,使其中的生长素扩散到琼脂中。24h 后移开鞘尖,将琼脂切成1mm3的小块。约3h后将切去尖端的胚芽鞘（内有第一片叶)再切去4mm尖端(这是因为切去后还会产生新的顶端),用镊子轻轻地将第一片叶向上提一下。将含有生长素的琼脂块轻放在去尖胚芽鞘的一侧靠近叶片的部位。经过一段时间(90-110min)进行投影(shadowgraph),测量弯曲角度。在一定浓度范围内，弯曲度与生长素浓度成直线关系。第12页/共39
5、页132 2、小麦胚芽鞘伸长法 生长素具有促进细胞伸长的作用,将小麦胚芽鞘伸长部分切成段,漂浮在溶液麦面上,一定时间后观察切段的伸长。此法具有较高的灵敏度,操作简便,实验数值偏差小，且与人工合成生长素也能起反应,所以特别适用于伸长生长的机理研究。第13页/共39页142 2、小麦胚芽鞘伸长法 第14页/共39页153 3、绿豆生根法 o绿豆生根试验法是基于插条不定根生长的数量与生长素浓度间的关系而设计的。在一定的生长素范围内，不定根数量与生长素浓度成正比。o用标准生长素溶液作对照，就可测出某一类生长素物质的效价或某一提取液中内源生长素的浓度。o此法效果灵敏、操作简便。第15页/共39页163
6、3、绿豆生根法第16页/共39页17二、赤霉素的生物测定方法 o赤霉素的生理效应o促进器官的伸长，打破休眼，促进发芽、开花，对矮生型作物伸长生长，赤霉素效果尤其明显第17页/共39页18二、赤霉素的生物测定方法 第18页/共39页191 1、水稻幼苗叶鞘伸长“点滴”法 o此法的原理是赤霉素可促进幼嫩植物节间伸长，在一定的浓度范围内（，叶鞘的伸长与赤霉素浓度成正比。第19页/共39页201 1、水稻幼苗叶鞘伸长“点滴”法 第20页/共39页212 2、大麦胚乳法 o大麦种子吸水萌动后，胚中产生的赤霉素将胚乳最外的糊粉层中的-淀粉酶激活。无胚的大麦半粒种子不能产生赤霉，因此没有-淀粉酶活性。它被成
7、功地应用于赤霉素类物质的测定。第21页/共39页222 2、大麦胚乳法 第22页/共39页233 3、矮生玉米叶鞘法 o以赤霉素浓度的对数为横坐标,叶鞘长度的对数为纵坐标。第23页/共39页24三、细胞分裂素的生物测定法 o细胞分裂素(cytokinins)是植物体内普遍存在的一类激素，其生理作用主要是促进细胞分裂和扩大，延迟叶片衰老。o细胞分裂素生物测定依据：oA：细胞分裂，细胞数目增加或组织增重；oB：细胞扩大，即体积的增加；oC：延迟叶片衰老，即叶绿素的降解延缓；oD：诱导素的合成，即苋红素的合成。第24页/共39页251 1、萝卜子叶增重法 o细胞分裂素有促进萝卜子叶增大的效应，其主要
8、原因是促进了细胞的分裂和扩大。在一定浓度范围内（激动素为2-25mg/L），子叶增重与浓度呈线性关系。第25页/共39页261 1、萝卜子叶增重法 第26页/共39页272 2、苋红素合成法 o原理：尾穗苋（Amaranthus caudatus）在光照下由幼苗合成一种红色色素-苋红素（Amaranthin或Betacyanin）。在暗中发芽的尾穗苋子叶不能合成苋红素，子叶呈白色。但如供给细胞分裂素和酪氨酸，暗中萌发的尾穗苋子叶就能合成苋红素。在激动素浓度为范围内，色素的量与激动素浓度增加成比例。第27页/共39页282 2、苋红素合成法 第28页/共39页292 2、苋红素合成法 o注意：o
9、1、尾穗苋黄化苗对光十分敏感，整个试验需在暗室内进行。o2、尾穗苋种子有较长的休眠期，新收获的种子不能发芽。可放在冰箱中经2-3个的低温处理后发芽使用。第29页/共39页303 3、组织培养鉴定法 o经典方法之一。o大豆愈伤组织、烟草茎的髓部、胡萝卜根韧皮部等都对细胞分裂素有较高敏感性。o此法专一性强，缺点是需时较长。第30页/共39页313 3、组织培养鉴定法 第31页/共39页324 4、小麦叶片保绿法 o离体叶片在黑暗中有自然衰老的趋势，叶片变黄，用激动素溶液处理离体叶片，则能延缓衰老，叶绿素的分解比对照慢。因此，以叶绿素为指标，可鉴定出激动素的浓度。o除小麦外，苍耳、大麦、萝卜、烟草等
10、叶片都可供鉴定使用，最好是用快要衰老的或已成熟的叶片，一般是剪去后放在黑暗中使其进一步衰老后才可使用。第32页/共39页33四、脱落酸的生物测定 o1、小麦胚芽伸长法o与生长素的测定方法完全相同，只是脱落酸的作用是抑制小麦胚芽鞘的伸长。与对照相比，脱落酸处理组的小麦胚芽鞘伸长少，脱落酸浓度愈高，胚芽鞘的伸长愈少。第33页/共39页342 2、棉花外植体脱落法 o脱落酸能诱导离区细胞中纤维素酶和果胶酶的生物合成，从而促进植物离层的形成，导致器官脱落。叶柄对外源脱落酸很敏感，在一定的浓度范围内，脱落率与浓度成正比，脱落时间与脱落酸浓度成反比。第34页/共39页352、棉花外植体脱落法、棉花外植体脱
11、落法 第35页/共39页36五、乙烯的生物测定法 o乙烯是一种气体植物激素。o乙烯可抑制黄化豌豆幼苗下胚轴的伸长；使下胚轴细胞横向扩大，下胚轴短粗；偏向上生长，从而使下胚轴横向生长。o黄化幼苗对乙烯的这三种反应被称为“三重反应”第36页/共39页37六、油菜素内酯的生物测定法的生物测定法 o油菜素内酯（芸苔素内酯，云大120）是一种较新的内源植物生长促进剂，属甾醇类植物激素。o水稻叶片倾角法是目前最灵敏、最专一的一种测定方法。o其原理是油菜素内酯能增加水稻叶片与叶鞘之间的夹角，在一定浓度范围内两者呈线性关系。第37页/共39页38本章重点 o生长素的生测方法有哪些;o赤霉素的生测方法有哪些;o细胞分裂素的生测方法有哪些.第38页/共39页39感谢您的观看！第39页/共39页