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1、高中生物选修三动物细胞融合和单克隆抗体第1页，此课件共22页哦 回忆已学知识，你是否已经见到过动物细胞融合的实例？人人人人-鼠鼠鼠鼠(想像图想像图想像图想像图)第2页，此课件共22页哦2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体动物细胞融合与单克隆抗体 第3页，此课件共22页哦鼠细胞鼠细胞人细胞人细胞人工诱导人工诱导一、动物一、动物细胞融合细胞融合杂交细胞杂交细胞动物细胞融合（技术）：是指（在一定动物细胞融合（技术）：是指（在一定的条件下）的条件下）两个或多个细胞两个或多个细胞融合形成融合形成一个细胞一个细胞的过程。的过程。1 1、概念：、概念：、概念：、概念：第4页，此课件共22页哦2 2、诱导融合的
2、因素、诱导融合的因素化学法：化学法：聚乙二醇聚乙二醇(PEG)(PEG)诱导融合诱导融合.物理法：物理法：电激电激融合融合生物法：生物法：灭活的病毒灭活的病毒诱导诱导融合融合.病毒颗粒黏病毒颗粒黏 附细胞表面附细胞表面细胞膜连接细胞膜连接细胞膜被细胞膜被 病毒颗粒穿通病毒颗粒穿通细胞融合、形成杂种细胞细胞融合、形成杂种细胞 为什么为什么灭活的病毒灭活的病毒能作诱导剂能作诱导剂？灭活丧失感染性灭活丧失感染性但保留融合活性但保留融合活性第5页，此课件共22页哦获得杂种植株获得杂种植株物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、振物理（离心、振荡、电激）荡、电激）化学
3、（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）直接诱直接诱导细胞融合导细胞融合去壁去壁原生质体原生质体融合融合诱诱导新壁导新壁杂种植株杂种植株细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性结果结果诱导方法诱导方法步骤步骤融合的原理融合的原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目植物、动物细胞融合的比较植物、动物细胞融合的比较获得杂交细胞获得杂交细胞小结小结第6页，此课件共22页哦3 3、动物、动物细胞融合技术的细胞融合技术的意义意义和和应用应用第7页，此课件共22页哦问题问题：抗体由什么细胞产生？其化学本质是什么？与抗原作用的特点？主要分布在哪里？二、单克隆抗体的制备二、
4、单克隆抗体的制备第8页，此课件共22页哦抗体的传统生产方法抗体的传统生产方法：从从血血清清中中分分离离抗抗体体 该法制备抗体的特点该法制备抗体的特点：产量低、纯度低产量低、纯度低，且抗，且抗体的体的特异性差特异性差。多多种种浆浆细细胞胞动动物物体体内内多多种种抗抗体体抗抗原原 第9页，此课件共22页哦提示：提示：每一个效应每一个效应B B淋巴细胞只分泌一种淋巴细胞只分泌一种化学性质单一，化学性质单一，特异性强的抗体特异性强的抗体。如果利用单个效应如果利用单个效应B B淋巴细胞进行无性繁殖（克隆），淋巴细胞进行无性繁殖（克隆），形成细胞群，这样的细胞群就有可能产生出形成细胞群，这样的细胞群就有可
5、能产生出化学性质单化学性质单一一、特异性强特异性强的抗体的抗体单克隆抗体单克隆抗体。问题：问题：怎样获得化学性质单一、特异性强的抗体呢？怎样获得化学性质单一、特异性强的抗体呢？第10页，此课件共22页哦材料：材料：效应效应B细胞在体内只能由细胞在体内只能由B淋巴细胞增殖、分化淋巴细胞增殖、分化而来而来,不再进行分裂不再进行分裂,在体外培养的条件下，也在体外培养的条件下，也很难分裂很难分裂。思考：用什么方法才能让思考：用什么方法才能让B淋巴细胞在体外培养时既淋巴细胞在体外培养时既能能产生抗体产生抗体又能又能无限增殖无限增殖?第11页，此课件共22页哦杂交瘤细胞杂交瘤细胞动物细胞培养技术动物细胞培
6、养技术动物细胞融合技术动物细胞融合技术单单克克隆隆抗抗体体 既能产生特异性抗体，既能产生特异性抗体，又能大量繁殖的细胞又能大量繁殖的细胞骨髓骨髓瘤细胞瘤细胞能无限增殖能无限增殖+一个一个浆细胞只分泌浆细胞只分泌一一种种特异性抗体特异性抗体设计方案：设计方案：米米米米尔尔尔尔斯斯斯斯坦坦坦坦科科科科勒勒勒勒第12页，此课件共22页哦读下面一段文字资料，读下面一段文字资料，找出单克隆抗体的概念找出单克隆抗体的概念 人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B B细胞可细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是
7、每个B B细胞只分泌一种化学细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B B细胞进行无性繁殖，即克隆。细胞进行无性繁殖，即克隆。单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念单单:单个细胞单个细胞 克隆克隆:无性繁殖无性繁殖单克隆单克隆抗体抗体:单个细胞克隆产生的单个细胞克隆产生的化学性质单一特异化学性质单一特异性强性强的抗体的抗体第13页，此课件共22页哦单克隆抗体的制备问题思考问题思考Q1Q2细胞两两融合后，有胞两两融合后，有哪些哪些类型？型？B-B;B-瘤瘤;瘤瘤-瘤瘤哪种是需要的哪种是需要的类型，型，要要
8、筛选吗？第14页，此课件共22页哦细胞合成细胞合成DNADNA有有D D和和S S两条途径，其中两条途径，其中D D途径能被氨基途径能被氨基嘌呤阻断。嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种人淋巴细胞中有这两种DNADNA的合成途径，但一般不分的合成途径，但一般不分裂增殖。裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中只有鼠骨髓瘤细胞中只有D D途径，没有途径，没有S S途径，可是能不途径，可是能不断分裂增殖。断分裂增殖。你想到筛选杂交瘤细胞的方案了么？你想到筛选杂交瘤细胞的方案了么？小资料：小资料：第15页，此课件共22页哦单克隆抗体的制备问题思考问题思考Question经过选择培养基培养基筛选的的杂交瘤交瘤细胞群胞群进行克
9、隆是否就得行克隆是否就得到到产生生纯度高度高的抗的抗体？体？还需怎么需怎么办？第16页，此课件共22页哦有限稀释法稀释多次稀释稀释 对能产生特异性抗体的单个杂交瘤细胞进行克隆，即单细胞克隆。由它产生的抗体，即单克隆抗体。将培养皿孔内的上清液取出，检测抗体。多孔细胞培养板多孔细胞培养板第17页，此课件共22页哦单克隆抗体杂交杂交杂交杂交 细胞细胞细胞细胞灭活的病毒灭活的病毒灭活的病毒灭活的病毒等手段等手段等手段等手段小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B B淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞经经经经免疫免疫免疫免疫的小鼠的小鼠的小鼠的小鼠提取提取杂交瘤细胞杂交瘤细胞第第一一次筛
10、选次筛选用特定的用特定的选择培养基选择培养基第第二二次筛选次筛选能产生专一抗体的杂交瘤细胞能产生专一抗体的杂交瘤细胞体外体外体外体外培养培养培养培养注射到小鼠注射到小鼠注射到小鼠注射到小鼠腹腔腹腔腹腔腹腔提取单克隆抗体提取单克隆抗体提取单克隆抗体提取单克隆抗体4.单抗制备过程中应用了那些技术？动物细胞融合、动物细胞培养1.此过程中至少进行了几次筛选？目的相同吗？3.单克隆抗体的优点？特异性强，灵敏度高，可大量制备。2.最终从哪儿提取单克隆抗体？第18页，此课件共22页哦（1）作为诊断试剂）作为诊断试剂最广泛应用最广泛应用准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速（如同位素标记（如同位素标记单
11、克隆抗体，可单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血诊断肿瘤、心血管畸形等）管畸形等）三、单克隆抗体的应用三、单克隆抗体的应用第19页，此课件共22页哦（2）治疗疾病和运载药物）治疗疾病和运载药物生物导弹生物导弹生物导弹生物导弹 =单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体 +药物（药物（药物（药物（治疗肿瘤）治疗肿瘤）治疗肿瘤）治疗肿瘤）(“(“生物导弹生物导弹生物导弹生物导弹”单抗导向，单抗导向，单抗导向，单抗导向，药物药物药物药物为弹头为弹头为弹头为弹头)单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用疗效高、副作用小疗效高、副作用小第20页，此课件共22页哦1 1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞
12、，、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.A.经过免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 B.B.没经过免疫的没经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞C.C.经过免疫的经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D.D.没经过免疫的淋巴细胞没经过免疫的淋巴细胞A2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A.诱导融合的方法完全相同诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段基本相同所用的技术手段基本相同 C.操作步骤基本相同操作步骤
13、基本相同 D.都能形成杂种细胞都能形成杂种细胞 D第21页，此课件共22页哦3.单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是（单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是（）A.由小鼠能产生抗体的由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合淋巴细胞与肝细胞融合 B.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成淋巴细胞诱导融合而成 C.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成 D4.4.只能使动物细胞融合的常用诱导方法是（只能使动物细胞融合的常用诱导方法是（）A APEGPEG B B灭活的病毒灭活的病毒 C C电刺激电刺激 D D离心离心B第22页，此课件共22页哦