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1、动物实验基本方法第1页，此课件共84页哦实验动物基本概念实验动物定义：经人工培育和人工改造实验动物定义：经人工培育和人工改造,对其携带的微生物和寄生虫对其携带的微生物和寄生虫实行控制、遗传背景明确或者来源清楚，而用于科学研究、教学、生实行控制、遗传背景明确或者来源清楚，而用于科学研究、教学、生物制品或药品生产、鉴定以及其它科学实验的动物物制品或药品生产、鉴定以及其它科学实验的动物第2页，此课件共84页哦实验动物分类实验动物分类按遗传学分类：近交系、封闭群、杂交群。按遗传学分类：近交系、封闭群、杂交群。按微生物学分类：普通级动物、清洁级动物、无特定病原体动物、无按微生物学分类：普通级动物、清洁级
2、动物、无特定病原体动物、无菌动物菌动物第3页，此课件共84页哦普通级动物：不携带主要人畜共患病病原和动物烈性传染病的普通级动物：不携带主要人畜共患病病原和动物烈性传染病的病原。病原。清洁级动物：除普通动物应排除的病原外，不携带对动物危害大清洁级动物：除普通动物应排除的病原外，不携带对动物危害大和对科学研究干扰大的病原。和对科学研究干扰大的病原。第4页，此课件共84页哦无特定病原体动物：除清洁级动物应排除的病原外，不携带无特定病原体动物：除清洁级动物应排除的病原外，不携带主要潜在感染或条件致病和对科学实验干扰大的病原。主要潜在感染或条件致病和对科学实验干扰大的病原。无菌动物：无可检出的一切生命体
3、。无菌动物：无可检出的一切生命体。第5页，此课件共84页哦实验动物的护理和使用原则1、实验动物的饲养和使用应遵守国家有关的法律和规定。2、应明确使用实验动物的理由和目的。3、明确实验所使用动物的种类和数量，动物的数量应满足统计学的要求。4、完善操作规程，避免或减轻因实验对动物造成的不适和痛苦。包括使用适当的镇静、镇痛或麻醉方法；禁止不必要的重复。第6页，此课件共84页哦5、严格按程序实施实验后动物的处理，包括麻醉、止痛、实验后的护理或用麻醉方法处死。6、实验过程中要求保证实验动物的良好生活条件，包括饲养环境、符合需求的饲料及细心的护理等。7、研究人员和实验动物操作人员应接受实验动物的基本知识和
4、操作技能等方面的培训。8、使用过程中要求保证周围环境和实验人员的安全。第7页，此课件共84页哦实验过程的行为规范1 1、物理限制、物理限制2 2、手术操作、手术操作3 3、饮食的限制、饮食的限制4 4、废弃物和尸体处理、废弃物和尸体处理第8页，此课件共84页哦物理限制：物理限制：是指在实验过程中（包括检查、收集标本、给药、治疗或实验操作等），用手或工具限制动物活动的过程。根据实验内容不同，限制时间有差异，但要求尽量缩短限制时间。有些动物，如狗和灵长类动物可以通过简单的训练达到目的.第9页，此课件共84页哦物理限制的主要原则和要求包括：限制的工具不能作为常规的饲养工具。工具的设计应合理，不要仅考
5、虑实验的便利，主要考虑尽量减少动物的不适，避免伤害。尽量减少限制的时间，以达到实验目的为基准。在限制过程中，如果发生损伤或严重的行为改变，应暂停或禁止限制，并给予处理或治疗。保证实验人员和周围人员的安全。第10页，此课件共84页哦手术操作手术操作有些实验需要对动物进行手术，即打开或刺穿动物的身体，对动物的物理或生理机能产生较大的损害，同时，实验人员也容易被血液/体液污染或被器械、针头刺伤，存在潜在生物污染的威胁，因此必须做到：操作一定要使用适当的镇静、镇痛或麻醉方法。禁止不必要的重复操作。不提倡利用一个动物进行多个手术实验，但是，为充分利用动物资源，经动物伦理委员会许可，在可能的条件下可以实施
6、。严格实验操作规程，防止发生血液/体液外溅和针刺伤，避免生物污染。手术后的动物、标本以及所用器具材料等必须按规定程序妥善处置。第11页，此课件共84页哦饮食的限制饮食的限制 实验用动物实验用动物原则上要求随时饮食原则上要求随时饮食，如果一些实验需要动物限制食，如果一些实验需要动物限制食物或水的摄入量，应保证动物存活所需要的最低需求量。根据研究的物或水的摄入量，应保证动物存活所需要的最低需求量。根据研究的目的，食物的限量应经过科学的论证，其限量的标准应容易操作，如目的，食物的限量应经过科学的论证，其限量的标准应容易操作，如正常摄入量的百分比或动物体重的百分比。对于水分的限量摄入，一正常摄入量的百
7、分比或动物体重的百分比。对于水分的限量摄入，一定要防止动物发生脱水现象，并要保持动物的膳食平衡。定要防止动物发生脱水现象，并要保持动物的膳食平衡。第12页，此课件共84页哦废弃物和尸体处理废弃物和尸体处理1动物尸体的处理 安乐处死后的动物尸体，取材完毕后，经121 30min高压灭菌处理后，集中送环保部门处理。动物生物安全三级（animal biosafety level 3,ABSL-3）实验室及以上级的实验室的感染动物尸体需经室内和双扉两道高压灭菌，才能移出实验室。2.动物咽拭子的处理 用于病原分离和PCR检测的咽拭子，按照各自的要求处理后，进行病毒分离和PCR检测，剩余的标本经121，3
8、0min高压消毒处理。3.病原分离培养物的处理 病原分离的培养物，不论是阳性还是阴性结果，均需经121，30min高压消毒处理。第13页，此课件共84页哦选择实验动物基本原则尽量选择研究对象的功能、代谢、结构及疾病与人类相似的动物；尽量选择研究对象的功能、代谢、结构及疾病与人类相似的动物；解剖、生理特点符合实验目的要求；解剖、生理特点符合实验目的要求；实验动物不同品种品系的特点；实验动物不同品种品系的特点；选择标准化实验动物；选择标准化实验动物；符合实验动物选择的一般原则；符合实验动物选择的一般原则；经济性原则；经济性原则；要考虑到动物实验结果的外推；要考虑到动物实验结果的外推；注意有关国际规
9、范。注意有关国际规范。第14页，此课件共84页哦动物实验基本技术动物实验基本技术实验动物的抓取、保定与给药实验动物的抓取、保定与给药1实验动物的编号和分组实验动物的编号和分组2实验动物的麻醉实验动物的麻醉34实验动物的采血实验动物的采血第15页，此课件共84页哦大鼠大鼠豚鼠豚鼠家兔家兔犬犬一、一、一、一、抓取、保定抓取、保定抓取、保定抓取、保定与给药与给药与给药与给药小鼠小鼠第16页，此课件共84页哦小鼠的捉持小鼠的捉持1 1 1 1、用右手拇指和、用右手拇指和、用右手拇指和、用右手拇指和食指捏住小鼠尾食指捏住小鼠尾食指捏住小鼠尾食指捏住小鼠尾巴中部将小鼠提巴中部将小鼠提巴中部将小鼠提巴中部将
10、小鼠提起，放在饲养合起，放在饲养合起，放在饲养合起，放在饲养合的面罩上。的面罩上。的面罩上。的面罩上。用左手拇指和食用左手拇指和食用左手拇指和食用左手拇指和食指迅速、准确地指迅速、准确地指迅速、准确地指迅速、准确地捏住小鼠的两耳捏住小鼠的两耳捏住小鼠的两耳捏住小鼠的两耳后及颈背部的皮后及颈背部的皮后及颈背部的皮后及颈背部的皮肤，将小鼠提起。肤，将小鼠提起。肤，将小鼠提起。肤，将小鼠提起。翻翻翻翻转转转转左左左左手手手手掌掌掌掌，以以以以左左左左手手手手掌掌掌掌心心心心和和和和中中中中指指指指夹夹夹夹小小小小鼠鼠鼠鼠背背背背部部部部的的的的皮皮皮皮肤肤肤肤，使使使使小小小小鼠鼠鼠鼠整整整整个个个
11、个呈一条直线。呈一条直线。呈一条直线。呈一条直线。用左手拇指和食用左手拇指和食用左手拇指和食用左手拇指和食指迅速、准确地指迅速、准确地指迅速、准确地指迅速、准确地捏住小鼠的两耳捏住小鼠的两耳捏住小鼠的两耳捏住小鼠的两耳后及颈背部的皮后及颈背部的皮后及颈背部的皮后及颈背部的皮肤，将小鼠提起。肤，将小鼠提起。肤，将小鼠提起。肤，将小鼠提起。第17页，此课件共84页哦大鼠的捉持大鼠的捉持首先戴好防护手首先戴好防护手首先戴好防护手首先戴好防护手套套套套用右手拇指和食用右手拇指和食用右手拇指和食用右手拇指和食指抓住大鼠尾巴指抓住大鼠尾巴指抓住大鼠尾巴指抓住大鼠尾巴中部将大鼠提起，中部将大鼠提起，中部将大
12、鼠提起，中部将大鼠提起，放在大鼠饲养盒放在大鼠饲养盒放在大鼠饲养盒放在大鼠饲养盒的面罩上。的面罩上。的面罩上。的面罩上。左手顺势按、左手顺势按、左手顺势按、左手顺势按、卡在大鼠躯干卡在大鼠躯干卡在大鼠躯干卡在大鼠躯干背部，稍加压力向背部，稍加压力向背部，稍加压力向背部，稍加压力向头颈部滑行。头颈部滑行。头颈部滑行。头颈部滑行。以左手拇指和食以左手拇指和食以左手拇指和食以左手拇指和食指捏住大鼠两耳指捏住大鼠两耳指捏住大鼠两耳指捏住大鼠两耳后部的头颈皮肤，后部的头颈皮肤，后部的头颈皮肤，后部的头颈皮肤，其余三指和手掌其余三指和手掌其余三指和手掌其余三指和手掌握住大鼠背部皮握住大鼠背部皮握住大鼠背部
13、皮握住大鼠背部皮肤，完成抓取固肤，完成抓取固肤，完成抓取固肤，完成抓取固定。定。定。定。第18页，此课件共84页哦豚鼠的捉持豚鼠的捉持先用左手轻轻扣、先用左手轻轻扣、先用左手轻轻扣、先用左手轻轻扣、按住豚鼠背部。按住豚鼠背部。按住豚鼠背部。按住豚鼠背部。顺势抓紧其肩顺势抓紧其肩顺势抓紧其肩顺势抓紧其肩胛上方皮肤，胛上方皮肤，胛上方皮肤，胛上方皮肤，拇指和食指环箍拇指和食指环箍拇指和食指环箍拇指和食指环箍其颈部。其颈部。其颈部。其颈部。用右手轻轻托住其用右手轻轻托住其用右手轻轻托住其用右手轻轻托住其臀部，臀部，臀部，臀部，即可将豚鼠抓取即可将豚鼠抓取即可将豚鼠抓取即可将豚鼠抓取固定。固定。固定。
14、固定。第19页，此课件共84页哦兔的捉持兔的捉持用右手抓住兔颈部用右手抓住兔颈部用右手抓住兔颈部用右手抓住兔颈部的被毛和皮肤，轻的被毛和皮肤，轻的被毛和皮肤，轻的被毛和皮肤，轻轻把兔提起。轻把兔提起。轻把兔提起。轻把兔提起。用左手托住兔用左手托住兔用左手托住兔用左手托住兔的臀部的臀部的臀部的臀部家兔的固定方式家兔的固定方式家兔的固定方式家兔的固定方式有腹卧式和仰卧有腹卧式和仰卧有腹卧式和仰卧有腹卧式和仰卧式两种式两种式两种式两种第20页，此课件共84页哦犬的捉持犬的捉持实验者先抚摩，逐实验者先抚摩，逐实验者先抚摩，逐实验者先抚摩，逐步接近，勿使其惊步接近，勿使其惊步接近，勿使其惊步接近，勿使其
15、惊恐或将其激怒。恐或将其激怒。恐或将其激怒。恐或将其激怒。用粗棉绳兜住狗用粗棉绳兜住狗用粗棉绳兜住狗用粗棉绳兜住狗的下颌，并在上的下颌，并在上的下颌，并在上的下颌，并在上颌打结（勿太紧）颌打结（勿太紧）颌打结（勿太紧）颌打结（勿太紧）。如犬不合作，则如犬不合作，则如犬不合作，则如犬不合作，则先用一根特制长先用一根特制长先用一根特制长先用一根特制长柄狗头夹，从后柄狗头夹，从后柄狗头夹，从后柄狗头夹，从后面夹住犬颈，限面夹住犬颈，限面夹住犬颈，限面夹住犬颈，限制犬头部活动，制犬头部活动，制犬头部活动，制犬头部活动，再按上述方法捆再按上述方法捆再按上述方法捆再按上述方法捆住犬嘴。住犬嘴。住犬嘴。住犬
16、嘴。实验动物的捉拿.MPG第21页，此课件共84页哦灌胃给药灌胃给药大小鼠大小鼠1 1 1 1、将灌胃针连接在将灌胃针连接在将灌胃针连接在将灌胃针连接在注射器上，吸入一注射器上，吸入一注射器上，吸入一注射器上，吸入一定量的药液。定量的药液。定量的药液。定量的药液。左手捉持动物，左手捉持动物，左手捉持动物，左手捉持动物，使头部向上。使头部向上。使头部向上。使头部向上。右手持针，把灌胃右手持针，把灌胃右手持针，把灌胃右手持针，把灌胃针头的前端放进动针头的前端放进动针头的前端放进动针头的前端放进动物的口腔，顺着上物的口腔，顺着上物的口腔，顺着上物的口腔，顺着上腭部插入咽部，顺腭部插入咽部，顺腭部插入
17、咽部，顺腭部插入咽部，顺咽后壁轻轻往下推。咽后壁轻轻往下推。咽后壁轻轻往下推。咽后壁轻轻往下推。用右手食指将针用右手食指将针用右手食指将针用右手食指将针栓慢慢往下压，栓慢慢往下压，栓慢慢往下压，栓慢慢往下压，将注射器中的药将注射器中的药将注射器中的药将注射器中的药液灌入动物的胃液灌入动物的胃液灌入动物的胃液灌入动物的胃中。中。中。中。剂量：小鼠约剂量：小鼠约剂量：小鼠约剂量：小鼠约0.1-0.5ml0.1-0.5ml10g10g体重体重体重体重。最大体积为。最大体积为。最大体积为。最大体积为1.0ml/1.0ml/只只只只 大鼠约大鼠约大鼠约大鼠约1-2 ml1-2 ml100g100g体重体
18、重体重体重，最大体积为，最大体积为，最大体积为，最大体积为5.0ml/5.0ml/只只只只第22页，此课件共84页哦灌胃给药灌胃给药兔兔将兔放进固将兔放进固将兔放进固将兔放进固 定架内，定架内，定架内，定架内，灌胃者用左手拇指灌胃者用左手拇指灌胃者用左手拇指灌胃者用左手拇指和中指挤压兔两颊，和中指挤压兔两颊，和中指挤压兔两颊，和中指挤压兔两颊，将下颌挤开使兔被将下颌挤开使兔被将下颌挤开使兔被将下颌挤开使兔被动张口。动张口。动张口。动张口。右手将开口器右手将开口器右手将开口器右手将开口器从一侧口角插从一侧口角插从一侧口角插从一侧口角插入口腔并固定。入口腔并固定。入口腔并固定。入口腔并固定。胃管经
19、开口器的孔胃管经开口器的孔胃管经开口器的孔胃管经开口器的孔插入，向前推进约插入，向前推进约插入，向前推进约插入，向前推进约15cm15cm，可达胃，可达胃，可达胃，可达胃内。内。内。内。在插管时应将在插管时应将在插管时应将在插管时应将胃管另一端泡胃管另一端泡胃管另一端泡胃管另一端泡在水中确认没在水中确认没在水中确认没在水中确认没有冒气泡，即有冒气泡，即有冒气泡，即有冒气泡，即可用注射器经可用注射器经可用注射器经可用注射器经 胃管注入药液。胃管注入药液。胃管注入药液。胃管注入药液。豚鼠灌胃同豚鼠灌胃同家兔家兔第23页，此课件共84页哦皮下注射给药皮下注射给药大小鼠大小鼠颈背部、腋下、腹颈背部、腋
20、下、腹颈背部、腋下、腹颈背部、腋下、腹侧和后肢的皮下侧和后肢的皮下侧和后肢的皮下侧和后肢的皮下注射针头取一注射针头取一注射针头取一注射针头取一锐角角度锐角角度锐角角度锐角角度刺入刺入刺入刺入皮下。皮下。皮下。皮下。将针头轻轻向左右将针头轻轻向左右将针头轻轻向左右将针头轻轻向左右 摆动，摆动，摆动，摆动，易摆动易摆动易摆动易摆动则则则则表示已表示已表示已表示已 刺入皮下。刺入皮下。刺入皮下。刺入皮下。再轻轻再轻轻再轻轻再轻轻抽吸抽吸抽吸抽吸，如无回血，可如无回血，可如无回血，可如无回血，可缓慢地将缓慢地将缓慢地将缓慢地将 药物药物药物药物注入皮下注入皮下注入皮下注入皮下第24页，此课件共84页哦
21、静脉注射给药静脉注射给药大小鼠大小鼠将大小鼠放在金属笼将大小鼠放在金属笼将大小鼠放在金属笼将大小鼠放在金属笼或小鼠固定器或小鼠固定器或小鼠固定器或小鼠固定器 中，通中，通中，通中，通过金属笼或过金属笼或过金属笼或过金属笼或大小鼠固大小鼠固大小鼠固大小鼠固定器定器定器定器的孔拉出鼠尾的孔拉出鼠尾的孔拉出鼠尾的孔拉出鼠尾巴巴巴巴用左手捏住鼠用左手捏住鼠用左手捏住鼠用左手捏住鼠尾巴中下部，尾巴中下部，尾巴中下部，尾巴中下部，用用用用7575 酒精棉球反复酒精棉球反复酒精棉球反复酒精棉球反复擦拭尾部擦拭尾部擦拭尾部擦拭尾部注射时，以左手拇注射时，以左手拇注射时，以左手拇注射时，以左手拇指和中指捏住鼠尾
22、指和中指捏住鼠尾指和中指捏住鼠尾指和中指捏住鼠尾两侧，用食指从下两侧，用食指从下两侧，用食指从下两侧，用食指从下面托起尾，面托起尾，面托起尾，面托起尾，右手持右手持右手持右手持4 4号针头的号针头的号针头的号针头的注射器，使针头与注射器，使针头与注射器，使针头与注射器，使针头与 静脉平行静脉平行静脉平行静脉平行（小于（小于（小于（小于3030度角）度角）度角）度角）大鼠亦可用舌大鼠亦可用舌下静脉注射下静脉注射第25页，此课件共84页哦静脉注射给药静脉注射给药犬犬前肢皮下头静脉或前肢皮下头静脉或前肢皮下头静脉或前肢皮下头静脉或后肢小隐静脉注射后肢小隐静脉注射后肢小隐静脉注射后肢小隐静脉注射。先将
23、注射部位毛先将注射部位毛先将注射部位毛先将注射部位毛剪去剪去剪去剪去。在静脉血管的近在静脉血管的近在静脉血管的近在静脉血管的近心端，用乳胶管心端，用乳胶管心端，用乳胶管心端，用乳胶管扎紧肢体，使血扎紧肢体，使血扎紧肢体，使血扎紧肢体，使血管充盈，注射器管充盈，注射器管充盈，注射器管充盈，注射器针头向静脉血管针头向静脉血管针头向静脉血管针头向静脉血管的近心端方向穿的近心端方向穿的近心端方向穿的近心端方向穿刺刺刺刺。回抽注射器针栓，回抽注射器针栓，回抽注射器针栓，回抽注射器针栓，如有回血，则证如有回血，则证如有回血，则证如有回血，则证明针尖在血管内，明针尖在血管内，明针尖在血管内，明针尖在血管内，
24、即可推注药液。即可推注药液。即可推注药液。即可推注药液。第26页，此课件共84页哦静脉注射给药静脉注射给药兔兔兔放在固定架内，酒兔放在固定架内，酒兔放在固定架内，酒兔放在固定架内，酒精消毒并揉搓血管，精消毒并揉搓血管，精消毒并揉搓血管，精消毒并揉搓血管，使兔的耳缘静脉充盈。使兔的耳缘静脉充盈。使兔的耳缘静脉充盈。使兔的耳缘静脉充盈。用左手食指和中用左手食指和中用左手食指和中用左手食指和中指夹住兔的耳缘指夹住兔的耳缘指夹住兔的耳缘指夹住兔的耳缘静脉的近端，拇静脉的近端，拇静脉的近端，拇静脉的近端，拇指绷紧静脉的远指绷紧静脉的远指绷紧静脉的远指绷紧静脉的远端，无名指和小端，无名指和小端，无名指和小
25、端，无名指和小指放在耳郭下作指放在耳郭下作指放在耳郭下作指放在耳郭下作垫。垫。垫。垫。右手拿注射器，右手拿注射器，右手拿注射器，右手拿注射器，针尖的斜面朝上，针尖的斜面朝上，针尖的斜面朝上，针尖的斜面朝上，将针将针将针将针 头从远心端插入头从远心端插入头从远心端插入头从远心端插入血管血管血管血管回抽有血即可注射，回抽有血即可注射，回抽有血即可注射，回抽有血即可注射，拔针后用棉球止血拔针后用棉球止血拔针后用棉球止血拔针后用棉球止血豚鼠可用足背豚鼠可用足背静脉注射静脉注射实验动物的实验动物的给药给药.MPG第27页，此课件共84页哦不同种类实验动物一次给药能耐受的最大容量（ml）动物名称灌胃皮内注
26、射皮下注射肌肉注射腹腔注射静脉注射小鼠1.00.11.50.210.8大鼠5.00.15.00.524.0兔1000.2102.0510猫1500.2102.0510猴3000.3503.01020犬2500.31004.0-100第28页，此课件共84页哦人与动物用药量换算一般可按下列比例换算：一般可按下列比例换算：人用药量为人用药量为1 1，小鼠、大鼠为，小鼠、大鼠为25-5025-50倍，兔、豚鼠为倍，兔、豚鼠为15-2015-20倍，犬倍，犬猫为猫为5-105-10倍。倍。此外，可以采用人与动物的体表面积计算法来换算。此外，可以采用人与动物的体表面积计算法来换算。第29页，此课件共84
27、页哦u二、实验动物的采血二、实验动物的采血 5 52 23 31 1尾尖采血尾尖采血尾尖采血尾尖采血眼眶静脉丛采血眼眶静脉丛采血眼眶静脉丛采血眼眶静脉丛采血断头采血断头采血断头采血断头采血腹主动脉采血腹主动脉采血4 4心脏采血心脏采血心脏采血心脏采血腹主动脉采血腹主动脉采血腹主动脉采血腹主动脉采血6 6静脉采血静脉采血静脉采血静脉采血第30页，此课件共84页哦方法：方法：固定动物并露出鼠尾，将尾部在45的温水中浸泡数分钟（或以二甲苯棉球涂擦），使尾部血管扩张。将鼠尾擦干，用锐器切去尾尖0.30.5cm，让血液滴入盛器或直接以血红蛋白吸管吸取。对象：对象：大、小鼠特点：特点：小量采血，可以多次采
28、血。1尾尖采血尾尖采血第31页，此课件共84页哦方法：方法：用左手捉鼠，拇指及中指抓住头颈部皮肤，食指按于眼后，使眼球轻度突出，眼底球后静脉丛淤血。右手持取内径为取内径为1.0-1.5mm1.0-1.5mm的玻璃毛细管（临用前折断成的玻璃毛细管（临用前折断成1-1.5cm1-1.5cm长的毛细管段，浸入长的毛细管段，浸入1 1肝素溶液中，干燥后用）肝素溶液中，干燥后用）刺入深度小鼠23mm，大鼠45mm。当感到有阻力时再稍后退，得到所需要的血量后，拔出。对象：对象：大、小鼠等。特点：特点：中等血量（0.20.3ml，小鼠；0.51.0ml，大白鼠），避免动物死亡。2眼眶静脉丛采血眼眶静脉丛采血
29、眼眶静脉丛采血眼眶静脉丛采血第32页，此课件共84页哦方法：方法：左手以拇指和食指保持动物的头颈部，使其头略下倾，右手持剪刀猛力剪断鼠颈，让血液滴入盛器。对象：对象：大、小鼠等。特点：特点：需要血量较大（小白鼠可采血0.81.0ml，大白鼠可采血5.08.0ml），且不需要继续保存动物生命时用本法。3断头采血断头采血 第33页，此课件共84页哦方法：方法：动物要麻醉后进行，用针管在腹主动脉分叉处，与血管平行刺入。对象：对象：大、小鼠等。特点：特点：需要血量较大，且不需要继续保存动物生命时用本法。4腹主动脉采血腹主动脉采血第34页，此课件共84页哦方法：方法：将动物背位固定，在左胸第2至第4肋间
30、剪毛一块，用碘酒和酒精消毒。然后用配有7号针头的10ml注射器，在心跳最明显处作穿刺。针头刺入心脏后即见血液流入注射器；或边刺边抽，直至血液流入注射器。取得所需血量后，迅速将针头拔出，这样心肌上的穿刺孔较易闭合。对象：对象：兔、豚鼠等。特点：特点：采血量较大，继续保存动物生命。5心脏采血心脏采血第35页，此课件共84页哦方法：方法：将家兔放在固定箱内，剪去拟采血耳壳上的毛，用电灯照射加热或用二甲苯棉球涂擦耳壳，使耳部血管扩张。用粗针头刺破耳缘静脉或以刀片在血管上切一小口，让血液自然流出，滴入已放有抗凝剂的盛器中。采血完毕，用干棉球压住出血口，以待止血。如一时不易止血，可用木夹夹住耳壳1020分
31、钟。对象：对象：犬在前肢静脉、后肢小隐静脉采血；小型猪为耳大静脉、后肢静脉特点：特点：采血量较大，继续保存动物生命。6静脉采血静脉采血第36页，此课件共84页哦三、实验动物被毛去除方法实验动物被毛去除方法 拔毛法：用拇指和食指拔去被毛的方法 剪毛法：用剪刀紧贴皮肤剪去被毛剃毛法：用剃毛刀剃去动物被毛。脱毛法：用化学药品脱去动物被毛。第37页，此课件共84页哦四、实验动物编号与分组四、实验动物编号与分组（一）编号（一）编号：1 1、单单色色涂涂染染法法：在在每每组组动动物物不不超超过过l0l0只只或或一一个个实实验不超过验不超过4040只的情况下适用。只的情况下适用。实验动物：大鼠、小鼠。实验动
32、物：大鼠、小鼠。常用染色常用染色剂剂：3-53-5苦味酸溶液，苦味酸溶液，可染成黄色。可染成黄色。第38页，此课件共84页哦 方法步骤：方法步骤：(1)(1)涂染原则：从左到右、从上到下。涂染原则：从左到右、从上到下。(2)(2)左前肢为左前肢为l l号、左侧腹部号、左侧腹部2 2号、号、左后肢左后肢3 3号。号。(3)(3)两耳后部两耳后部4 4号、背中部号、背中部5 5号、号、后肢背部后肢背部6 6号。号。(4)(4)右前肢右前肢7 7号、号、右侧腹部右侧腹部8 8号、号、右后肢右后肢9 9号。号。(5)(5)尾巴根尾巴根为为1010号。号。（6 6）额额部部为为2020号号第39页，此课
33、件共84页哦 2 2、双色涂染法：、双色涂染法：在每组动物不超过在每组动物不超过100100只的情况下用。只的情况下用。实验动物：大鼠、小鼠。实验动物：大鼠、小鼠。常用染色剂常用染色剂：(1)3-5(1)3-5苦味酸溶液苦味酸溶液，可染成黄色。，可染成黄色。作为作为“个个”位数。位数。(2)0.5%(2)0.5%中性中性红红或品或品红红溶液溶液，可染，可染 成成红红色。色。作作为为“十十”位数。位数。第40页，此课件共84页哦方法步骤：方法步骤：(1)(1)用两种颜色同时进行染色标记。用两种颜色同时进行染色标记。(2)(2)用苦味酸用苦味酸(黄色黄色)染色染色标记标记作作为为个位数。个位数。(
34、3)(3)用品红用品红(红色红色)染色标记作为十位数，染色标记作为十位数，（4 4）左前肢为）左前肢为1010号、号、左侧腹部左侧腹部2020号、号、左后肢左后肢3030号，号，两耳后部两耳后部4040号、号、背部背部5050号、号、后肢背部后肢背部6060号，号，右前肢右前肢7070号、号、右右侧侧腹部腹部 8080号、号、右后肢右后肢9090号号 第第100100号不作染色号不作染色标记标记。第41页，此课件共84页哦3 3、穿耳孔法、穿耳孔法 用专用耳空器在动物耳朵不同部位打一小孔或缺口表示一定用专用耳空器在动物耳朵不同部位打一小孔或缺口表示一定号码的方法，号码的方法，原则是：左耳代表十
35、位，右耳代表个位。原则是：左耳代表十位，右耳代表个位。实验动物：实验动物：兔、犬、猪兔、犬、猪4 4、标牌法、标牌法 一般挂在动物的颈部、耳朵、脚上或一般挂在动物的颈部、耳朵、脚上或 实验动物：犬、猴实验动物：犬、猴5 5、烙印法、烙印法直接把标记编号烙印在实验动物身体上的方法，尤如盖印章一样。直接把标记编号烙印在实验动物身体上的方法，尤如盖印章一样。第42页，此课件共84页哦 左耳左耳 右耳右耳101252050耳缘编号第43页，此课件共84页哦一般来说，大、小鼠多采用染色法，豚鼠、家兔宜使用耳孔一般来说，大、小鼠多采用染色法，豚鼠、家兔宜使用耳孔法，犬、猴、猫较适合挂牌法，犬还可用烙印法。
36、法，犬、猴、猫较适合挂牌法，犬还可用烙印法。第44页，此课件共84页哦四、实验动物编号与分组四、实验动物编号与分组（二）分组（二）分组：1 1、组别的要求：、组别的要求：正常对照组正常对照组 模型组模型组 阳性药组阳性药组 药物不同剂量组药物不同剂量组第45页，此课件共84页哦（1 1）正常对照组）正常对照组 要求不加任何处理，指在正常条件下进行观察和对照，给药组如是灌胃给药，对照组应用灌胃溶剂。目的对比观察模型是否成功；观察被试药能否使病理改变恢复正常。（2 2）阳性）阳性药对照组药对照组 要求所选药必须是药典所有的或国家批准的药，如用西药，则采用公认的，疗效可靠的。目的说明所用方法的可靠性
37、；对比新药的优劣和特点。（3 3）模型对照组）模型对照组 要求除不用药外，其他处理同给药组，模型要符合中医证或病的模型。目的对比观察受试药的药理作用。第46页，此课件共84页哦（4 4）药物组）药物组一般应设三个剂量组，大动物，操作特殊困难者可设两个剂量组；能够测出LD50的受试药物，动物试验给药剂量一般为1/101/5 LD50；很多中药制剂毒性甚小，无法测出LD50者，一般常用人用剂量（g或mg生药/kg体重）来折算动物用量；正式实验时常以等效剂量作为中剂量或小剂量，大、中、小剂量差以23的等比级数为宜；第47页，此课件共84页哦完全随机分组完全随机分组 完完全全随随机机分分组组时时将将试
38、试验验对对象象完完全全按按随随机机原原则则分分组组。它它的的设设计计、分组、和统计处理都比较简单，但试验效率较低。分组、和统计处理都比较简单，但试验效率较低。例：将例：将3030只只SD SD 大鼠随机分配到甲、乙、丙大鼠随机分配到甲、乙、丙3 3组。组。使用使用excelexcel对试验对象完全随机分组的操作步骤如下对试验对象完全随机分组的操作步骤如下:（二）分组的方法（二）分组的方法第48页，此课件共84页哦1.1.在在单单元元格格A1A1、B1B1、C1C1中中分分别别键键入入编编号号、随随机机号号、分分组组号号，随随后后在在A2A2、A3A3中中分分别别键键入入1 1、2 2，然然后后
39、拖拖动动鼠鼠标标利利用用excelexcel的的自自动动填填充充功功能能完完成成1 13030的编号。的编号。2.2.在在B2B2单单元元格格键键入入“=RAND()=RAND()”后后回回车车产产生生一一个个随随机机数数字字，然然后后同同样样利利用用其其自自动动填填充充功功能能在在B2B2B31B31生生成成一一列列随随机机数数。需需注注意意的的是是这这里里产产生生的的随随机机数数是是会会随随着着单单元元格格的的操操作作而而变变化化的的。故故需需选选中中“B2B2”至至“B31B31”单单元元格格区区域域,复复制制所所选选中中的的区区域域,并并以数据格式进行选择性粘贴。以数据格式进行选择性粘
40、贴。第49页，此课件共84页哦3.3.选选中中A A 列列、B B 列列,单单击击菜菜单单栏栏“数数据据”“排排序序”,在在弹弹出出的的对对话话框框中中,选选择择以以随随机机数数”为为排排序序的的“主主要要关关键键字字”,按按“确定确定”按扭按扭,则按则按B B 列随机数字的大小完成列随机数字的大小完成A A 列、列、B B 列的排序。列的排序。4.4.分分别别在在C2C2C11C11、C12C12C21 C21 和和C22C22C31 C31 单单元元格格中中,依依次次键键入入“1 1”、“2 2”、“3 3”;用用鼠鼠标标同同时时选选中中A A、B B、C C 列列,单单击击菜菜单单栏栏“
41、数数据据”“排排序序”命命令令,在在弹弹出出的的“排排序序”对对话话框框中中,选选择择以以“编编号号”为为排排序序的的“主主要要关关键键字字”,这这样样就就可以得到各个实验对象的分组编号。（见表可以得到各个实验对象的分组编号。（见表1 1）第50页，此课件共84页哦随机区组分组随机区组分组 随随机机区区组组分分组组是是按按照照一一定定条条件件，将将几几个个条条件件相相同同的的试试验验对对象象分分为为一一个个区区组组，然然后后在在每每个个区区组组内内部部按按随随机机化化原原则则，将将每每个个对对象象分分配配到到各各组。组。例例：将将SDSD大大鼠鼠3232只只，体体重重180g180g220g,
42、220g,按按体体重重大大小小配配成成8 8 个个单单位位组组,每每个个单单位位组组中中的的4 4 只只大大鼠鼠随随机机分分配配接接受受A A、B B、C C、D D 4 4 种种处处理理,试试给给出随机化分组的结果出随机化分组的结果 1.1.在在单单元元格格A1A1、B1B1、C1C1中中分分别别键键入入编编号号、区区组组号号、随随机机号号，随随后后在在A2A3A2A3中中分分别别键键入入1 1、2 2，然然后后拖拖动动鼠鼠标标利利用用excelexcel的的自自动动填填充充功能完成功能完成1 13232的编号。的编号。2.2.在在C2C2单单元元格格键键入入“=RAND()=RAND()”
43、后后回回车车产产生生一一个个随随机机数数字字，然然后后同同样样利利用用其其自自动动填填充充功功能能在在C2C2C33C33生生成成一一列列随随机机数数。需需注注意意的的是是这这里里产产生生的的随随机机数数是是会会随随着着单单元元格格的的操操作作而而变变化化的的。故故需需选选中中“C2C2”至至“C33C33”单单元元格格区区域域,复复制制所所选选中中的的区区域域,并并以以数数据据格格式进行选择性粘贴。式进行选择性粘贴。第51页，此课件共84页哦3.3.选选中中A A、B B、C C 列列,单单击击菜菜单单栏栏“数数据据”“排排序序”,在在弹弹出出的的“排排序序”对对话话框框中中,选选择择以以“
44、区区组组”为为“主主要要关关键键字字”排排序序“,随机数随机数”为为“次要关键字次要关键字”排序排序,然后然后,单击单击“确定确定”按钮按钮,即完成以区组单位的随机数字排序即完成以区组单位的随机数字排序4.4.分分别别在在C2C2C11C11、C12C12C21 C21 和和C22C22C31 C31 单单元元格格中中,依依次次键键入入“1 1”、“2 2”、“3 3”;用用鼠鼠标标同同时时选选中中A A、B B、C C 列列,单单击击菜菜单单栏栏“数数据据”“排排序序”命命令令,在在弹弹出出的的“排排序序”对对话话框框中中,选选择择以以“编编号号”为为排排序序的的“主主要要关关键键字字”,这
45、这样样就可以得到各个实验对象的分组编号。就可以得到各个实验对象的分组编号。5.5.在在“D1D1”中中键键入入“分分组组号号”,在在“D2D2”、“D3D3”、“D4D4”和和“D5D5”中中分分别别依依次次键键入入“1 1”、“2 2”、“3 3”和和“4 4”,对对余下的各个区组余下的各个区组,同样依次输入同样依次输入“1 1”、“2 2”、“3 3”和和“4 4”,作为同一区组内作为同一区组内4 4 对象的分组号。对象的分组号。第52页，此课件共84页哦 6.6.单单击击菜菜单单栏栏“数数据据”“排排序序”,在在弹弹出出的的对对话话框框中中,选选择择“编编号号”为为排排序序的的“主主要要
46、关关键键字字”,单单击击“确确定定”按按钮钮,这样就可以得到各个实验对象的分组编号。（见表这样就可以得到各个实验对象的分组编号。（见表2 2）第53页，此课件共84页哦分层分组法：分层分组法：将动物先按雌雄分层，然后分别称体重，将体重相同的放在一起，不同体重的动物放在不同的动物盒中，按实验设计要求分别放在各组动物盒中，使每只动物都有相同的机会分配到各组，如此分组的结果，各实验组动物平均体重基本一致。第54页，此课件共84页哦抽签法：抽签法：如有小鼠如有小鼠4040只，要随机分为四组，可将小鼠从只，要随机分为四组，可将小鼠从1-401-40编号，将准备的号编号，将准备的号签也编签也编1-401-
47、40号，然后将号签充分混合后，随机各抽号，然后将号签充分混合后，随机各抽1010个号，然后对号个号，然后对号将小鼠分配到各个组去；将小鼠分配到各个组去；第55页，此课件共84页哦摸球法：摸球法：如实验所需设四组，即可用如实验所需设四组，即可用4040只雌雄各半的小鼠，将小鼠按体重大小只雌雄各半的小鼠，将小鼠按体重大小排列，雄性鼠编为排列，雄性鼠编为1-201-20号，雌性鼠编为号，雌性鼠编为21-4021-40号，然后用红、黄、蓝、号，然后用红、黄、蓝、绿四种彩球表示甲、乙、丙、丁四组，将数量相等四种颜色的球放入绿四种彩球表示甲、乙、丙、丁四组，将数量相等四种颜色的球放入一个口袋里，充分混合后
48、，每次摸取都要彻底混合，每次摸出一个，一个口袋里，充分混合后，每次摸取都要彻底混合，每次摸出一个，然后放回袋中，若第一次摸出是红球，就将第一鼠放入甲组，第二次然后放回袋中，若第一次摸出是红球，就将第一鼠放入甲组，第二次摸出的绿球，就将第二号放入丁组，第三次摸出的又是红球，因已出摸出的绿球，就将第二号放入丁组，第三次摸出的又是红球，因已出现过红球，可不计再放回口袋，重新摸取，第四次摸出的篮球，将第现过红球，可不计再放回口袋，重新摸取，第四次摸出的篮球，将第三号鼠放入丙组，第四号鼠不必再摸球决定，剩下的乙组就是第四号三号鼠放入丙组，第四号鼠不必再摸球决定，剩下的乙组就是第四号鼠，如此类推，将鼠分配
49、完毕。鼠，如此类推，将鼠分配完毕。第56页，此课件共84页哦五、实验动物的麻醉五、实验动物的麻醉动物麻醉是消除动物手术疼痛，便于实验操作，保证动物安全，为手动物麻醉是消除动物手术疼痛，便于实验操作，保证动物安全，为手术创造良好的条件。术创造良好的条件。动物全身麻醉分四期：动物全身麻醉分四期：1.1.第一期：随意兴奋期，出现运动与运动失调；第一期：随意兴奋期，出现运动与运动失调；2.2.第二期：不随意兴奋期，由意识完全丧失至规则的自动呼第二期：不随意兴奋期，由意识完全丧失至规则的自动呼吸开始时止。吸开始时止。3.3.第三期：外科麻醉期，第三期：外科麻醉期，4.4.第四期：延髓麻醉期，进入此期，麻
50、醉已严重过量。第四期：延髓麻醉期，进入此期，麻醉已严重过量。第57页，此课件共84页哦麻醉方法与麻醉药麻醉方法与麻醉药麻醉方法：全身麻醉和局部麻醉，通过吸入、注射（静脉、麻醉方法：全身麻醉和局部麻醉，通过吸入、注射（静脉、皮下、肌肉、腹腔）、口服、灌胃等方法使动物麻醉。皮下、肌肉、腹腔）、口服、灌胃等方法使动物麻醉。常用麻醉药物：乙醚（吸入），戊巴比妥钠、硫贲妥钠、氯胺酮（静常用麻醉药物：乙醚（吸入），戊巴比妥钠、硫贲妥钠、氯胺酮（静脉），普鲁卡因、利多卡因（局麻）脉），普鲁卡因、利多卡因（局麻）第58页，此课件共84页哦常用麻醉药的剂量及注射途径种类种类戊巴比妥戊巴比妥硫贲妥钠硫贲妥钠盐酸氯