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1、皮肤性病科真菌检查技术操作规范一、真菌直接镜检是一种方便、准确诊断真菌病的检测方法。此法简便易行,阳性可明确真菌 是否存在,结合临床表现可确诊皮肤真菌病,但一般不能确定致病菌种类,而且 阴性不能完全排除真菌病诊断。【适应证】各种浅部、深部真菌病。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1 .用钝刀刮取皮损边缘部的皮屑,或用小刀刮取变色松脆的甲屑,用拔毛镒 拔取病发,置载玻片上,加1滴10%的KOH溶液,盖上盖玻片后在酒精灯上微 微加热,待榇本溶解,轻轻加压盖玻片使标本透明,然后在显微镜下观察。2 .检查时应遮去强光,先在低倍镜下观察有无真菌菌丝和抱子,然后用高倍 镜观察抱子和菌丝的形态、特征、
2、位置、大小和排列等。3 .典型真菌镜检所见花斑癣:短粗、两头钝圆、稍弯曲的菌丝,成堆的圆形或卵圆形厚壁抱 子,有时有芽胞。(2)头癣黄癣:黄癣痂,发内抱子、鹿角状菌丝,可见气沟、气泡。白癣:断发外菌鞘由镶嵌或成堆圆形狗子组成。 黑癣:发内链状抱子。体股癣、手足癣:分支分隔的长菌丝。(4)甲癣:分支分隔的长菌丝,常断裂为关节抱子样。念珠菌病,假菌丝、圆形或椭圆形芽胞。(6)隐球菌病:圆形或椭圆形双壁狗子,外围有一层透光荚膜,在黑色背景 下极为明亮。着色芽生菌病:棕色圆形厚壁分隔泡子。暗色丝抱霉病,棕色分支分隔菌丝或酵母样细胞。(9)链状芽生菌病:链状出芽抱子。(10)毛霉病:宽大菌丝,不分隔。【
3、注意事项】1 .取材应在损害活动区,如环形损害的边缘、水庖顶部,量要充足。2 .体液标本应离心后取沉渣镜检。有条件者应同时进行真菌培养。3 .取材前皮损部位应尽量避免涂药。二、真菌培养目的是进一步提高病原体检出的阳性率,同时确定致病菌的种类,一旦发现 肯定的致病菌如红色毛癣菌或新型隐球菌时,诊断即可确立。但如果分离出条件 致病菌如白色念珠菌或烟曲霉时,应结合临庞进行判断。从无菌部位如血液或脑 脊液中分离出条件致病菌常提示肯定的感染,但对来自于脓、痰或尿的标本则应 谨慎解释结果,单靠一次培养阳性往往不能确定诊断、有时还须结合直接镜检的 结果,因此强调直接镜检与培养检查相结合的重要性。【适应证】1
4、 .疑似真菌感染的标本。2 .进一步确定感染真菌种类。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1 .在无菌操作下,将标本接种于沙氏葡萄糖琼脂(SDA),置25s27摄氏度温 箱内培养4s6周。2 .如怀疑有深部真菌,应同时在3537摄氏度培养。3 .菌落出现后,应定期观察其生长情况。4 .常规分离鉴定使用的培养基为SDA斜面培养基,加0.005%氯霉素,对皮 肤癣菌,还应添加0.05%放线菌酮。5 .对分离到的真菌,应结合菌落和显微镜下形态学特点将其鉴定到种。真菌 常用形态学鉴定,而酵母常以形态学和生理生化学方法结合进行鉴定。6 .常见真菌培养所见:念珠菌病:奶油色酵母样菌落隐球菌病:乳白色酵母样菌落,而后为浅橘黄色,质地呈黏液状。抱子丝菌病:棕色至棕黑色菌落。曲霉病:黄绿色毛状菌落。芽生菌病:真菌相为白色棉花样菌落,酵母相为奶油色或棕色菌落。暗色丝抱霉病:棕黑色菌落。诺卡菌病:橘黄色或红色菌落,有泥土气味。【注意事项】1 .应与直接镜检结果综合进行判断。2 .严格无菌操作,避免污染。3 .提倡多管(点卜多次培养,确保结果可信性。