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1、专题12选修一【2021年6月】17下列关千原生质体和细胞计数的叙述，错误的是()A测定植物原生质体的密度时，可用血细胞计数板B红墨水不能进入活细胞，可用千检测细胞的存活状态并计数C涂布分离法和划线分离法均能得到单菌落，都可用于细胞计数D酵母菌在液体培养基中培养一段时间后，可用比浊计测定其密度【答案】C【解析】划线分离法不能用千计数（一）回答与甘庶醋制作有关的问题：(1)为了获得酿造甘庶醋的高产菌株，以自然发酵的甘庶渣为材料进行筛选。首先配制酣酸菌选择培养基：将适昼的葡萄糖、KH2P04、MgS04溶解并定容，调节pH,再高压蒸汽灭菌，经后加入3体积的无水乙醇。然后将lOg自然发酵的甘庶渣加入
2、选择培养基，震荡培养24比用将少蜇上述培养液涂布到含CaC03的分离培养基上，在30C培养48h。再挑取分离培养基上具有的单菌落若干，分别接种到与分离培养基成分相同的培养基上培养24h后，置千4C冰箱中保存。(2)优良产酸菌种筛选。将冰箱保存的菌种分别接入选择培养基，培养一段时间后，取合适接种械的菌液在30C、150r/min条件下很荡培养。持续培养至培养液中醋酸浓度不再上升，或者培养液中含量达到最低时，发酵结束。筛选得到的优良菌种除了产酸量高外，还应有（答出2点即可）等特点。(3)制醋过程中，可将甘庶渣制作成固定化介质，经后用千发酵。其固定化分法为【答案】（一）（l)冷却玻璃刮刀较大透明圈斜
3、面(2)乙醇耐酒粘度高、耐酸高(3)灭菌吸附法【2021年1月】10用白萝卜制作泡菜的过程中，采用适当方法可缩短腌制时间。下列方法中错误的是（)A.将白萝卜切成小块B.向容器中通入无菌空气C.添加已经腌制过的泡菜汁D.用沸水短时处理白萝卜块【答案】B【分析】l、泡菜腌制过程巾起作用的主要是假丝酵母和乳酸闭，在无氧条件下乳酸菌无氧呼吸产生乳酸。2、泡菜的制作流程是：选择和处理原料、洗净泡菜坛、调味装坛、密封发酵。【详解】A、将白萝卜切成小块可以扩大白萝卜与腌料的接触面积，缩短腌制时间，A正确；B、泡菜制作所衙菌种为乳酸菌，制作过程中应保持无氧环境，向容器中通入无齿空气不利千腌制，B错误；C、泡菜
4、汁中含有一定亚的发酵苟种，所以在腌制过程中，加入一些已经腌制过泡菜汁可缩短腌制时间，C正确D、用沸水短时处押，可抑制朵此微牛物的繁姐，提高泡菜品质，也可缩短腌制时间，D正确。故选B。（一）某环保公司从淤泥中分离到一种高效降解富营养化污水污染物的细菌菌株，制备了固定化菌株。(I)从淤泥中分离细菌时常用划线分离法或法，两种方法均能在固体培养基上形成。对分离的萄株进行诱变、和鉴定，从而获得能高效降解富营养化污水污染物的菌株。该菌株只能在添加了特定成分X的培养基上繁殖。(2)固定化菌株的制备流程如下；O将菌株与该公司研制的特定介质结合；用蒸熘水去除;检验固定化菌株的。菌株与特定介质的结合不宜直接采用交
5、联法和共价偶联法，可以采用的2种方法是。(3)对外，只提供固定化菌株有利千保护该公司的知识产权，推侧其原因是。【答案】涂布分离单菌落筛选未固定的细菌降解宫营养化污水污染物的能力包埋法和吸附法特定介质能为稍株繁姐提供X【分析】l、分离纯化细菌最常用的方法是划线分离法（平板划线法）和涂布分离法（稀释涂布平板法）。接种的目的是使聚块在一起的微生物分散成单个细胞，并在培养基表面形成单个细菌繁殖而成的子细胞群休曲洛。划线分离法，方法简单；涂布分离法，单曲洛更易分开，但操作复杂些。2、固定化酶(insolubleenzyme)就是将水溶性的荫用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为不溶千水而又有酶活性
6、的制剂。固定化的方法有吸附法、共价偶联法、交联法和包埋法等。3、梢物组织培养的原理是梢物细胞具有全能性，其具体过程：外梢体一愈伤组织一肘状体一新植体，其中脱分化过程要避光，而冉分化过程需光。4、在梢物组织培养时，通过调节生长素和细胞分裂素的比值能影响愈伤组织分化出根或芽。（一）分析题意可知，本实验日的是从淤泥中分离到一种高效降解宫营养化污水污染物的细菌菌株，制备固定化菌株。(l)分离纯化细齿最常用的方法是划线分离法或涂布分离法，两种方法均能在固体焙养基上形成单菌落。为了获得能的效降解畜营养化污水污染物的菌株，还需对分离的菌株进行诱变处押，再经筛选和鉴定。(2)固定化的方法有吸附法、共价偶联法、
7、父联法和包埋法等。由千菌株与特定介质的结合不宜自接采用交联法和共价偶联法，故可以采用的2种方法是包埋法和吸附法。(3)由千该由株只能在添加了特定成分X的培养某上繁殖，可推铡特定介质能为菌株繁殖提供X,故该公司对外只提供固定化菌株，有利十保护该公司的知识产权。【2020年7月】L9.下列关于微生物培养及利用的叙述，错误的是()A.利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物，而保留利用尿素的微生物B.配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pHC.酵母菌不能直接利用糯米淀粉发酵得到糯米酒D.适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌活化【答案】A【分析】l、微生物培养的关键是防l曰杂菌污染；培养基制作亢成后需要进
8、行灭菌处理，培养基通常UI以进行高压蒸汽灭菌；2、接种方法主要有平板划线法和稀释涂布平板法。【详解】A、利用尿素固体培养基，由于不能利用尿素做氮源的微生物不能生长繁殖，血保留利用尿素的微生物，并非杀死，A错误；B、不同的微生物所需的pH不同，所以配笠培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pH,B正确；C、酵母伯不能直接利用淀粉，应用酒曲中的根霉和米曲霉等微生物把淀粉糖化，再用酵母菌发酵得到糯米酒，C正确；D、醋化醋杆菌在有氧条件下利用洒精产生醋酸，D正确。故选A。（一）回答与村橘加工与再利用有关的问题：(I)杻橘果实经挤压获得果汁后，需用果胶酌处理，主要目的是提高果汁的。为确定果胶酶的处理效果
9、，对分别加入不同浓度果胶酶的果汁样品，可采用3种方法进行实验：取各处理样品，添加相同体积的，沉淀生成立较少的处理效果好。对不同处理进行离心，用比色计对上清液进行测定，OD值的处理效果好。对不同处理进行，记录相同体积果汁通过的时间，时间较短的处理效果好。(2)加工后的村橘残渣含有抑菌作用的香精油及较多的果胶等。为筛选生长不被香精油抑制且能高效利用果胶的细菌，从腐烂残渣中分离得到若干菌株，分别用无菌水配制成，再均匀涂布在LB固体培养基上。配制适宜浓度的香精油，浸润大小适宜并已的圆形滤纸片若干，再贴在上述培养基上。培养一段时间后，测量滤纸片周围抑制菌体生长形成的透明圈的直径大小。从直径的菌株中取菌接
10、种到含有适簸果胶的液体培养基试管中培养，若有果胶酶产生，摇晃试管并观察，与接种前相比，液体培养基的下降。答案】澄清度95乙醇较小抽滤细菌悬液灭菌较小粘性【详解】（一）（1)由千梢物细胞壁和梢物细胞制果胶的存在时，果汁的澄消度受到一定的影响，囚此可以加入果胶酌使果胶降解为可溶性的半乳糖醒酸，提高果汁的澄清度。判断果胶酶的处理效果，可采用三种力法，O看果胶的剩余釐，果胶不溶丁乙醇，加入95的乙醇，沉淀址少的即果胶的剩余址少，处理效果好，进行离心处理，取上消液侧OD值，OD值越小，说明降觥越充分，朱胶酶的处理效朱越好，对不同处理进行抽滤，记录相同体积果汁的通过时间，固形物含榄越少，时间越短，处理效果
11、越好。(2)为筛选不被香精汕抑制且能高效利用果胶的细陌，袖从腐烂残渣中分离荫株，用无菌水配制成细菌悬液，再涂布在LB固体培养基上待筛选。由于日标是筛选不被香精油抑制的细菌，因此还需准备香精油，并将其制作成滤纸片贴在培养基上，香精油需灭菌处理。观察滤纸片周围的抑菌圆，直径越小说明该菌株越不易被香精油抑制，因而成为初步待选的菌株。再进一步接种到含果胶的液体培养拈中培养，果胶使植物细胞粘连，若果胶被降解，则液体培养基的粘性下降。【2020年1月】11.下列关千淀粉酶的叙述，错误的是A.植物、动物和微生物能产生淀粉酶B.固相淀粉酶比水溶液中的淀粉酶稳定性更高C.枯草杆菌Q 淀粉酶的最适温度比唾液淀粉酶
12、的高D.淀粉被淀粉酶水解形成的糊精遇磺磺化钾溶液不显色【答案】D【分析】l酶(1)作用酶是牛物体内各种化学反应的催化剂。(2)特点它有高度的专一性和高效性、酶的作用受多种因素的影响。2固定化酌概念：将水溶性的酶用物理或化学的力法固定在某种介原上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。【详解】A、淀粉酶可以分解淀粉，柏物、动物和微生物都能产生淀粉酶，A正确；B、固相淀粉酶不溶千水，比水溶液中的淀粉酶稳定性更高，用以反复利用，B正确；C、枯节杆菌a 淀粉酶的最适温度为5075C，比唾液淀粉酌的高，C正确；D、淀粉水解时一般先牛成糊精（遇燠显红色），再牛成麦芽糖（遇磺不显色），最终牛成葡萄糖，D错误。
13、故选D。（一）回答与泡菜制作有关的问题：(1)用萝卜等根菜类蔬菜制作泡菜，用热水短时处理，可抑制某些微生物产生，从而使成品泡菜口感较脆。同时，该处理也会使泡菜发酵时间缩短，其原因是。(2)泡菜发酵初期，由千泡菜罐加盖并水封，会使菌被逐渐抑制。发酵中期，乳酸菌大谥繁殖，会使菌受到抑制。发酵后期，乳酸生产过多，会使乳酸菌受到抑制。(3)从泡菜汁中可分离制作酸奶的乳酸菌，首先对经多次发酵的泡菜汁进行过滤，然后取滤液进行，再用的方法在某种含牛乳的专用的培养基中进行初步筛选。该培养基必须含有，以便千观察是否产酸。(4)自然界中醋杆菌常与乳酸菌共同生长。若要筛选出醋杆菌，则其专用的培养基中应添加【答案】果
14、胶酌细胞破裂，细胞内营养物质外流使乳酸菌快速地获得营养物质喜好氧的不耐酸的稀释涂布分离酸碱指示剂乙醇【分析】泡菜制作：O菌种：假丝酵母和乳酸菌；发酵原理：在无氧条件下，微生物利用莱中的糖和其他营养物质进行发酵，发酵产物有有机酸和醇类物质等，还有亚硝酸。亚硝酸盐的测定：亚砃酸盐可与对氨基苯磺酸发生矿氮化反应，这一产物再与N-1荼基乙勹按偶联，形成紫红色产物，可用光电比色法定址。【详解】（一）(1)用萝卜等根菜类祛菜制作泡菜时，为抑制某些微生物产生果胶酶，从而使成品泡菜LI感较脆，可用热水短时处理。同时，该处理也会仗细胞砐裂，细胞内岱养物质外流使乳酸菌快速地获得菩养物质，从而使泡菜发酵时间缩短。(
15、2)泡菜发酵初期，由于泡菜罐加盖并水封，形成无氧环境，会使喜好氧的曲被逐渐抑制。发酵中期，乳酸菌人扯繁殖，产生乳酸，会使不耐酸的菌受到抑制。发酵后期，乳酸生产过多，又会抑制乳酸菌。(3)从泡菜汁中可分离制作酸奶的乳酸菌，首先对经多次发酵的泡菜汁进行过滤，然后取滤液进行稀释，再用涂布分离的方法在某种含牛乳的专用的培养基中进行初步筛选。为了便千观察是合产酸，该培养基必须含有酸碱指示剂。(4)自然界中船杆菌常与乳酸困共同生长。由千醋酸杆菌可以利用乙醇产生醋酸，若要筛选出醋杆曲，则其专用的培养基中应添加乙醇。【2019年4月】（一）回答与果胶和果胶酶有关的问题：(1)通常从腐烂的水果上分离产果胶酶的微
16、生物，其原因除水果中果胶含世较高外，还因为(2)为了获得高产果胶酶微生物的单菌落，通常对分离或诱变后的微生物悬液进行。(3)在某种果汁生产中，用果胶酶处理显茗增加了产量，其主要原因是果胶酶水解果胶使。果汁生产中的残渣果皮等用千果胶生产，通常将其提取液浓缩后再加入。使之形成絮状物，然后通过离心、真空干燥等步骤获得果胶制品。(4)常用固定化果胶酶处理含果胶的污水，其主要优点有和可连续处理等。在建立和优化固定化果胶酶处理工艺时，除考虑果胶酶的活性和用量、酶反应的温度、pH、作用时间等环境因素外，还需考虑的主要有和。【答案】腐烂的水果中含产果胶酶的微生物较多涂布分离（或划线分离）软化疏松及细胞受损95
17、乙醇提高果胶酶的稳定性固定化的方法所用的介质【详解】（一）(1)腐烂的水果通常细胞壁被分解较多，所以含有能产生果胶酶的微生物较多；(2)获取单菌治的方式有划线分离法和涂布分离法两种，本题中两种方式均可；水果组织固定化(3)果胶酶的作用是水解果胶，果胶位千梢物细胞壁中，故水解杲胶会使得水果组织软化疏松及使细胞受损；果胶不溶千酒精，故提取回收果胶需要使用95乙醇，使果胶形成絮状物回收；(4)固定化的果胶酶在处理含果胶的污水时，可提高果胶酶的稳定性并可连续处理；在建立和优化固定化果胶酶处押工艺时，除考虑果胶酶的活性和用蜇、酶反应的温度、pH、作用时间等环境因素外，还需考虑的因素有固定化的方法和固定化
18、所用的介质。【2018年11月】（一）回答与微生物培养及应用有关的问题：(1)对培养基进行高压蒸汽灭菌时，灭菌时间应从时开始计时。对千不耐热的液体培养基，一般可将其转人G6玻璃砂漏斗中，采用方式可较快地进行过滤灭菌。(2)酿造果酣相比，利用大米、高粱等富含淀粉的原料制醋，需增加的过程。某醋化醋杆菌培养基由蛋白陈、酵母提取物和甘露醇组成，其中甘露醇的主要作用是(3)为筛选胞外A淀粉酶分泌型菌种，一般从(A果园树下B肉类加工厂周围C米酒厂周围D枯树周围）获得土样，用无菌水稀释，涂布到含有淀粉的选择培养基上培养，一段时间后在培养基表面滴加磺液，可在菌落周围观察到透明的水解圈。若要筛选酶活性较高的菌种
19、，需挑选若干个比值大的菌落，分别利用液体培养基振荡培养进行扩增。然后将培养液离心，取用千检测酶活性。（二）某农业生态工程示意图如下，回答下列问题；五厂甘庶桑基蚕鱼庶基塘泥I鱼塘（）该农业生态工程体现的生态工程原理主要是。对该工程的经济效益分析，可从系统内部的投入和产出、系统的有效贡献等三方面进行核算。(2)若要提高该工程的经济效益，可采用农业生产的技术在桑基上再种植大豆，也可采用农业生态工程的技术放养适堂的鸡鸭等动物以调整该工程的产业结构。(3)某小组应用基因工程方法开展适用千该生态工程的抗虫植物改良研究。为提高将重组DNA分子导入受体细胞的效率，除考虑导入方法、筛选条件、防止污染外，还需考虑
20、的主要因素有（答出2点即可）。农杆菌介导法是目前植物转基因的常用方法，该方法的基本过程是农杆菌感染植物时，并将其插入到受体细胞的基因组中。欲获得稳定遗传的抗虫性强的转基因植物品种，则转入的抗虫基因必须能在受体细胞中【答案】达到设定的温度或压力值抽滤将淀粉分解成糖作为碳源C 水解圈直径与菌落直径上清液分析】酶晦l、酿造果醋的原理：C6H1206,C2比OH+C02,C2比OH+02,_.CH3COOH+H2 0。_ 一一呻【详解】(-)(I)对培养基进行高压蒸汽灭菌时，灭曲时间应从达到设定的温度或压力俏时开始计时。对千不耐热的液体培养基，一般可将其轧入G6玻璃砂漏斗中，采用抽滤方式司较快地进行过
21、滤灭菌，例如尿素。(2)大米、仙粱等原料中富含淀粉，酣化酣杆菌无法且接利用淀粉，应先将淀粉分解为糖。某醋化醋杆菌铭养基山蛋白陈、酵母提取物和甘露醇组成，其中蛋白陈为微生物提供氮源，酵母提取物和甘露酐为微生物提供碳源。(3)以淀粉原料生产洒时，淀粉衙在淀粉酶的催化作用下水解为可以进行发酵的糖。因此，可从米酒厂周围获得土样，筛选胞外a淀粉酌分泌型菌种。淀粉遇磺液变蓝，淀粉在a淀粉酶的催化什用卜水韶牛成糊精，糊精滴加慎液，不会变蓝。在培养基表面滴加镇液，由千菌种产生胞外a淀粉酶水解淀粉形成透明圈，透明图越大，说明a淀粉荫的活性越高。囚此，挑选透明水解图盲径与闭落直径比值大的菌落来筛选酶活性较高的荫种
22、。然后利用液体培养某振荡坢养进行扩增，再对培养液进行离心取上清液得到淀粉酶提取液，用千检侧酶活性。【2018年4月】（一）回答与果胶、淀粉等提取和利用有关的问题：某植物富含果胶、淀粉、蛋白质和纤维素成分。某小组开展了该植物综合利用的研究。(I)果胶提取工艺研究结果表明，原料先经过一段时间沸水漂洗的果胶得率（提取得到的果胶占原料质芷的百分率）显著高于常温水漂洗的果胶得率，最主要原因是沸水漂洗(A.有助千清洗杂质和去除可溶性糖B.使植物组织变得松散C.使有关酶失活D.有利细胞破裂和原料粉碎制浆）。(2)在淀粉分离生产工艺研究中，为促进淀粉絮凝沉降，添加生物絮凝剂（乳酸菌菌液），其荀株起重要作用。为
23、了消除絮凝剂中的杂菌，通常将生产上使用的菌液，采用，进行单菌落分离，然后将其，并进行特性鉴定，筛选得到纯的菌株。(3)在用以上提取过果胶和淀粉后的剩渣加工饮料工艺研究中，将剩渣制成的汁液经蛋白酶和纤维素酶彻底酶解处理后，发现仍存在浑浊和沉淀问题，可添加使果胶彻底分解成半乳糖醒酸，再添加，以解决汁液浑浊和沉淀问题。(4)在建立和优化固定化酶反应器连续生产工艺研究中，通常要分析汁液中各种成分的浓度和所用酶的活性，然后主要优化各固定化酌反应器中的（答出2点即可）、反应液pH和酶反应时间等因素。其中，酶反应时间可通过来调节。【答案】C划线分离法（或涂布分离法）扩大培养果胶酌和果胶甲酣酶淀粉酶使淀粉分解
24、固定化酌的银、反应液温度控制反应器液休流拱（或体积）稻的基因型、愈伤组织继代的次数【解析】试题分析：熟记并理解酌的研究与应用、微生物的实验室培养与分离、基因1程的基本操作程序、柏物组织坊养技术等相关基础知识，形成清晰的知识网络。在此基础上，从题惹中提取有效信息并对相关的问题情境进行作答。(-)（l)沸水漂洗，因高温会破坏蛋白队的宁间结构，进而使有关酶失活，C正确，A、C、D均错误。(2)为了消除絮凝剂中的杂菌，通常将生产上使用的稍液，采用划线分离法（或涂布分离法）进行单曲落分离，然后将其扩大培养，并进行特性鉴定，筛选得到纯的曲株。(3)蛋白酶和纤维索酶司分别催化蛋白质和纤维素分解。在将以上提取
25、过束胶和淀粉后的剩渣制成的汁液，经蛋白酶和纤维素酶彻底酌解处理后，仍存在浑浊和沉淀问题，说明该汁液中仍有少址的果胶和淀粉，可添加果胶酶和果胶甲能酌使果胶彻底分解成半乳糖轻酸，再添加淀粉酶使淀粉分解，以解决汁液浑浊和沉淀问题。(4)在建立和优化固定化酌反应器连续生产工艺研究中，通常要分析汁液中各种成分的浓度和所用酶的活性，然后主要优化各固定化酶反应器中的固定化酶的篮、反应液温度、反应液pH和酶反应时间等因素。其中，酶反应时间可通过控制反应器液体流最（或体积）来调节。【2017年11月】回答与酿酒和制醋有关的问题：(1)为了获得优良的酿酒红曲霉菌株，将原菌株的抱子诱变处理后制成较稀浓度的单抱子悬液
26、，这样做的目的是在培养时有利千获得(2)大米经蒸煮、红曲霉菌糖化后，用某酿酒酵母进行酒精发酵，发酵完毕后得到新鲜红曲酒，酒中乙醇浓度不超过15%。其主要原因是当发酵液中的乙醇浓度接近15%时，（A.乙醇氧化逐渐增强直至平衡B葡萄糖分解逐渐增强直至平衡C.乙醇氧化逐渐减弱直至停止D.葡萄糖分解逐渐减弱直至停止）。(3)已知葡萄糖与蔥酮试剂反应能产生颜色，采用光电比色法测定红曲酒中的葡萄糖含岱的步骤如下第一步，标准曲线的制作。用蒸熘水配留，与蔥酮试剂反应后，用比色计测定，并制作以的标准曲线。第二步，样品处理。将待测酒样品通过活性炭脱色，其目的是。第三步，样品测定与计算。(4)影响红曲酒风味的主要因
27、素，除了温度、pH、氧气等环境因素外，还有（答出2点即可）。(5)在红曲醋生产工艺中，将适量的红曲洒、水、醋化醋杆菌等混合。再添加一定量谷壳棣等制成松散的发酵料，其目的是，以利于醋酸发酵。【答案】单菌治D 一系列浓度的葡萄糖标准溶液葡萄糖浓度与光密度值的关系排除洒原有颜色的干扰【分析】解答本题需要学生学握果酒、果船的制作原理及植物克隆的过程。酵母话是异养兼性厌氧微生物，在有氧气存在时，其进行有氧呼吸，大赞繁殖，在无氧气存在时，其进行发酵，产物是酒精与二氧化碳；醋酸面是一种异养需氧型微生物，在当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时和有氧条件下，可将乙醇（酒精）氧化成醋
28、酸。植物克隆就是植物组织培养的过程，是一种尤性繁殖方式，即个需婓经过受精过程，直接由母体的一部分直接形成新个体的繁姐方式【详解】回答与酿酒和制醋有关的问题：(I)为了获得优良的酿酒纠曲需菌株，将原菌株的抱子诱变处理后制成较稀浓度的单抱子悬液，这样做的H的是在培养时有利千获得单前落。(2)在利用酵母菌进行酿酒过程中，乙醇浓度会越来越大，当发酵液中的乙醇浓度接近l5%时，会对酵母菌的繁殖起抑制作用，甚至杀忱酵母菌，这样会导致葡萄糖分解逐渐减弱自车停止。故选：D。(3)用光电比色法测定红曲酒中的葡苟糖含址时，需要有标准的颜色作对比，因此用蒸馈水配悝一系列浓度的葡萄糖标准溶液，与蔥酮试剂反应后，用比色
29、计测定，并制什以葡萄糖浓度与光密度值的关系的标准曲线。待测洒品有颜色会干扰实验结果，为排除洒原有颜色的干扰，将待剌酒样品通过活性炭脱色。(4)在制作红曲酒过程中，温度、pH、氧气等环境因素均会影响酵母菌的繁殖，进而影响红曲酒风味，除此之外，不同的困株、不同的原料也会影响红曲酒风味。(5)制作红曲醋的微生物是醋酸菌，其是一种好氧荫，将适噩的红曲酒、水、醋化醋杆菌等混合。再添加一定扯谷先粮等制成松散的发酵料，其目的是增加通气性，以利千酌酸发酵。【2017年4月】（一）回答与泡菜腌制和亚硝酸盐测定有关的问题：(1)制作泡菜时，为缩短发酵周期，腌制前可加入乳酸菌。取少量酸奶，用无菌蒸熘水稀释后，再用醮
30、取少楹的稀释液，在MRS乳酸菌专用培养基的平板上划线，以获得乳酸菌单齿落。下图所示的划线分离操作，正确的是。A.B.C.D.(2)泡菜腌制过程中，会产生有机酸、醇类和亚硝酸盐，其中醇类是由进行厌氧呼吸产生。亚硝酸盐对人体有害，为测定泡菜中亚硝酸盐含量，从泡菜中提取要硝酸盐，与发生重氮化反应，再与N-1荼基乙二胺偶联，形成紫红色产物。然后用光程为1cm的，在550nm光波下测定光密度值，与由一直浓度梯度亚硝酸钠制作的比对，计算样品中亚硝酸盐的含谥。(3)已知乳酸菌中的亚硝酸还原酶能降解亚硝酸盐。在一定的腌制时间内，随看腌制时间的延长，泡菜中亚硝酸盐含量逐渐降低，是由千在厌氧和环境下亚硝酸盐被亚硝
31、酸还原酶降解。【答案】接种环B 假丝酵母对氨基苯磺酸比色杯标准曲线酸性【详解】（一）（I)制作泡菜时，为缩短发酵周期，腌制前可加入乳酸菌，用无菌蒸熘水稀释后，再用接种环酌取少品的稀释液，在MRS乳酸菌专用培养基的平板上划线，以获得乳酸苗单曲治。平板划线的过程为：烧灼接种环，杀灭环上残留菌液，待冷却（是否冷却，可先在培养基边缘处试触，若琼脂溶化，表示未凉，稍等再试），从第一区域划线的未端开始往第二区内划线，重复以上操作，在第二四万区内划线，注意不要将最后一区的划线与第一区相连，因此B止确。(2)醇类主要是乙醇，山酵母菌进行无氧呼吸产生。在盐酸酸化的条件下，业硝酸盐与对氨基苯磺酸发生里氮化反应后，
32、与N-1蔡基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰纠色染抖，然后用光程为1cm的比色环，在550nn1光波下渊定光密度值，与已知浓度的亚硝酸钠制作的标准曲线比对，计符样品中业硝酸盐的含噩。(3)泡菜中亚硝酸盐含蜇逐渐降低，是由千在厌氧和酸性环境卜亚硝酸盐衱亚硝酸还原酶降解所导致的。【2016年0月】（一）请回答从土壤中分离产脤酶细茵和脤酶固定化实验的有关问题(1)LB固体培养基：取适掀的蛋白脉、酵母提取物、NaCl,加入一定黛的蒸馈水溶解，再加，灭菌备用。(2)尿素固体培养基：先将适宜浓度的尿素溶液用灭菌过的G6玻璃砂涌斗过滤，因为G6玻璃砂漏斗，故用千过滤细菌。然后将尿素溶液加入到已经灭菌的含有酚红的培养
33、基中，备用。(3)取适量含产脉酶细菌的10-4、I胪两种土壤稀释液，分别涂布接种到LB固体培养基和尿素固体培养基上，培养48h,推测固体培养基上生长的菌落数最少的是(A.105 稀释液尿素固体培养基8.l胪稀释液LB固体培养基C.10-4稀释液尿素固体培养基D.l胪稀释液LB固体培养基）。在尿素固体培养基上产脉酶细菌菌落周围出现,其原因是细菌产生的脉酶催化尿素分解产生所致。(4)制备固定化脉酶时，用石英砂吸附腮酶，装柱。再用蒸熘水洗涤固定化酶柱，其作用曰定【答案】纤维素酶和果胶酶降低心形胚细胞分裂素D 原生质体融合PCR（分析】本题主要考查培养基、酌固定化、等相关知识，要求考生熟记和掌握相关知
34、识点的要点，能够在试题所给予的相对简单的情境中识别和使用它们。【详解】（一）(I)固休培养某常用琼脂作为凝固剂，LB固休培养基加入一定的蒸熘水后再加琼脂。(2)对溶液、培养基等灭陌，常用的方法是高压蒸汽灭荀；用G6玻璃漏斗，囚为G6玻璃砂漏斗孔径比细菌小，达到过淀除由的目的。(3)产生脤酶细闭酌落数目多，斋稀释倍数较少，目使用含有尿素溶液的培养基，故选A;山丁脤酶能催化尿素产生NH3,NH3易溶丁水形成具有碱性的氨水，培养基中含酚红，使焙养基变成红色环。(4)在固定化酶过程中，有部分酶没有被固定在固相载体上，所以冲洗的目的是除去没有被固定的游离脤酶。（二）(I)制备烟草原生质体时需婓除去细胞壁
35、，植物细胞壁由纤维素和果胶组成，因此可以用纤维素酌和果胶酌除去植物细胞壁；(2)原生质体的培养：将原生质体进行培养，玺新长出细胞壁，形成胚性细胞的过程中，应该降低培养基中甘森醉浓度，以利用胚性细胞继续培养形成细胞团。胚性细胞继续培养形成细胞团，然后经两条途径形成再生植株，途径一：细胞团经球形胚、心形胚和胚状体，最后发台成植株。途径二：细胞团增殖为愈伤组织，然后在发芽培养基上诱导出芽，切割芽经过牛根后形成完整柏株。其过程中愈伤组织诱导产牛芽的培养基中需要的细胞分裂索的比例较高，胚性细胞的主娑特点是液泡小，细胞核大。(3)为了对烟草的某些性状进行改良，分离的到两种烟草的原生质体后，通过原生质体副合
36、的力法将他们的遗传物质组合在一起，经培养获得具有新性状的再生柏株。提取再生植株的DNA,采用PCR技术扩增相关基因，来鉴定遗传物质是否成功重组。【点睛】要注意几个相似概念的区别：蒸汽和蒸气的区别：“蒸气”是泛指液体或固体（如水、镇、采、苯）因蒸发、沸腾或升华而变成的气体。使用时前面要加上与之相关的事物，如水蒸气、苯蒸气、采蒸气、磺蒸气。蒸汽“是特指水加热到沸点所变成的水汽，气态的水。蒸汽“特指水的蒸气，义同“水蒸气”，所以不能写成“水蒸汽。原生质体融合和细胞融合的区别：一般情况下，植物称原生质体融合，动物称细胞融合。梢物体细胞杂交和动物细胞杂交的区别：植物体细胞杂交：两个来自不同植物的体细胞融合成一个杂种细胞，并且把杂种细胞培育成新杭物体的方法。动物细胞杂交：基因型不同的细胞的融合称为细胞杂交。基因型相同或不同的细胞融合屈千动物细胞融合。