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1、专题13选修三【2021年6月】20采用CRISPR/Cas9基因编辑技术可将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因定点插入到受精卵的Y染色体上，获得转基因雄性小鼠。该转基因小鼠与野生型雌性小鼠交配，通过观察荧光可确定早期胚胎的性别。下列操作错误的是()A基因编辑处理的受精卵在体外培养时，不同发育阶段的胚胎需用不同成分的培养液B基因编辑处理的受精卵经体外培养至2细胞期，须将其植入同期发情小鼠的子官，才可获得表达EGFP的小鼠C分离能表达EGFP的胚胎干细胞，通过核移植等技术可获得大楹的转基因小鼠D通过观察早期胚胎的荧光，能表达EGFP的即为雄性小鼠胚胎【答案】B【觥析】B受精卵经体外培养至粪胚期，
2、须将其杭入同期发情小候的子官（二）斑马鱼是一种模式动物，体外受精发育，胚胎透明、便于观察，可用于水质监测，基因功能分析以及药物毒性与安全性评价等。(1)由于人类活动产生的生活污水日益增多，大量未经处理的污水直接排入河流、湖泊会引起水体，导致藻类大谥繁殖形成水华。取水样喂养斑马鱼，可用斑马鱼每周的体重和死亡率等指标监测水体污染程度。(2)为了研究某基因在斑马鱼血管发育过程中的分子调控机制，用DNA连接酶将该基因连接到质粒载体形成，导入到大肠杆菌菌株DH5a中。为了能够连接上该目的基因、并有利千获得含该目的基因的DH5a阳性细胞克降，质粒载体应含有（答出2点即司）。提取质粒后，采用法，将该基因导入
3、到斑马鱼受精卵细胞中，培养并观察转基因斑马鱼胚胎血管的发育情况。(3)为了获取大量斑马鱼胚胎细胞用于药物筛选，可用分散斑马伍卖胚的内细胞团，取分散细胞作为初始材料进行培养。培养瓶中添加成纤维细胞作为，以提高斑马鱼胚胎细胞克隆的形成率。【答案】(-)(1)冷却玻坞刮刀较大透明圈斜面(2)乙醇耐酒精度席、耐酸高(3)灭菌吸附法（二）（1)富营养化(2)币组DNA分子限制性核酸内切酶的识别序列、抗生素抗性基因显微注射(3)胰蛋白酌原代饲养层细胞【2021年1月】18.下图为动物成纤维细胞的培养过程示意图。下列叙述正确的是()三皇三二毛切取组织制备细胞悬浮液原代培养传代培养A.步骤CD的操作不福要在无
4、菌环境中进行B.步骤中用盐酸溶解细胞间物质使细胞分离C.步骤到的分瓶操作前常用胰蛋白酶处理D.步骤培养过程中不会发生细胞转化【答案】C【分析】动物细胞培养过程：取动物组织块一剪碎组织一用胰蛋白酶处理分散成单个细胞一制成细胞悬液一转入培养液中（原代培养）一放入二氧化碳培养箱培养一贴满瓶壁的细胞用酌分散为单个细胞，制成细胞悬液一转入培养液（传代培养）一放入二氧化碳培养箱培养。【详解】A、动物细胞培养过程需要无困操作，故步骤O的操作需要在无莉环境中进行，A错误；B、动物细胞培养过程面要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理动物组织，分散成单个细胞，制成细胞悬液，B错误；C、传代培养时需要用胰蛋白酶处理贴壁生长的
5、细胞，使之分散成单个细胞，再分瓶培养，C正确D、步骤为传代培养过程，该过程中部分细胞可能发牛细胞转化，核型改变，D钻误。故选C。（二）三叶青为蔓生的藤本植物，以根入药。由于野生三叶青对生长环境要求非常苛刻，以及生态环境的破坏和过度的采挖，目前我国野生三叶青已十分珍稀。(I)为保护三叶齐的多样性和保证药材的品质，科技工作者依据生态工程原理，利用技术，实现了三叶青的林下种植。(2)依据基因工程原理，利用发根农杆菌侵染三叶青带伤口的叶片，叶片产生酚类化合物，诱导发根农杆菌质粒上vir系列基因表达形成和限制性核酸内切酶等，进而从质粒上复制并切割出一段可转移的DNA片段CT-DNA)。T-DNA进入叶片
6、细胞并整合到染色体上，T-DNA上rot系列基因表达，产生相应的植物激素，促使叶片细胞持续不断地分裂形成，再分化形成毛状根。(3)剪取毛状根，转入含头玸类抗生素的固体培养基上进行多次培养，培养基中添加抗生素的主要目的是。最后取毛状根转入液体培养基、置千摇床上进行悬浮培养，通过控制摇床的和温度，调节培养基成分中的，获得大谥毛状根，用千提取药用成分。【答案】遗传间种DNA聚合酶愈伤组织继代杀火发根农杆菌转速营养元素以及生长调节剂的种类和浓度【详解】（二）（I)生物多样性包括遗传多样性、物种多样性和生态系统多样性，为保护三川占的遗传多样性和保证药材的品质；二叶青的林下种梢，是利用间种技术。(2)分析
7、题意可知，从质粒上复制并切割出一段可转移的DNA片段(T-DNA),DNA复制需要DNA聚合酶，故可知，酚类化合物诱导发根农朴陌质粒上vir系列基囚表达，形成DNA聚合酶和限制性核酸内切酶等。根据植物组织培养技术过程可知，相应植物激素可以促使叶片细胞脱分化形成愈伤组织，再分化形成毛状根。(3)剪取毛伏根，转入含头抱类抗生素的固体培养基上进行多次练代坢养，培养基中添加杭生素的主要目的是杀灭发根农杆曲。最后取毛状根转入液体培养基、置千摇床上进行悬浮培养，通过控制摇床的转速和温度，调节培养基成分中的营养元素以及生长调节剂的种类和浓度，获得大址毛状根，用千提取药用成分。【2020年7月】15.下列关千
8、病毒的叙述，错误的是（)A.有的病毒经灭活处理后，可用千细胞工程中介导动物细胞的触合B.适当增加机体内参与免疫的细胞数量与活性，可提高对新型冠状病毒的抵御能力C.在某人的分泌物中检测到新型冠状病毒，推测该病毒的增殖不依赖于宿主细胞D.用高温高压处理病毒使其失去感染能力，原因之一是病毒的蛋白质发生了热变性【答案】C【分析】诱导细胞融合的方法有二种：生物方法（病毒）、化学方法（聚乙二酐PEG)、物理方法（离心、震动、电刺激）。某些病毒如：仙台病毒、副流感病毒和新城炖瘟病毒的被膜中有副合蛋臼，可介导病毒同宿主细胞融合，也可介导细胞与细胞的融合，因此可以用紫外线灭活的此类病毒诱导细胞融合。【详解】A、
9、有的病毒经火活处理后，可用千细胞丁桯中介导动物细胞的他合，如灭活的病毒，A 正确B、适当增加机体内参与免疫的细胞数兄与活性，i-1以参与免疫调节中的体液和细胞免疫，尽可能杀死史多的病诉，可提高对新型冠状病奇的抵御能力，B正确；C、在某人的分泌物中检测到新型冠状病毒，是因为病宙浸入细胞后大旦繁姐，病击从细胞中释放出来，不能说明该病责的增殖不依赖于宿主细胞，C错误；D、用茼温高压处理病毒使其失去感染能力，原因之一是病毒的蛋白质在高温高压下，空间结构发生变化，肤链松散，发生，变性，D正确。故选C。24.下列关千基因工程的叙述，正确的是（)A.若受体大肠杆菌含有构建重组质粒时用到的限制性核酸内切酶，则
10、一定有利千该重组质粒进入受体并保待结构稳定B.抗除草剂基因转入某抗盐植物获得2个稳定遗传转基因品系，抗性鉴定为抗除草剂抗盐和抗除草剂不抗盐。表明一定是抗盐性的改变与抗除草剂基因的转入无关C.抗除草剂基因转入某植物获得转基因植株，其DNA检测均含目的基因，抗性鉴定为抗除草剂和不抗除草剂。表明一定是前者表达了抗性蛋白而后者只表达抗性基因RNAD.已知不同分子量DNA可分开成不同条带，相同分子量的为一条带。用某种限制性核酸内切酶完全酶切环状质粒后，出现3条带。表明该质粒上一定至少有3个被该酶切升的位置【答案】D【分析】基因工程中通常要有多种工具酶、目的基因、载体和宿主细胞等基本要索，并按一定的程序进
11、行操作，包括门的基因的获得、重组DNA的形成、重组DNA导入受体细胞、筛选含有目的基因的受体细胞和目的基因的表达等几个方面。【详解】A、若受体人肠杆菌含有构建直组质粒时用到的限制性核酸内切酌，则该酶会对进入受体的重组质粒进行切割，不利千其保待结构秘定，A错误；B、抗除草剂基因转入抗盐植物，获得了抗除草剂抗盐品系和抗除草剂不抗盐品系，不抗盐品系的产生可能是转入的抗除草剂基因插入到抗盐基因内，影响其表达造成，B错误；C、转基因植物中均含抗除萃剂基因，但存在抗除萃剂和不抗除草剂两种植株，前者衣达了抗性蛋白，后者可能抗除草剂基因未转录出mRNA,或转录出的lnRNA未能翻译成蛋白质，C错误；D、某种限
12、制性内切酶完全酶切环状质粒后，出现3条带，即3种不同分子笠DNA,因此环状队粒上至少有3个酶切位点，D正确。故选D。（二）回答与基因工程和植物克隆有关的问题：(1)天然农杆菌的Ti质粒上存在着一段DNA片段CT-DNA)，该片段可转移并整合到植物细胞染色体上。为便于转基因植物在组织培养阶段的筛选，设计重组Ti质粒时，应考虑T-DNA中要有可表达的目的基因，还需要有可表达的。(2)结合植物克隆技术进行转基因实验，为获得转基因植株，农杆菌侵染的宿主一般要选用具有优良性状、较高的遗传稳定性、及易被农杆菌侵染等特点的植物材料。若植物材料对农杆菌不敏感，则可用的转基因方法。(3)利用带侧芽的茎段获得丛状
13、苗的过程与利用茎段诱导产生愈伤组织再获得丛状苗的过程相比，前者总培养时间，且不经历过程，因而其遗传性状稳定，是大多数植物快速繁殖的常用方法。(4)与发芽培养基相比，配制转基因丛状苗生根培养基时，可根据实际情况适当添加，促进丛状苗基部细胞分裂形成愈伤组织并进一步分化形成，最终形成根。还可通过改变MS培养基促进生根，如（A.提高庶糖浓度B.降低培养基浓度C.提高大世元素浓度D.不添加琼脂）。答案】抗性基囚全能性表达充分显微注射短脱分化牛长索根的分生组竹lB【分析】发芽培养基：3000mLMS培养基含l.5mgBA的溶液含0.02mgNAA的溶液30g庶糖40g琼脂，再加蒸馈水至4000mL,混合均
14、匀加热至琼脂砂化后，通过三角涌斗分装至lOOmL,三角瓶中每瓶4OInL，共100瓶三角瓶，加上封口股丿言1kg压力下在灭菌锅内灭菌20分钟。牛根培养基：1000n让MS培养基含0.38mgNAA的溶液30g庶糖20g琼脂，再加蒸饰水至2000mL,混合均匀加热允琼脂融化后，通过三角涌斗分装全IOOmL,三角瓶中每瓶40mL,共50瓶二角瓶，加上封口膜后1kg压力下在灭闭锅内灭稍20分钟。（二）（1）设计霆组质粒时，除了要含有可表达的日的某因，还需要有可表达的抗性某因（如抗生素抗性基因），在添加抗生素的培养基卜，含重组质粒的宿主细胞能够生长，因而被筛选出来。(2)转基因实验要求宿主细胞性状优良
15、、遗传稳定性较高、全能性（细胞发育成个体的潜能）较高及易被农杆菌侵染等特点。若植物材料对农杆菌不敏感，可采用显微注射的力法。(3)利用带侧芽的茎段获得从状苗的过程，比利用茎段诱导产生愈伤组织获得从状苗的过程时间更短，囚为不需要经历脱分化的过程，而且遗传性状稳定。梢物器官的分化斋要一定的营养物质及适宜的激素配比，配制丛状苗生根培养基需根据实际情况添加生长素，促进基部细胞形成愈伤组织，并进一步分化形成根的分牛组织，最终形成根。比较发芽培养基和牛根焙养基可知MS培养基的浓度下降，因此可降低培养基的浓度促进生根。故选B。【2020年1月】17.下列关于利用胚胎工程培育优质奶牛的叙述，正确的是A.从雄性
16、奶牛中采集到的成熟精子遇到卵子即可进入卵子内B.在体外完成受精后的受精卵，将其植入子宫即可完成着床C.随着卵裂的进行，卵裂球细胞的体积变小，卵裂球的体积和有机物总昼显著增加D在含有经辐射处理的胚胎成纤维细胞的培养体系中，胚胎干细胞不易发生分化【答案】D【分析】l、体外受精主要包括：卵母细胞的采栠和培养、精了的采集和获能、受精。2、胚胎移植的基本程序主要包括：对供、受体的选择和处理（选择遗传特性和生产性能优秀的供休，有健康的体质和正常繁殖能力的受休。用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理）；配种或人工授精；对胚胎的收集、检查、培养或保存（对肌胎进行质散检查，此时的胚胎应发育
17、到榄或胚襄胚阶段）；对胚胎进行移植；移植后的俭查。3、胚胎移植的生理学基础：动物发悄排卵后，同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的。这就为供体的胚胎移入受体提供了相同的生理环境。早期胚胎在一记时间内处千游离状态。这就为胚胎的收集提供了可能。受体对移入子宫的外来胚胎不发生兔疫排斥反应。这为胚胎在受体的存活提供了可能。供体胚胎可与受体了宫建立正常的生理和组织联系，但供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受影响。【详解】A、从雄性奶牛巾采集到的成熟精子需要进行获能处理才能受精，A铅误；B、在体外亢成受精后的受粕卵，需要进行早期胚胎培养，才能将其植入子宫，B错误；C、随若卵裂的进行，卵裂球细胞的体积变
18、小，卵裂球的体积基本不变或略有减小，有机物总量减少，C错误；D、在含有经辐射处理的胚胎成纤维细胞的培养体系中，由千胚胎成纤维细胞可以分泌世旦能抑制细胞分化的物质，所以胚胎下细胞不易发生分化，D正确。故选D。（二）回答与基因工程和植物克隆有关的问题：(1)为了获取某植物叶片无菌的原生质体，先将叶片经表面消毒并去除下表皮，再将其置千经处理的较高渗透压的混合酶液中。酶解后，经多次离心获得原生质体。然后测定该原生质体的活性，可采用的方法有（答出2点即可）。(2)若要获得已知序列的抗病基因，可采用或PCR的方法。为了提高目的基因和质粒重组的成功率，选择使用，对含目的基因的DNA片段进行处理，使其两端形成
19、不同的粘性末端，对质粒也进行相同的处理，然后用DNA连接酶连接形成重组质粒。通过在大肠杆菌中，以获得大量的重组质粒，最终将其导入原生质体中。(3)原生质体在培养过程中，只有重新形成后，才可进行有丝分裂。多次分裂形成的小细胞团可通过或器官发生的途径再生植株。【答案】过滤灭菌染色法，渗透吸水或失水化学合成两种限制性核酸内切酶扩增细胞壁胚胎发生【详解】（一）(1)为了获取某植物叶片无菌的原生质体，先将叶片经农面消毒并去除下衣皮，再将其置了经过滤灭菌处理的较高渗透压的混合酶液中。酶解后，经多次离心获得原生原体。可采用染色法、渗透吸水或失水的方法测定该原生质体的活性。(2)可采用人工合成或PCR的力法获
20、得已知序列的抗病基因。对含目的荔因的DNA片段进行处理，为使其两端形成个同的粘性末端，需婓选择使用两种限制性核酸内切酶，对质粒也进行相同的处理，为了提高目的基因和质粒重组的成功率，然后用DNA连接酶连接形成蜇组质粒。通过在大肠杆曲中扩增，以获得大散的重组质粒，最终将其导入原生质休中。(3)原牛质体在培养过程中，只有重新形成细胞壁后，才叫进行有丝分裂。多次分裂形成的小细胞团可通过胚胎发生或器官发生的途径再生植株。【2019年4月】（二）回答与利用生物技术培育抗病品种有关的问题：(1)通过抗病性强的植株获取抗病目的基因有多种方法。现已获得纯度高的抗病蛋白（司作为抗原），可通过技术获得特异性探针，并
21、将中所有基因进行表达，然后利用该探针，找出能与探针特异性结合的表达产物，进而获得与之对应的目的基因。(2)将上述抗病基因通过转基因的方法导入植物的分生组织可获得抗病性强的植株。若在试管苗期间用分子水平方法判断抗病基因是否表达，应检测（A.质粒载体B.转录产物C.抗性基因D.病原微生物）。(3)植物细胞在培养过程中往往会发生，可利用这一特性筛选抗致病真菌能力强的细胞。筛选时在培养基中加入，并将存活的细胞进一步培养至再生植株。若利用培养建立的细胞系用于筛选，则可快速获得稳定遗传的抗病植株。(4)用抗病品种与高产品种进行杂交育种过程中，有时会遇到因胚发育中止而得不到可育种子的情况。若要使该胚继续发育
22、获得植株，可采用的方法是。【答案】单克隆抗休基因文库B 变异高浓度致病真菌花粉离体胚的离体培养【分析】（二）(I)抗病蛋臼可作抗原，则特异性探针应为抗体，则需要通过单克隆抗体技术获得特异性探针；基囚文库包含了朵个DNA分子的所有基因，故是将基囚文库中的所有基因进行表达，再利用探针获得日的拈因；(2)质粒载体只能检测目的结因是否转入受体细胞，A选项错误；转录产物为RNA,可以通过DNA-RNA分千杂交检侧抗病基因是否表达，B选项正确；检测抗性基因只能检侧抗性基因是否导入受体细胞，无法检测该基因是否表达，C选项错误：检测病原微生物是个体水平检侧目的基因是否表达的力式，D选项错误；故正确的选项选择B
23、;(3)抗致病真菌基因是原本植物细胞不含的基因，则需要利爪植物细胞在培养过程中的变异来筛选抗致病真荀能力强的细胞；由千斋要筛选抗致病真苗能力强的细胞，故茄要在培养拈中加入高浓度致病真曲；快速稳定遗传的抗病植株需要通过单倍体培养获得，故需要利用花粉离体培养建立细胞系用千筛选；(4)要利用胚的发育获得植株，可利用胚细胞的全能性，采爪胚的离休培养获得植株。【2018年11月】（二）某农业生态工程示意图如下，回答下列问题；三甘庶桑基一蚕鱼庶基气严(1)该农业生态工程体现的生态工程原理主要是。对该工程的经济效益分析，可从系统内部的投入和产出、系统的有效贡献等三方面进行核算。(2)若要提高该工程的经济效益
24、，可采用农业生产的技术在桑基上再种植大豆，也可采用农业生态工程的技术放养适量的鸡鸭等动物以调整该工程的产业结构。(3)某小组应用基因工程方法开展适用千该生态工程的抗虫植物改良研究。为提高将重组DNA分子导入受体细胞的效率，除考虑导入方法、筛选条件、防止污染外，还需考虑的主要因素有（答出2点即可）。农杆菌介导法是目前植物转基因的常用方法，该方法的基本过程是农杆菌感染植物时，并将其插入到受体细胞的基因组中。欲获得稳定遗传的抗虫性强的转基因植物品种，则转入的抗虫基因必须能在受体细胞中【答案】物质循环系统的实际消费间种种植业和衔牧Iv合理优化重组DNA的质蜇和浓度、受体细胞的生长状态与密度携带目的基因
25、的Ti质粒转移到受体细胞稳定和高效地表达分析】2、牛态工程的原理：物质循环再生原理、协调与平衡原理、整体性原理。（二）（I)根据题图中农业生态工程示意图可知，庶叶、蚕沙养鱼，塘泥作为甘庶和桑树的肥料回到桑基和庶基，桑叶养蚕，而桑获、蚕茧、鱼和甘庶均可加工，为人类利用，这样实现物原的良性循环。可从系统内部的投入和产出、系统的实际消费、系统的有效贞献等三方面分析该工程的经济效益。(2)为f提高该工程的经济效益，可采用间种技术在桑基上种植大豆，也可以适堂放养炖鸭等动物米优化种植业和畜牧业等产业结构。(3)为提高将重组DNA分子导入受体细胞的效率，除考虑导入方法、筛选条件、防止污染外，还需考虑的主要因
26、素有觅组DNA的质赘和浓度、受体细胞的生长状态与密度等。将重组DNA分子导入受体细胞方法有农杆闭转化法、显微注射技术和氯化钙处押法。其中农杆菌转化法是目前植物转基闵的常用方法，该方法的基本过程是农杆菌感染植物时，携带目的基因的Ti质粒转移到受体细胞，并将其插入到受体细胞的结因组中。欲获得稳定遗传的抗虫性强的转基因植物品种，则转入的抗虫基因必须能在受体细胞中稳定和高效地表达。【2018年4月】（二）回答与基因工程和植物克隆有关的问题。(1)将含某抗虫基因的载体和含卡那霉素抗性基因的载体pBI121均用限制性核酸内切酶EcoRI酶切，在切口处形成。选取含抗虫基因的DNA片段与切割后的pBI121用
27、DNA连接酶连接。在两个片段相邻处形成，获得重组质粒。(2)已知用CaCh处理细菌，会改变其某些生理状态。取CaCh处理过的农杆菌与重组质粒在离心管内进行混合等操作，使重组质粒进入农杆菌，完成实验。在离心管中加入液体培养基，置于摇床慢速培养一段时间，其目的是，从而表达卡那霉素抗性基因，并大量增殖。(3)取田间不同品种水稻的幼胚，先进行，然后接种到培养基中培养，幼胚发生形成愈伤组织，并进行继代培养。用含里组质粒的农杆菌侵染愈伤组织，再培养愈伤组织，以便获得抗虫的转基因水稻。影响愈伤组织能否成功再生出植株的因素有：培养条件如光温、培养基配方如植物激素配比、以及（答2点即可）。答案】黏性末端磷酸酷键
28、转化使CaCb处理过的农杆菌恢复细胞的正常状态消霉脱分化水稻的基因型、愈伤组织继代的次数【解析】（二）（I)用限制性核酸内切酶EcoRI酶切含某抗虫基因的载体和含卡那霄素抗性基因的载体pBI121,可在切口处形成黏性末端。用DNA连接酶连接含抗虫基因的DNA片段与切割后的pBil21,可在两个片段相邻处形成磷酸二脂键，获得重组质粒。(2)取CaCb处理过的农杆荀与重组质粒在离心忤内进行混合等操作，使重组质粒进入农杆曲，亢成转化实验。在岛心管中加入液休培养某，置于摇床慢速培养一段时间，其目的是：使CaCb处理过的农杆面恢复细胞的正常状态。(3)在进行植物组织培养时，取田间不同品种水稻的幼胚，先进
29、行消毒，以清除其表面附右的微生物；然后接种到培养基中培养，幼胚发生脱分化形成愈伤组织，并进行继代培养。影响愈伤组织能否成功再生出植株的因素有：培养条件如光温、培养基配力如植物激素配比、以及水稻的某囡型、愈伤组织继代的次数等。【2017年11月】回答与植物克隆和动物克隆有关的问题(1)利用植物愈伤组织获得再生植株主要有两条途径：一是由愈伤组织的细胞先分化产生芽和根后再形成一个完整植株的途径，二是由愈伤组织细胞产生胚状体后再萌发形成完整植株的胚胎发生途径。另外也司不通过愈伤组织阶段而直接采用腋芽带的茎段培养成丛状苗，再诱导生根获得再生植株，其原因是腋芽中存在。(2)利用植物克隆培育新品种，一方面可
30、利用带有目的基因的侵染植株，通过的方法导入植物细胞、组织、器官获得转基因植株，另一方面利用异源植株的进行融合产生杂种植株，或利用异源植株在试管内进行，对其产生的胚进行培养产生杂种植株。(3)下列属千植物克隆和动物克隆共有培养方法是（)A悬浮培养、器官培养B.贴壁培养、传代培养C.器官培养、愈伤组织培养D原生质体培养、传代培养【答案】不同的菌株、不同的原料增加通气性器官发生分生组织农杆伯显微注射原生质体受精【详解】回答与柏物克隆和动物克隆有关的问题：(1)利用植物愈伤组织获得再生植株主要有两条途径一是由愈伤组织的细胞先分化产生芽和根后再形成一个完整梢株的器官发生途径，二是由愈伤组织细胞产牛肘状体
31、后再萌发形成完整柏株的胚胎发生途径。由千胚芽中存在分生组织，其能够不断的分裂，所以也可不通过愈伤组织阶段而直接采用腋芽带的茎段培养成从状苗，再诱导生根获得再生植株。(2)农杆荫是一种在土壤中生活的微牛物，能在自然条件卜感染双子叶梢物和裸子柏物，而对大多数单子叶植物没有感染能力，闲此可将日的基因插入Ti质粒的T-DNA上，导入农杆苗，利用带有目的基囚的农杆菌侵染柏株，通过显微注射方法导入梢物细胞、组织、器官获得转某因植株。另一方面利用异源植株的原生质体进行融合产生杂种植株，或利用异源植株在试管内进行受精，对其产生的胚进行培养产生杂种植株。(3)动物细胞焙养即动物克隆的过程是：取动物组织或器官一剪
32、碎组织一用胰蛋白酶处理分散成单个细胞一制成细胞悬液一转入培养液中（原代培养）一放入二氧化碳培养箱培养一贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞制成细胞悬液一转入培养液（传代培养）一一氧化碳培养箱；植物组织培养属于植物克隆技术。植物组织培养过程是：离休的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织，然后盯分化生成根、芽，殴终形成柏物体。柏物组织培养衙要离体培养、无菌条件，植物激素（生长素和细胞分裂素）、一定的营养条件、维持适宜的温度和一定的光照条件等。在梢物组织细胞培养过程中，需要将梢物愈伤组织迎过液体悬浮培养，分散成单细胞，这种单细胞能发育成胚状体。由以上分析可知，在植物克隆和动物克隆过程中，共同的培养方法
33、有悬浮培养、器官培养。故选：A。【2017年4月】（二）回答与生态工程有关的问题：(1)对农作物秸杆多途径利用的基本过程示意图如下，贯穿全过程的核心技术是技术。其中“过腹还阳”的具体途径是。将秸杆和动物粪便等通过微生物发酵产生沼气，这是利用了农业生态工程中的技术。AIIII谥纠l 吐C-t心肥,.丛愉出从ir-l3片上I 卫lt川付一吵钮讯（饷讯沁(2)衣业生产上，畜牧业依赖和受制千种植业，可以通过种植业和裔牧业的技术提高经济和社会效益。退耕还林”后，林地的增加可以减少，更有利千受损生态系统的恢复。使用农药能有效控制农业害虫，但也使生态系统的减少，因此利用生物的进行生物防治是今后的发展方向。【
34、答案】物质的良性循环通过农作物秸杆喂养家畜家畜的粪便闺作为肥料施投到农田洁净可冉生的新能源开发合理优化水土流失食物多样性种间关系【详解】（二）（l）根据对农作物桔杆多途径利用的基本过程示意图可知，贯穿全过程的核心技术是物质的良性循环技术。其中“过腹还田”的具体途行是秸杆一家衔一粪使一农田。将秸杆和动物粪便等通过微生物发酵产生沼气，这是利用f农业生态工程中的洁净可再生的新能源开发技术。(2)农业生产k，衔牧W依赖和受制千种植业，可以通过种植Iv.和衔牧业的合理优化技术提高经济和社会效益。退耕还林”后，林地的增加可以减少水土流失，更有利千受损生态系统的恢复。使厅农药能有效控制农业害虫，但也使生态系
35、统的生物多样性减少，因此利用生物的种间关系进行生物防治是今后的发展方向。【2016年10月】（二）某小组欲进行烟草原生质体分离与培养的研究。请回答：(1)原生质体的分离：在无菌条件下，取烟草无菌苗的叶片，放入含有O.Smol/L甘露醇（维持较高渗透压）的混合液处理，经过离心纯化后获得原生质体。(2)原生质体的培养：将原生质体进行培养，重新长出细胞壁，形成胚性细胞。此时，应该培养基中甘露醇浓度，以利千胚性细胞继续培养形成细胞团，然后经两条途径形成再生植株。途径一：细胞团经球形胚、和胚状体，最后发育成植株。途径二：细胞团增殖为愈伤组织，然后在发芽培养基上诱导出芽，切割芽经过生根后形成完整植株。上述
36、发芽培养基中含世相对较高的激素是，胚性细胞的主要特点是：。(A.液泡小、细胞核小B.液泡大，细胞核大C.液泡大，细胞核小D.液泡小、细胞核大）(3)为了对烟草的某些性状进行改良，分离的到两种烟草的原生质体后，通过方法将他们的遗传物质组合在一起，经培养获得具有新性状的再生植株。提取再生植株的DNA,采用扩增相关基因，来鉴定遗传物质是否成功重组。【答案】纤维素酶和果胶酶降低心形胚细胞分裂素D 原生质体勋合PCR（详解】（二）(l)制备烟草原牛质体时斋要除去细胞壁，柏物细胞壁由纤维索和果胶组成，因此可以用纤维素酶和果胶酶除去植物细胞壁；(2)原生质体的培养：将原生质体进行培养，重新长出细胞壁，形成胚
37、性细胞的过程中，应该降低培养基中H露醇浓度，以利用胚性细胞继续炕养形成细胞团。胚性细胞继续培养形成细胞团，然后经两条途径形成再生植株，途径一：细胞团经球形胚、心形胚和胚状休，砐后发育成梢株。途径二：细胞团增姐为愈伤组织，然后在发芽培养基上诱导出芽，切割芽经过生根后形成完整植株。其过程中愈伤组织诱导产生芽的坎养基中衙要的细胞分裂素的比例较的，胚性细胞的主要特点是液泡小，细胞核大。(3)为了对烟岸的某些性状进行改良，分离的到两种烟片的原生质体后，通过原生质体融合的方法将他们的遗传物质组合在一起，经培养获得具有新性状的再生柏株。提取再生桢株的DNA,采用PCR技术扩增相关基因，来鉴定遗传物质是否成功
38、茧组。【点睛】原生队体触合和细胞恐合的区别：一般悄况下，植物称原生丿员体他合，动物称细胞恐合。植物体细胞杂交和动物细胞杂交的区别：植物体细胞杂交：两个来自不同植物的体细胞触合成一个杂种细胞，并且把杂种细胞培育成新植物体的方法。动物细胞杂交：基因型不同的细胞的恐合称为细胞杂交。基因型相同或不同的细胞融合屈千动物细胞融合。【2014年6月高考】下列关千动物细胞培养的叙述，正确的是（)A.连续细胞系的细胞大多具有二倍体核型B.某些癌细胞在合适的条件下能逆转为正常细胞C.由多个祖细胞培养成的细胞群为一个克隆D.未经克隆化培养的细胞系细胞具有相同的性状【答案】B【详解】A、连续细胞系的细胞一般都经历了多
39、次培养，其二倍休核型发生了改变，A错误；B、细胞癌变是原癌基因和抑癌基囚突变引起的；基囚基囚突变具有不定向的特点，如果癌细胞在合适的条件下发生某因突变，有可能使突变后的原船基因或抑梪基因变成正常的基因，使细胞失去癌细胞的特点，B正确C、一个克隆是指l个细胞经培养形成的细胞群，多个祖细胞培养成的细胞群不是一个克隆，C错误；D、未经克隆化培养的细胞系是山多个能无限增殖细胞增殖得到的，无限增殖的细胞遗传物质发生了改变，这种改变可能是不相同的，不一定具有相同的性状，D错误。故选B。【点睛】本题考查动物细胞培养及癌细胞的知识，总在考查学牛将理论与牛物学事实联系的能力。【2013年6月高考】实验小鼠皮肤细
40、胞培养（非克隆培养）的基本过程如图所示。下列叙述错误的是严巴亘亘三国了但亘亘气五三A.甲过程需要对实验小鼠进行消毒B.乙过程对皮肤组织可用胰蛋白酶消化C.丙过程得到的细胞大多具有异倍体核型D.丁过程得到的细胞具有异质性【答案】C【详解】A组织焙养时面要对选取的材料进行消毒处理，操作过程面要无菌操作，A正确。B用胰蛋自酌处理，可将动物组织中细胞分散丿T,B正确。C丙过程为原代培养过程，细胞l为细胞株细胞，没有发生遗传物顶改变，C错误。D丁过程传代培养，在此过程中，大部分细胞衰老，死亡，少数细胞发生遗传物质改变，出现了无限传代的特性，D正确。故选C。【定位】动物的细胞培养与休细胞克隆【2012年6
41、月高考】下列关千高等哺乳动物受精与胚胎发育的叙述，正确的是A.绝大多数精卵细胞的识别具有物种特异性B.卵裂球细胞的体积随分裂次数增加而不断增大C.褒胚的滋养层细胞具有发育全能性D.原肠胚发育分化形成内外两个胚层【答案】A【详解】A同种动物精子、卵细胞表面存在的特异性受体蛋臼，决定了只有同种动物精卵才能结合，Ai卜确；B受精卵随右分裂的进行，其细胞的体积在逐渐变小，B错误；C艇胚期的细胞丿始出现分化，其外表的一层细胞即滋养层，只能发育成胚胎的附屈结构或胚外结构，不具有发育的令能性，C错误；D襄胚可继续分化城的原肠胚具有三个胚层，D错误：囚此，本题答案选A。考点定位：本题结合受精作用及早期胚胎的发
42、育综合考查胚胎工程的有关知识，属千识记层次的考查。【2012年6月高考】天然的玫瑰没有蓝色花，这是由千缺少控制蓝色色素合成的基因B,而开蓝色花的矮牵牛中存在序列已知的基因B。现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列操作正确的是A.提取矮牵牛蓝色花的mRNA,经逆转录获得互补的DNA,再扩增基因BB.利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库中获取基因BC.利用DNA聚合酶将基因B与质粒连接后导入玫瑰细胞D.将基因B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞【答案】A【详解】控制蓝色色素合成的基因B即为我们所面要的目的基因，可通过逆转录法获得基因B,再进行扩增以增加其数址，A正确；基因文库中保存的是各基因片段，提取时无须使用限制性核酸内切酶，B错误；为使目的基因在受体细胞中稳定存在且能向下一代遗传，应先在体外使厅DNA连接酌构建基阳表达载体，然后冉导入大肠杅菌，CD错误。故选：A。