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1、 回忆已学知识，你是否已经见到过动物细胞融合的实例？人人-鼠鼠(想像图想像图)第1页/共25页动物细胞融合与单克隆抗体 第2页/共25页鼠细胞人细胞人工诱导一、动物细胞融合杂交细胞动物细胞融合（技术）：是指（在一定的条件下）两个或多个细胞融合形成一个细胞的过程。1 1、概念：、概念：第3页/共25页2 2、诱导融合的因素、诱导融合的因素化学法：化学法：聚乙二醇聚乙二醇(PEG)(PEG)诱导融合诱导融合.物理法：物理法：电激电激融合融合生物法：生物法：灭活的病毒灭活的病毒诱导融合诱导融合.病毒颗粒黏 附细胞表面细胞膜连接细胞膜被 病毒颗粒穿通细胞融合、形成杂种细胞 为什么灭活的病毒能作诱导剂？
2、灭活丧失感染性但保留融合活性第4页/共25页获得杂种植株物理、化学方法（同左）灭活的病毒物理（离心、振荡、电激）化学（聚乙二醇）直接诱导细胞融合去壁原生质体融合诱导新壁杂种植株细胞膜的流动性细胞膜的流动性结果诱导方法步骤融合的原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物、动物细胞融合的比较获得杂交细胞小结第5页/共25页3、动物细胞融合技术的意义和应用第6页/共25页问题：抗体由什么细胞产生？其化学本质是什么？与抗原作用的特点？主要分布在哪里？二、单克隆抗体的制备第7页/共25页抗体的传统生产方法：从血清中分离抗体 该法制备抗体的特点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差。多种浆细胞动物体内多种抗体
3、抗原 第8页/共25页提示：每一个效应B淋巴细胞只分泌一种化学性质单一，特异性强的抗体。如果利用单个效应B淋巴细胞进行无性繁殖（克隆），形成细胞群，这样的细胞群就有可能产生出化学性质单一、特异性强的抗体单克隆抗体。问题：怎样获得化学性质单一、特异性强的抗体呢？第9页/共25页材料：效应B细胞在体内只能由B淋巴细胞增殖、分化而来,不再进行分裂,在体外培养的条件下，也很难分裂。思考：用什么方法才能让B淋巴细胞在体外培养时既能产生抗体又能无限增殖?第10页/共25页杂交瘤细胞动物细胞培养技术动物细胞融合技术单克隆抗体 既能产生特异性抗体，又能大量繁殖的细胞骨髓瘤细胞能无限增殖+一个浆细胞只分泌一种特
4、异性抗体设计方案：米米尔尔斯斯坦坦科科勒勒第11页/共25页读下面一段文字资料，找出单克隆抗体的概念 人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。单克隆抗体的概念单:单个细胞 克隆:无性繁殖单克隆抗体:单个细胞克隆产生的化学性质单一特异性强的抗体第12页/共25页单克隆抗体的制备问题思考问题思考Q1Q2细胞两两融合后，有哪些类型？B-B;B-瘤;瘤-瘤哪种是需要的类型，要筛选吗？第13页/共25页细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径
5、能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，可是能不断分裂增殖。你想到筛选杂交瘤细胞的方案了么？小资料：第14页/共25页单克隆抗体的制备问题思考问题思考Question经过选择培养基筛选的杂交瘤细胞群进行克隆是否就得到产生纯度高的抗体？还需怎么办？第15页/共25页有限稀释法稀释多次稀释 对能产生特异性抗体的单个杂交瘤细胞进行克隆，即单细胞克隆。由它产生的抗体，即单克隆抗体。将培养皿孔内的上清液取出，检测抗体。多孔细胞培养板第16页/共25页单克隆抗体杂交杂交 细胞细胞灭活的病毒灭活的病毒等手段等手段小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤
6、细胞B B淋巴细胞淋巴细胞经经免疫免疫的小鼠的小鼠提取杂交瘤细胞杂交瘤细胞第第一一次筛选次筛选用特定的选择培养基第第二二次筛选次筛选能产生专一抗体的杂交瘤细胞能产生专一抗体的杂交瘤细胞体外体外培养培养注射到小鼠注射到小鼠腹腔腹腔提取单克隆抗体提取单克隆抗体4.单抗制备过程中应用了那些技术？动物细胞融合、动物细胞培养1.此过程中至少进行了几次筛选？目的相同吗？3.单克隆抗体的优点？特异性强，灵敏度高，可大量制备。2.最终从哪儿提取单克隆抗体？第17页/共25页（1）作为诊断试剂最广泛应用准确、高效、简易、快速（如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等）三、单克隆抗体的应用第18页/共25
7、页（2）治疗疾病和运载药物生物导弹生物导弹 =单克隆抗体单克隆抗体 +药物（药物（治疗肿瘤）治疗肿瘤）(“(“生物导弹生物导弹”单抗导向，单抗导向，药物药物为弹头为弹头)单克隆抗体的应用疗效高、副作用小第19页/共25页1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.经过免疫的B淋巴细胞 B.没经过免疫的T淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的淋巴细胞A2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A.诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段基本相同 C.操作步骤基本相同 D.都能形成杂种细胞 D第20页/
8、共25页3.单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是（）A.由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合 B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成 C.由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D.由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成 D4.只能使动物细胞融合的常用诱导方法是（）APEG B灭活的病毒 C电刺激 D离心B第21页/共25页5.5.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 （）淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B B淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞A.B.A.B.C.C.D.D.C6.“生物导弹”是指（）A.单克隆抗体 B.杂交瘤细胞C.产生特定抗体的B淋巴细胞 D.在单克隆抗体上连接抗癌药物 D第22页/共25页单克隆抗体的制备第23页/共25页有梦想，才会有创造！已成功的动物细胞融合实例有很多，如人小鼠、人兔、人鸡、鼠兔、鸡鼠等上百种融合细胞。甚至已成功完成了酵母菌鸡、人胡萝卜 等细胞的融合。想了解更多信息，可通过网络、电视、杂志等途径关注细胞融合和单克隆抗体的最新信息。生物种间杂交想像图第24页/共25页感谢您的观看！第25页/共25页