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1、皮肤性病科皮肤免疫荧光检查技术操作规范该项检查技术是根据抗原与抗体的结合反应具有高度特异性的特点，采用荧 光染料（目前应用较普遍的是异硫氟酸荧光素，其异硫令瓦基在水溶液中与免疫 球蛋白的自由氨基经碳酰胺化而形成硫碳氨基键，成为标记的免疫球蛋白，即 荧光素标记抗体）标记的已知抗原或抗体，通过荧光光源检查，以发现未知 的抗体或抗原。免疫荧光检查实际上是血清学方法与显微示踪技术相结合。根 据抗原抗体反应的不同，分述如下免疫荧光检查方法。一、皮肤直接免疫荧光检查【适应证】1 .非感染性大疤性皮肤病如各型天疱疮、类天疱疮、疱疹样皮炎、线状IgA 大疱性皮肤病、获得性大疱性表皮松解症等。2 .结缔组织病如
2、红斑狼疮等。3 .各种血管炎4 .某些感染性皮肤病5 .皮肤肿瘤等【禁忌证】同本章第一节“皮肤组织病理检查”。【操作方法及程序】1 .从患者受累或可能受累的皮肤组织黏膜组织处切取活检标本，做冷冻切片, 或石蜡切片（特殊方法）。2 .将一定浓度的荧光素标记特异性抗体与组织抗原共同孵育，设定适宜的孵 育温度和时间，使组织抗原与抗体充分结合。3 .在荧光显微镜下观察，如发现反应部位显示相应荧光，即为阳性反应， 根据荧光分布和形态确定抗原部位和性质。【皮肤直接免疫荧光检查的基本改变】1 .基底膜荧光（1）系统性红斑狼疮、盘状红斑狼疮、亚急性皮肤型红斑狼疮：基底膜 带呈线状、颗粒状或团块状荧光。疱疹样皮
3、炎：真皮乳头内基底膜带颗粒状IgA沉积。类天疱疮、获得性大疱性表皮松解症：线状IgG及C3沉积。线状IgA大疱性皮肤病:基底膜带线状IgA沉积。扁平苔薛：真皮乳头层内弥漫性或灶性、球状IgM和C3沉积。2 .表皮细胞间荧光寻常型、红斑型、落叶型、增殖型天疱疮及疱疹样天疱 疮等，可见表皮细胞间IgG沉积。3 .血管壁荧光多种血管性皮肤病，如白细胞碎裂性血管炎、结节性多动 脉炎等显示管壁及管周荧光。【注意事项】1 .原则上，每次实验应该设有阳性和阴性对照。2 .取材部位：在水疱性皮肤病中，应尽量取最早期水疱损害，保持疱的 完整性，或取初发的红斑性损害；在红斑狼疮中，取充分发展的皮损处组织； 系统性
4、红斑狼疮，亦可取未受累或避光处的皮肤组织，如果为阳性则更有诊断 和鉴别诊断价值。3 .标本应及时检查，并且应避光保存，否则荧光会淬灭。二、皮肤间接免疫荧光检查用以检测患者血清中的某种特异抗体或自身抗体。反应中有两对抗原抗体 相继发生结合反应，第一抗体与抗原是相对应的特异结合，而第二抗体（即荧 光素标记抗体）则是针对第一抗体的抗抗体。【适应证】1 .血清中各种抗微生物抗体的测定，可用于感染性疾病的病原学诊断，如 梅毒螺旋体、支原体、衣原体、立克次体、疱疹病毒等。2.血清中各种自身抗体的测定，可用于结缔组织病、大庖性皮肤病和其他 自身免疫病的诊断。（1）系统性红斑狼疮、皮肌炎、硬皮病、类风湿关节炎
5、、混合结缔组织病、 干燥综合征等:有不同类型的抗核抗体。大疱性皮肤病:如抗天疱疮抗体等。（3）糖尿病:抗胰岛细胞抗体等。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1 .抽取患者血液，分离出血清。2 .将该血清与含有相关抗原的标本共同孵育，使第一抗体与抗原相结合。3 .加入荧光素标记的第二抗体与抗自身抗体或抗病原体抗体结合，共同孵育。4 .在荧光显微镜下观察标本，如果出现荧光反应即为阳性。【注意事项】1 .血清中抗体、第二抗体和抗原的浓度之比应适宜，必要时予以适当稀释。 若采用组织抗原标本，则应尽可能暴露该抗原。2 .余同直接免疫荧光检查。三、补体结合法在间接法的基础上发展而成，即在抗原抗体反应时加入补体，再用荧光素标 记的抗补体抗体进行示踪。检查妊娠性疱疹患者的自身抗体时，须采用此法。