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1、Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。基因工程完-A一单项选择题1.F因子从一个细胞转移至另一个细胞的基因转移过程称为：A.转化B.转导C.转染D.接合2.通过自动获取或人为地供给外源DNA使受体细胞获得新的遗传表型,称为：A.转化B.转导C.转染D.转座3.由插入序列和转座子介导的基因移位或重排称为：A.转化B.转染C.转座D.接合4.由整合酶催化、在两个DNA序列的特异位点间发生的整合称：A.位点特异的重组B.同源重C.基本重组D.人工重组5.发生在同源序列间的重组称为：A.位点特异的重组B.非位点特异的重组C.基本重组（同源重组）D.
2、人工重组6.限制性核酸内切酶切割DNA后产生：A.5磷酸基和3羟基基团的未端B.3磷酸基和5羟基基团的末端C.5磷酸基和3磷酸基团的末端D.5羟基和3羟基基团的末端7.可识别并切割特异DNA序列的称：A.限制性核酸外切酶B.限制性核酸内切酶C.非限制性核酸外切酶D.非限制性核酸内切酶8.在重组DNA技术中催化形成重组DNA分子的是DNAA.聚合酶B.解链酶C.连接酶D.拓扑酶9.不能用作克隆载体的DNA是：A.质粒DNAB.噬菌体DNAC.细菌基因组DNAD.腺病毒DNAl0.在下述双链DNA序列(仅列出其中一条链序列)中不属于完全回文结构的是：A.AGAATTCTB.TGAATTCAC.GG
3、AATTCCD.CGTTAAGC11.无性繁殖依赖DNA载体的最基本性质是：A.青霉素抗性B.自我复制能力C.自我转录能力D.自我表达能力12.在已知序列的情况下获得目的DNA最常用的是：A.化学合成法B.筛选基因组文库C.筛选cDNA文库D.聚合酶链式反应13.重组DNA技术领域常用的质粒DNA是：A细菌染色体DNA的一部分B.细菌染色体外的独立遗传单位C.病毒基因组DNA的一部分D.真核细胞染色体DNA的一部分14.某限制性内切核酸酶按：GGGCGCCCCCCGCGGG方式切割产生的末端突出部分含：A.1个核苷酸B.2个核苷酸C.3个核苷酸D.4个核苷酸15.克隆某一目的DNA的过程不包括
4、：A.基因载体的选择与构建B.外源基因与载体的拼接C.重组DNA分子导入受体细胞D.表达目的基因编码的蛋白质16.表达人类蛋白质的最理想的细胞体系是：A.E.coli表达体系B.原核表达体系C.酵母表达体系D哺乳类细胞表达体系二.填空题1.通过自动获取或人为地供给外源_，使细胞或培养的受体细胞获得新的_，这就是转化作用。2.由_和_介导的基因移位或重排，称为转座。3.基因重组有3种类型，即_、_和_。4.依赖整合酶、在两个DNA序列的_发生的整合称_。5.发生在同源序列间的重组称为_，又称_。6.一个完整的基因克隆过程应包括:目的基因的获取,_的选择与改造,_的连接,重组DNA分子导入受体细胞
5、,筛选出含感兴趣基因的重组DNA转化细胞。7.限制性核酸内切酶是一类识别_的_核酸酶。8.科学家感兴趣的外源基因又称_，其来源有几种途径：化学合成,酶促合成cDNA,制备的基因组DNA及_技术。9.外源DNA离开染色体是不能复制的。将_与_连接,构建成重组DNA分子,外源DNA则可被复制。10.根据采用的克隆载体性质不同,将重组DNA分子导人细菌的方法有_、_及感染。三.名词解释题1.plasmid2.restrictionendonuclease3.vector4.DNAcloning5.目的基因6.同源重组7.cDNA文库8.基因组DNA文库9.回文结构10.转座四.问答题1.简述基因位点
6、特异的重组和同源重组的差别。2.简述基因克隆的基本过程。3.写出大多数限制性核酸内切酶识别DNA序列的结构特点。4.写出目的基因的主要来源或途径。B一、A型题1在分子生物学领域，分子克隆主要是指（）ADNA的大量复制BDNA的大量转录DNA的大量剪切DRNA的大量反转录ERNA的大量剪切2在分子生物学领域，重组DNA又称（）A酶工程B蛋白质工程C细胞工程D基因工程EDNA工程3在重组DNA技术中，不常用到的酶是（）A限制性核酸内切酶BDNA聚合酶CDNA连接酶D反转录酶EDNA解链酶4多数限制性核酸内切酶切割后的DNA末端为（）A平头末端B3突出末端C5突出末端D粘性末端E缺口末端5可识别DN
7、A的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类酶称为（）A限制性外切核酸酶B限制性内切核酸酶C非限制性外切核酸酶D非限制性内切核酸酶EDNA内切酶6cDNA是指（）在体外经反转录合成的与RNA互补的DNAB在体外经反转录合成的与DNA互补的DNA在体外经转录合成的与DNA互补的RNAD在体内经反转录合成的与RNA互补的DNAE在体内经转录合成的与DNA互补的RNA7基因组代表一个细胞或生物体的（）A部分遗传信息B整套遗传信息C可转录基因D非转录基因E可表达基因8在基因工程中通常所使用的质粒存在于（）A细菌染色体B酵母染色体C细菌染色体外D酵母染色体外E以上都不是9就分子结构而论，质粒是
8、（）A环状双链DNA分子B环状单链DNA分子C环状单链RNA分子D线状双链DNA分子E线状单链DXlA分子10聚合酶链反应可表示为（）APECBPERCPDRDBCREPCR11在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方便方法是（）A化学合成法B基因组文库法CcDNA文库法D聚合酶链反应E差异显示法12重组DNA的基本构建过程是将（）A任意两段DNA接在一起B外源DNA接入人体DNAC目的基因接入适当载体D目的基因接入哺乳类DNAE外源基因接入宿主基因13催化聚合酶链反应的酶是（）ADNA连接酶B反转录酶C末端转移酶D碱性磷酸酶ETaqDNA聚合酶14将内切酶切割后的目的基因与用相同内切酶切割
9、后的载体DNA连接属（）同聚物加尾连接B人工接头连接C平端连接D粘性末端连接E非粘性末端连接15限制性核酸内切酶切割DNA后产生（）A3磷酸基末端和5羟基末端B5磷酸基末端和3羟基末端C3磷酸基末端和5磷酸基末端D5羟基末端和3羟基末端E3羟基末端、5羟基末端和磷酸16重组DNA技术中实现目的基因与载体DNA拼接的酶是（）ADNA聚合酶BRNA聚合酶CDNA连接酶DRNA连接酶E限制性核酸内切酶17以质粒为载体，将外源基因导人受体菌的过程称（）A转化B转染C感染D，转导E转位18最常用的筛选转化细菌是否含质粒的方法是（）A营养互补筛选B抗药性筛选C免疫化学筛选DPCR筛选E分子杂交筛选19互补
10、筛选法属于（）抗药性标志筛选B酶联免疫筛选C标志补救筛选D原位杂交筛选E免疫化学筛选20下列常用于原核表达体系的是（）酵母细胞B昆虫细胞C哺乳类细胞D真菌E大肠杆菌21在对目的基因和载体DNA进行同聚物加尾时用（）A反转录酶B多聚核苷酸激酶C引物酶DRNA聚合酶E末端转移酶22重组DNA技术常用的限制性核酸内切酶为（）A类酶B类酶C类酶D类酶E类酶23在分子生物学领域，分子克隆专指()A细胞克隆BRNA克隆CDNA克隆D抗体克隆EmRNA克隆24用于重组DNA的限制性核酸内切酶识别核苷酸序列的()A正超螺旋结构B负超螺旋结构C螺旋结构D回文结构E锌指结构25在基因工程中通常所使用的质粒是()A
11、细菌的染色体DNAB细菌染色体外的DNAC病毒染色体DNAD病毒染色体外的DNAE噬菌体DNA26构建基因组DNA文库时，首先需分离细胞的（）A染色体DNAB线粒体DNAC总mRNADtRNAErRNA27建cDNA文库时，首先需分离细胞的（）A染色体DNAB线粒体DNAC总mRNADtRNAErRNA28设计聚合酶链反应的引物时，应考虑引物与模板的（）A5端特定序列互补B5端任意序列互补C3端特定序列互补D3端任意序列互补E中间序列互补29用于鉴定转化子细胞是否含重组DNA的最常用方法是（）A抗药性选择B分子杂交选择CRNA反转录D免疫学方法E体外翻译30确切地讲，cDNA文库包含（）A一个
12、物种的全部基因信息B一个物种的全部mRNA信息C一个生物体组织或细胞的全部基因信息D一个生物体组织或细胞的全部mRNA信息E一个生物体组织或细胞所表达mRNA信息31利用聚合酶链反应扩增特异DNA序列重要原因之一是（）A反应体系内存在特异DNA模板B反应体系内存在特异RNA模板C反应体系内存在特异DNA引物D反应体系内存在特异RNA引物E反应体系内存在的TaqDNA聚合酶具有识别特异DNA序列的作用32表达人类蛋白质的最理想的细胞体系是（）AEcoli表达体系B原核表达体系C酵母表达体系D昆虫表达体系E哺乳类细胞表达体系33下列描述最能确切表达质粒DNA作为克隆载体特性的是（）A小型环状双链D
13、NA分子B携带有某些抗药性基因C在细胞分裂时恒定地传给子代细胞D具有自我复制功能E获得目的基因二、B型题A抗药性选择B分子杂交选择CRNA反转录D免疫学方法E体外翻译1用于鉴定是否有质粒转入受体菌的一般方法是（）2用于鉴定转化子细胞是否含目的基因的常用方法是（）3利用目的基因表达产物的特异性抗体来筛选含目的基因的转化子细胞的方法是（）A限制性核酸内切酶BDNA连接酶C反转录酶TaqDNA聚合酶E碱性磷酸酶4识别DNA回文结构并对其双链进行切割的是（）5用于聚合酶链反应的酶是（）6将目的基因与载体DNA进行拼接的酶是（）A支原体B衣原体C噬菌体D细菌E酵母7常用作原核表达体系的是（）8常用作真核
14、表达体系的是（）A基因组文库BcDNA文库CmRNA文库DtRNA文库ErRNA文库9分离细胞染色体DNA可制备（）10分离细胞总mRNA可制备（）A转染B转化C感染D转导E转位11以质粒为载体，细菌为宿主的导人方式是（）12以噬菌体为载体，细菌为宿主的导人方式是（）13以病毒为载体，哺乳动物细胞株为宿主的导人方式是（）A抗药性选择BRNA反转录C免疫化学方法D体外翻译EPCR14对重组体进行直接选择的方法是()15通过鉴定基因表达产物筛选重组体的方法是()ARNA聚合酶B末端转移酶C碱性磷酸酶D反转录酶E核苷酸酶16切除DNA末端磷酸基用()17在DNA3羟基末端进行同聚物加尾用()18合成
15、cDNA用()三、X型题可用作克隆载体的DNA分子有()A染色体DNAB病毒DNAC细菌染色体DNAD噬菌体DNAE特殊的蛋白质2重组DNA基本过程包括()A目的基因的获取B克隆载体的构建C目的基因与载体的拼接D重组分子导入受体菌E转化菌的筛选3基因克隆又称(BC)重组RNAB重组DNACDNA克隆DRNA克隆E蛋白质克隆4组成PCR反应体系的通常有()ADNA引物B耐热的DNA聚合酶CdNTPDDNA模板EMg2+5对于重组体的筛选，属直接选择法的有()A免疫化学法BSouthern印迹C酶联免疫法D标志补救EWesthern印迹6对于重组体的筛选，属非直接选择法的有()A免疫化学法BSou
16、thern印迹C酶联免疫法D标志补救EWestthern印迹7限制性核酸内切酶切割DNA时，通常产生()A5突出黏端B平末端C3磷酸末端D3突出黏端E5磷酸末端8基因工程中目的基因的来源可以是()A化学合成BPCR合成CLCR合成DcDNA文库E基因组中直接获得9重组DNA时，外源基因又称()A目的基因B目的RNAC目的DNAD外源RNAE载体基因10可作为重组DNA的目的基因有()AmRNABcRNACcDNADDNAErRNAB四、填空题1通过自动获取或人为地供给外源_，使细胞或培养的受体细胞获得新的_，这就是转化作用。2由_和_介导的基因移位或重排，称为转座。3一个完整的基因克隆过程应包
17、括：目的基因的获取，_的选择与改造，_和_连接为重组DNA，重组DNA分子导入_，筛选出含感兴趣基因的重组DNA转化细胞。4限制性核酸内切酶是一类识别并水解_的核酸_酶。5科学家感兴趣的外源基因又称_，其来源有几种途径：化学合成，酶促合成cDNA，制备的基因组DNA及_技术。6外源DNA离开染色体是不能复制的。将_与_连接，构建成重组DNA分子，外源DNA则可被复制。7根据克隆载体性质不同，将重组DNA分子导人细菌的方法有_、_及感染。五、名词解释题1质粒2限制性核酸内切酶3载体4DNA克隆5目的基因6同源重组7cDNA文库8基因组DNA文库9转座六、简答题1简述基因位点特异的重组和同源重组的
18、差别。（4分）2何谓限制性核酸内切酶?写出大多数限制性核酸内切酶识别DNA序列的结构特点。（3分）3解释质粒，为什么质粒可作为基因载体。（4分）七、论述题1何谓基因克隆?简述基因克隆的基本过程。（7分）2何谓目的基因?写出其主要来源或途径。（6分）3何谓基因载体，说出哪些DNA可作为基因的载体。（5分）C一、A型题1“Sourthem、Blotting指的是()A将DNA转移到膜上，用DNA做探针杂交B将RNA转移到膜上，用DNA做探针杂交C将DNA转移到膜上，用蛋白质做探针杂交D将RNA转移到膜上，用RNA做探针杂交E将DNA转移到膜上，用RNA做探针杂交2以下那种不是核酸分子杂交()A单链
19、DNA分子之间的杂交B单链DNA与RNA分子之间的杂交C抗原与抗体分子之间的结合DDNA与寡核苷酸之间的杂交ERNA与RNA之间的杂交3探针是经过什么标记的核酸分子()A用放射性同位素标记B用生物素标记C用地高辛标记DA、B、C都对E用抗体标记4用于核酸杂交的探针至少应符合下列哪条()A必须是双链DNAB必须是双链RNAC必须是单链DNAD必须是100bp以上的大分子DNAE必须是蛋白质5核酸斑点杂交试验中可省略的步骤是()A电泳B核酸样品固定于NC膜C杂交信号检测D标记探针E制备样本核酸6原位杂交是指()A在硝酸纤维素膜上进行杂交操作B在组织切片或细胞涂片上进行杂交操作C直接将核酸点在NC膜
20、上的杂交D在PVDF膜上进行杂交操作E在凝胶电泳中进行的杂交7有关DNA链末端终止法的不正确说法是()A需要ddNMPB需要ddNTPCdNTP和ddNTP的比例要合适D需要放射性同位素或荧光染料E需要dNTP8免疫印渍技术指的是()A结合在膜上的蛋白质分子与抗体分子结合B结合在膜上的DNA分子与抗体结合C结合在膜上的RNA分子与抗体结合D结合在膜上的DNA分子与RNA分子结合E结合在膜上的免疫分子与DNA的结合9同位素标记探针检测NC膜上的RNA分子()A叫做NorthernBlottingB叫做SouthemBlottingC叫做WesternBlottingD蛋白分子杂交E免疫印渍杂交1
21、0用做探针的DNA分子必须()A在杂交前变性B在杂交前复性C长于30个核苷酸D短于30个核苷酸E是双链分子二、B型题（每小题1分）ANorthernBlottingBSouthemBlottingCWesternBlottingD在组织切片或涂片杂交E将样品直接点在滤膜上与探针杂交1DNA印渍术()2蛋白质印渍术()3RNA印渍术()4斑点杂交()5原位杂交()三、X型题1关于分子杂交正确说法是()A源于对DNA变性与复性现象的理解B只有DNA与RNA之间才能杂交C杂交的分子双方必须都是单链D杂交的分子双方碱基配对E不同来源的核酸分子之间才能杂交2生物大分子印渍技术包括()ADNAblotti
22、ngBRNAblottingC蛋白质印渍术D糖类分子的印渍术E脂类印渍术3Westernblotting杂交的操作包括()A裂解细胞制备样品B胺凝胶电泳C将样品转移到膜上D封闭无关位点E膜上的RNA与探针杂交三、填空题1只要DNA或RNA的单链分子之间存在着一定程度的_,就可以在不同的分子间形成_。2存在于NC膜上的生物分子可以放到杂交液中，与_进行_。3蛋白质的印渍分析，也称为_。4探针的种类有_，_，_等。四、名词解释题1DNA印渍技术2RNA印渍技术3蛋白质印渍技术4探针（Probe）五、问答题1PCR技术的工作原理是什么？(5分)六、论述题1印渍杂交的主要实验方法有哪些?主要用途是什么
23、?（6分）2核酸分子杂交的主要实验方法有哪些?主要用途是什么?（8分）D一、选择题1、某蛋白质pI为7.5，在pH6.0的缓冲液中进行自由界面电泳，其泳动方向为（）A、向负极移动B、向正极移动C、不运动D、同时向正极和负极移动2、进行酶活力测定时：（）A、底物浓度必须极大于酶浓度B、酶浓度必须极大于底物浓度，D、酶能提高反应的平衡点C、与底物浓度无关3、不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳比一般电泳的分辨率高，是因为具有下列哪种效应？（）A、浓缩效应B、电荷效应C、分子筛效应D、粘度效应4、分离鉴定氨基酸的纸层析属于（）A、亲和层析B、吸附层析C、离子交换层析D、分配层析二、是非题（在题后括号内打或）1、
24、蛋白质在小于等电点的pH溶液中，向阳极移动，而在大于等电点的pH溶液中，将向阴极移动。（）2、酶的比活力可表示酶纯度，因此比活力可用每克酶制剂或每ml酶制剂含有多少活力单位表示。（）3、提纯酶时，只需求其总活力，就可以知其纯度是否提高了。（）三、问答题：1、盐析法沉淀蛋白质时，往往需要将pH调到蛋白质等电点附近，为什么？2、试分别阐述分配层析和吸附层析法分离鉴定氨基酸的原理和操作步骤。3、什么是同工酶？说明用电泳法分离同工酶的原理。4、电泳现象的产生与蛋白质的分子结构有何关系？5、在pH6.5的谷氨酸和丙酮酸混合液中，加入适量的新鲜猪肝匀浆后于37水浴中保温30分钟，煮沸后蛋白质沉淀，将上清液
25、点在层析滤纸上，用酚水饱和液进行层析，层析结束后用茚三酮显色出现两条带，这两条带各是什么物质：说明原因？6、测定酶活力时，应注意哪些事项？为什么？7、聚丙烯酰胺凝胶电泳有什么特点？试述聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质的基本原理和主要操作步骤。8、以DNA的分离纯化为例，阐述生物大分子分离纯化的基本原则原理和注意事项。四、名词解释吸附层析分配层析分子筛层析离子交换层析亲和层析浓缩效应PAGE盐析透析参考答案A一.单项选择题1.D.2.A.3.C.4.A.5.C.6.A.7.B.8.C.9.C10.D.11.B.12.D.13.B.14.B.15.D.16.D.二.填空题1.DNA,遗传表型2.插
26、入序列,转座子3.位点特异的重组,同源重组，转座重组。4.特异位点间,位点特异的重5.同源重组,基本重组.6.克隆基因载体,目的基因与载体7.DNA特异序列,内切8.目的基因,PCR9.外源基因,载体10.转化,转染三.名词解释1.plasmid（质粒）：是存在于细菌染色体外的小型环状双链DNA分子。质粒分子本身是含有复制功能的遗传结构,能在宿主细胞独立自主地进行复制,并在细胞分裂时恒定地传给子代细胞。质粒带有某些遗传信息,所以会赋予宿主细胞一些遗传性状。因为质粒DNA有自我复制功能及所携带的遗传信息等特性,故可作为重组DNA操作的载体。2.restrictionendonuclease（限制
27、性核酸内切酶）：就是识别DNA的特异序列,并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类核酸内切酶。限制性核酸内切酶存在于细菌体内,与相伴存在的甲基化酶共同构成细菌的限制性修饰体系,限制外源DNA、保护自身DNA,对细菌遗传性状的稳定遗传具有重要意义。限制性核酸内切酶分为三类。重组DNA技术中常用的限制性内切核酸酶为类酶。3.vector（载体）：即基因载体,或称克隆载体,是在基因工程中为携带感兴趣的外源DNA、实现外源DNA的无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子,具有自我复制和表达功能。其中,为使插入的外源DNA序列可转录、进而翻译成多肽链而特意设计的克隆载体又称表达载体。克隆载体有
28、质粒DNA、噬菌体DNA和病毒DNA,它们经适当改造后仍具有自我复制能力,或兼有表达外源基因的能力。4.DNAcloning（DNA克隆）：就是应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA与载体DNA结合成一具有自我复制能力的DNA分子复制子,继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化细胞,再进行扩增、提取获得大量同一DNA分子,即DNA克隆,又称基因克隆、重组DNA或基因工程。5.目的基因：应用重组DNA技术有时是为分离、获得某一感兴趣的基因或DNA序列,或是为获得感兴趣基因的表达产物蛋白质。这些感兴趣的基因或DNA序列就是目的基因
29、,又称目的DNA。目的DNA有两种类型,即cDNA和基因组DNA。6.同源重组：发生在同源序列间的重组称为同源重组,又称基本重组。同源重组的发生依赖两分子之间序列的相同或类似性。如果通过转化或转导获得的外源DNA与宿主DNA同源,那么外源DNA就可以通过同源重组方式整合进宿主染色体。7.cDNA文库：以mRNA为模板,利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA,即cDNA,再复制成双链cDNA片段,与适当载体连接后转入受体菌。不同细菌包含了不同mRNA为模板的cDNA分子或片段,这样生长的全部细菌所携带的各种cDNA分子或片段就代表了整个组织或细胞表达的各种mRNA信息,即cDNA文库。8.基因组
30、DNA文库：利用限制性核酸内切酶将染色体DNA切割成一定基因水平的许多片段,其中即含有人们感兴趣的基因片段。将这些片段分子与适当的克隆载体拼接成重组DNA分子,继而转入受体菌,使每个细菌内都携带一种重组DNA分子。不同细菌所包含的重组DNA分子可能为不同的染色体DNA片段,这样全部转化细菌所携带的各种染色体片段就代表了染色体的整个基因组。存在于转化细菌内、由克隆载体所携带的所有基因组DNA片段的集合称基因组DNA文库。基因组DNA文库涵盖了基因组全部基因信息。9.回文结构：大部分限制性核酸内切酶为II类酶,识别DNA位点的核苷酸序列呈二元旋转对称,通常称这种特殊的结构顺序为回文结构。10.转座
31、：在基因组内有些基因可以从一个位置移动到另一位置。这些可移动的DNA序列包括插人序列和转座子。由插入序列和转座子介导的基因移位或重排现象称为转座。四.问答题1.位点特异的重组需要整合酶、发生在两个DNA序列的特异位点间；同源重组不需要特异DNA序列,而是依赖两分子之间序列的相同或类似性,但也需要特异酶催化。2.以质粒为载体进行DNA克隆的过程(为例)包括：目的基因的获取,基因载体的选择与构建,目的基因与载体的拼接,重组DNA分子导人受体细胞,筛选并无性繁殖含重组分子的受体细胞。3.限制性核酸内切酶分为三类。重组DNA技术中常用的限制性内切核酸酶为类酶。其特点为：（1）识别DNA位点的核苷酸序列
32、呈回文结构：（2）一些酶切割后产生粘性末端，另一些酶切割后产生平端或钝性末端；（3）不同的限制性内切核酸酶识别DNA中核苷酸长短不一，为4、6或8个。（4）有些限制性内切核酸酶识别不同序列但切割后产生相同类型的粘性末端，可进行相互连接。4.获取目的基因的途径或来源如下：化学合成法、基因组DNA中筛选、cDNA文库中筛选、利用聚合酶链反应获取。BA.1A.2.D3.E4.D5.B6.A7.B8.C9.A10.E11.D12.C13.E14.D15.B16.D17.A18.B19.C20.E21.E22.B23.C24.D25.B26.A27.C28.C29.A30.E31.C32.E33.DB.
33、1.A2.B3.D4.A5.D6.B7.D8.E9.A10.B11.B12.A13.C14.A15.C16.C17.B18.DX.1.BD2.ABCDE3.BC4.ABCDE5.BD6.ACE7.ABD8.ABDE9.AC10.CD四、填空题1【DNA；遗传表型】2【插入序列；转座子】3【克隆载体；目的基因；载体DNA；受体细胞】4【双链DNA特异序列；内切】5【目的基因；PCR】6【外源基因；载体DNA】7【转化；转染】五、名词解释题1质粒【是存在于细菌染色体外的小型环状双链DNA分子。质粒分子本身是含有复制功能的遗传结构，能在宿主细胞独立自主地进行复制，并在细胞分裂时恒定地传给子代细胞。质
34、粒带有某些遗传信息，所以会赋予宿主细胞一些遗传性状。因为质粒DNA有自我复制功能及所携带的遗传信息等特性，故可作为重组DNA操作的载体。】2限制性核酸内切酶【就是识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类核酸内切酶。限制性核酸内切酶存在于细菌体内，与相伴存在的甲基化酶共同构成细菌的限制修饰体系，限制外源DNA、保护自身DNA，对细菌遗传性状的稳定遗传具有重要意义。限制性核酸内切酶分为三类。重组DNA技术中常用的限制性内切核酸酶为类酶。】3载体【即基因载体，或称克隆载体，是在基因工程中为“携带”感兴趣的外源DNA、实现外源DNA的无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA
35、分子，具有自我复制和表达功能。其中，为使插入的外源DNA序列可转录,进而翻译成多肽链而特意设计的克隆载体又称表达载体。克隆载体有质粒DNA、噬菌体DNA和病毒DNA，它们经适当改造后仍具有自我复制能力，或兼有表达外源基因的能力。】4DNA克隆【就是应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA与载体DNA结合成一个具有自我复制能力的DNA分子复制子，继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化细胞，再进行扩增、提取获得大量同一DNA分子，即DNA克隆，又称基因克隆、重组DNA或基因工程。】5目的基因【应用重组DNA技术有时是为分离、获得某
36、一感兴趣的基因或DNA序列，或是为获得感兴趣基因的表达产物蛋白质。这些感兴趣的基因或DNA序列就是目的基因，又称目的DNA。目的DNA有两种类型，即cDNA和基因组DNA。】6同源重组【发生在同源序列间的重组称为同源重组，又称基本重组。同源重组的发生依赖两分子之间序列的相同或类似性。如果通过转化或转导获得的外源DNA与宿主DNA同源，那么外源DNA就可以通过同源重组方式整合进宿主染色体。】7cDNA文库【以mRNA为模板，利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA，即cDNA，再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后转入受体菌。不同细菌包含了不同mRNA为模板的cDNA分子或片段，这样生长的全部
37、细菌所携带的各种cDNA分子或片段就代表了整个组织或细胞表达的各种mRNA信息，即cDNA文库。】8基因组DNA文库【利用限制性核酸内切酶将染色体DNA切割成一定基因水平的许多片段，其中即含有人们感兴趣的基因片段。将这些片段分于与适当的克隆载体拼接成重组DNA分子，继而转入受体菌，使每个细菌内都携带一种重组DNA分子。不同细菌所包含的重组DNA分子可能为不同的染色体DNA片段，这样全部转化细菌所携带的各种染色体片段就代表了染色体的整个基因组。存在于转化细菌内、由克隆载体所携带的所有基因组DNA片段的集合称基因组DNA文库。基因组DNA文库涵盖了基因组全部基因信息。】9转座【在基因组内有些基因可
38、以从一个位置移动到另一位置。这些可移动的DNA序列包括插入序列和转座子。由插入序列和转座子介导的基因移位或重排现象称为转座。】六、简答题1简述基因位点特异的重组和同源重组的差别。（4分）【位点特异的重组和同源重组概念；前者需要整合酶，发生在两个DNA序列的特异位点间；后者不需要特异DNA序列，而是依赖两分子之间序列的相同或类似性，但也需要特异酶催化。】2何谓限制性核酸内切酶?写出大多数限制性核酸内切酶识别DNA序列的结构特点。（3分）【解释限制性内切核酸酶；酶识别DNA位点的核苷酸序列呈回文结构】3解释质粒，为什么质粒可作为基因载体。（4分）【参见“质粒”名词解释；质粒的复制及表达功能、选择标
39、志基因。】七、论述题1何谓基因克隆?简述基因克隆的基本过程。（7分）【以质粒为载体进行DNA克隆的过程(为例)包括：目的基因的获取，基因载体的选择与构建，目的基因与载体的拼接，重组DNA分子导人受体细胞，筛选并无性繁殖含重组分子的受体细胞。】2何谓目的基因?写出其主要来源或途径。（6分）【参见“目的基因”名词解释。】3何谓基因载体，说出哪些DNA可作为基因的载体。（5分）【参见“基因载体”名词解释。】CA.1.A2.C3.D4.C5.A6.B7.A8.A9.A10.AB.1.B2.C3.A4.E5.DX.1.ACD2.ABC3.ABCDE四、名词解释题1DNA印渍技术【DNA印渍技术也称为So
40、uthemblotting，是将基因组DNA经限制性内切酶消化后进行琼脂糖凝胶电泳，再将胶中的DNA分子转移到NC膜上进行杂交反应的技术主要用于基因组NDA的分析。】2RNA印渍技术【RNA印渍称为Northernblotting，指RNA经电泳分离后转移至膜性支持物上用于杂交反应的技术。】3蛋白质印渍技术【蛋白质印渍分析也称为Westemblotting或免疫印渍技术，指蛋白质在电泳分离之后转移到NC膜上，再与溶液中的其它蛋白探针相互结合的技术。】4探针（Probe）【用同位素、生物素或荧光染料标记DNA分子的末端或全链的一段多聚核苷酸可以称为探针，用于与已经用印渍技术固定在NC膜上的DNA
41、或RNA进行结合反应。】五、问答题1PCR技术的工作原理是什么？(5分)【变性：使模板DNA完全变性成为单链退火：使引物与模板DNA退火结合延伸：DNA聚合酶以dNTP为底物催化DNA合成反应。】六、论述题1印渍杂交的主要实验方法有哪些?主要用途是什么?（6分）【目前常用的生物大分子印渍技术包括：(1)：DNA印渍技术(DNAblotting)，被广泛称为Southernblotting。它主要用于基因组DNA的分析，尤其是用于某种基因在基因组中的定位研究，也可以用于分析重组质粒和噬菌体。(2)RNA印渍技术(RNAblotting)，也称为Northernblotting。主要用于检测某一组
42、织或细胞中已知的特异mRNA的表达水平以及比较不同组织和细胞的同一基因的表达情况。(3)蛋白质的印渍分析，也称为免疫印渍技术(immunoblotting)或Westernblotting。主要用于检测样品中特异性蛋白质的存在、细胞中特异蛋白质的半定量分析以及蛋白分子的相互作用研究等。斑点印渍、原位杂交也是常用的分子杂交方法。在此基础上发展起来的DNA芯片可以在小面积的表面固定数千甚至上万个探针用于细胞样品中基因表达谱及基因突变的分析。生物芯片对核酸的研究工作以及未来的诊断技术都将产生革命性的影响。】2核酸分子杂交的主要实验方法有哪些?主要用途是什么?（8分）【目前常用的生物大分子印渍技术包括
43、：(1)：DNA印渍技术(DNAblotting)，被广泛称为Southernblotting。它主要用于基因组DNA的分析，尤其是用于某种基因在基因组中的定位研究，也可以用于分析重组质粒和噬菌体。(2)RNA印渍技术(RNAblotting)，也称为Northernblotting。DNA印渍技术主要用于检测某一组织或细胞中已知的特异mRNA的表达水平以及比较不同组织和细胞的同一基因的表达情况。(3)斑点杂交，不经电泳分离直接将样品点在NC膜上用于杂交。（4）原位杂交在组织切片或涂片上进行杂交。（5）DNA芯片可以在小面积的表面固定数千甚至上万个探针用于细胞样品中基因表达谱及基因突变的分析。生物芯片对核酸的研究工作以及未来的诊断技术都将产生革命性的影响。】D一、选择题1.A2.A3.A4.D二、是非题1.2.3.-