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1、【精品文档】如有侵权，请联系网站删除，仅供学习与交流基因工程完.精品文档.A一单项选择题1.F因子从一个细胞转移至另一个细胞的基因转移过程称为： A.转化B.转导C.转染D.接合2.通过自动获取或人为地供给外源DNA使受体细胞获得新的遗传表型,称为： A.转化 B.转导 C.转染 D.转座3.由插入序列和转座子介导的基因移位或重排称为： A.转化 B.转染 C.转座 D.接合4.由整合酶催化、在两个DNA序列的特异位点间发生的整合称： A.位点特异的重组 B.同源重C.基本重组 D.人工重组5.发生在同源序列间的重组称为： A.位点特异的重组 B.非位点特异的重组 C.基本重组（同源重组） D
2、.人工重组6.限制性核酸内切酶切割DNA后产生： A.5磷酸基和3羟基基团的未端 B.3磷酸基和5羟基基团的末端 C.5磷酸基和3磷酸基团的末端D.5羟基和3羟基基团的末端7.可识别并切割特异DNA序列的称： A.限制性核酸外切酶 B.限制性核酸内切酶 C.非限制性核酸外切酶D.非限制性核酸内切酶8.在重组DNA技术中催化形成重组DNA分子的是DNAA.聚合酶 B.解链酶C.连接酶 D.拓扑酶9.不能用作克隆载体的DNA是： A.质粒DNAB.噬菌体DNA C.细菌基因组DNAD.腺病毒DNAl0.在下述双链DNA序列(仅列出其中一条链序列)中不属于完全回文结构的是： A.AGAATTCT B
3、.TGAATTCA C.GGAATTCC D.CGTTAAGC11.无性繁殖依赖DNA载体的最基本性质是： A.青霉素抗性 B.自我复制能力 C.自我转录能力 D.自我表达能力12.在已知序列的情况下获得目的DNA最常用的是： A.化学合成法B.筛选基因组文库 C.筛选cDNA文库D.聚合酶链式反应13.重组DNA技术领域常用的质粒DNA是： A细菌染色体DNA的一部分B.细菌染色体外的独立遗传单位 C.病毒基因组DNA的一部分D.真核细胞染色体DNA的一部分14.某限制性内切核酸酶按： GGGCGCCC CCCGCGGG 方式切割产生的末端突出部分含： A.1个核苷酸 B.2个核苷酸C.3个
4、核苷酸 D.4个核苷酸15 .克隆某一目的DNA的过程不包括： A.基因载体的选择与构建B.外源基因与载体的拼接 C.重组DNA分子导入受体细胞D.表达目的基因编码的蛋白质16 .表达人类蛋白质的最理想的细胞体系是： A.E.coli表达体系B.原核表达体系 C.酵母表达体系D哺乳类细胞表达体系二.填空题1. 通过自动获取或人为地供给外源_，使细胞或培养的受体细胞获得新的_，这就是转化作用。2. 由_和_介导的基因移位或重排，称为转座。3. 基因重组有3种类型，即_、_和_。4. 依赖整合酶、在两个DNA序列的_发生的整合称_。5. 发生在同源序列间的重组称为_，又称_。6. 一个完整的基因克
5、隆过程应包括:目的基因的获取, _的选择与改造, _的连接,重组DNA分子导入受体细胞,筛选出含感兴趣基因的重组DNA转化细胞。7. 限制性核酸内切酶是一类识别_的_核酸酶。8. 科学家感兴趣的外源基因又称_，其来源有几种途径：化学合成,酶促合成cDNA,制备的基因组DNA及_技术。9.外源DNA离开染色体是不能复制的。将_与_连接,构建成重组DNA分子,外源DNA则可被复制。10.根据采用的克隆载体性质不同,将重组DNA分子导人细菌的方法有_、_及感染。三.名词解释题1.plasmid2.restriction endonuclease3.vector4.DNA cloning5.目的基因6
6、.同源重组7.cDNA文库8.基因组DNA文库9.回文结构10.转座四.问答题1.简述基因位点特异的重组和同源重组的差别。2.简述基因克隆的基本过程。3.写出大多数限制性核酸内切酶识别DNA序列的结构特点。4.写出目的基因的主要来源或途径。B一、A型题1 在分子生物学领域，分子克隆主要是指（ ） ADNA的大量复制 BDNA的大量转录 DNA的大量剪切 DRNA的大量反转录ERNA的大量剪切2在分子生物学领域，重组DNA又称（ ）A酶工程 B蛋白质工程 C细胞工程 D基因工程 EDNA工程3在重组DNA技术中，不常用到的酶是（ ）A限制性核酸内切酶 BDNA聚合酶 CDNA连接酶 D反转录酶
7、EDNA解链酶4多数限制性核酸内切酶切割后的DNA末端为（ ）A平头末端 B3突出末端 C5突出末端 D粘性末端 E缺口末端5可识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类酶称为（）A限制性外切核酸酶 B限制性内切核酸酶 C非限制性外切核酸酶 D非限制性内切核酸酶 EDNA内切酶6cDNA是指（ ）在体外经反转录合成的与RNA互补的DNA B在体外经反转录合成的与DNA互补的DNA在体外经转录合成的与DNA互补的RNA D在体内经反转录合成的与RNA互补的DNAE在体内经转录合成的与DNA互补的RNA7基因组代表一个细胞或生物体的（ ）A部分遗传信息 B整套遗传信息 C可转录
8、基因 D非转录基因 E可表达基因8在基因工程中通常所使用的质粒存在于（ ）A细菌染色体 B酵母染色体 C细菌染色体外 D酵母染色体外 E以上都不是9就分子结构而论，质粒是（ ）A环状双链DNA分子 B环状单链DNA分子 C环状单链RNA分子 D线状双链DNA分子E线状单链DXlA分子10聚合酶链反应可表示为（ ）APEC BPER CPDR D BCR EPCR11在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方便方法是（ ）A化学合成法 B基因组文库法 CcDNA文库法 D聚合酶链反应 E差异显示法12重组DNA的基本构建过程是将（ ）A任意两段DNA接在一起 B 外源DNA接入人体DNAC目的基
9、因接入适当载体 D目的基因接入哺乳类DNA E外源基因接入宿主基因13催化聚合酶链反应的酶是（ ）ADNA连接酶 B反转录酶 C末端转移酶 D碱性磷酸酶 ETaqDNA聚合酶14将内切酶切割后的目的基因与用相同内切酶切割后的载体DNA连接属（ ）同聚物加尾连接 B人工接头连接 C平端连接 D粘性末端连接 E非粘性末端连接15限制性核酸内切酶切割DNA后产生（ ）A3磷酸基末端和5羟基末端 B5磷酸基末端和3羟基末端C3磷酸基末端和5磷酸基末端 D5羟基末端和3羟基末端E3羟基末端、5羟基末端和磷酸16重组DNA技术中实现目的基因与载体DNA拼接的酶是（ ）ADNA聚合酶 BRNA聚合酶 C D
10、NA连接酶 DRNA连接酶 E限制性核酸内切酶17以质粒为载体，将外源基因导人受体菌的过程称（ ）A转化 B转染 C感染 D，转导 E转位18最常用的筛选转化细菌是否含质粒的方法是（ ）A营养互补筛选 B抗药性筛选 C免疫化学筛选 DPCR筛选 E分子杂交筛选19互补筛选法属于（ ）抗药性标志筛选 B酶联免疫筛选 C标志补救筛选 D原位杂交筛选 E免疫化学筛选20下列常用于原核表达体系的是（ ）酵母细胞 B昆虫细胞 C哺乳类细胞 D真菌 E 大肠杆菌21在对目的基因和载体DNA进行同聚物加尾时用（ ）A反转录酶 B多聚核苷酸激酶 C引物酶 DRNA聚合酶 E末端转移酶22重组DNA技术常用的限
11、制性核酸内切酶为（ ）A类酶 B类酶 C类酶 D类酶 E类酶23在分子生物学领域，分子克隆专指( )A细胞克隆 BRNA克隆 CDNA克隆 D抗体克隆 EmRNA克隆24用于重组DNA的限制性核酸内切酶识别核苷酸序列的( )A正超螺旋结构 B负超螺旋结构 C螺旋结构 D回文结构 E锌指结构25在基因工程中通常所使用的质粒是( )A细菌的染色体DNA B细菌染色体外的DNA C病毒染色体DNA D病毒染色体外的DNA E噬菌体DNA26构建基因组DNA文库时，首先需分离细胞的（ ）A染色体DNA B线粒体DNA C总mRNA DtRNA ErRNA27建cDNA文库时，首先需分离细胞的（ ）A染
12、色体DNA B线粒体DNA C总mRNA DtRNA ErRNA28设计聚合酶链反应的引物时，应考虑引物与模板的（ ）A5端特定序列互补 B5端任意序列互补C3端特定序列互补 D3端任意序列互补 E中间序列互补29用于鉴定转化子细胞是否含重组DNA的最常用方法是（ ）A抗药性选择 B分子杂交选择 CRNA反转录 D免疫学方法 E体外翻译30确切地讲，cDNA文库包含 （ ）A一个物种的全部基因信息 B一个物种的全部mRNA信息C 一个生物体组织或细胞的全部基因信息D一个生物体组织或细胞的全部mRNA信息 E一个生物体组织或细胞所表达mRNA信息31利用聚合酶链反应扩增特异DNA序列重要原因之一
13、是（ ）A 反应体系内存在特异DNA模板 B反应体系内存在特异RNA模板C反应体系内存在特异DNA引物 D反应体系内存在特异RNA引物E 反应体系内存在的TaqDNA聚合酶具有识别特异DNA序列的作用32表达人类蛋白质的最理想的细胞体系是（ ）AEcoli表达体系 B原核表达体系 C酵母表达体系D昆虫表达体系 E哺乳类细胞表达体系33下列描述最能确切表达质粒DNA作为克隆载体特性的是（ ）A小型环状双链DNA分子 B携带有某些抗药性基因C在细胞分裂时恒定地传给子代细胞 D具有自我复制功能 E获得目的基因二、B型题A抗药性选择 B分子杂交选择 CRNA反转录 D免疫学方法 E体外翻译1用于鉴定是
14、否有质粒转入受体菌的一般方法是（ ）2用于鉴定转化子细胞是否含目的基因的常用方法是 （ ）3利用目的基因表达产物的特异性抗体来筛选含目的基因的转化子细胞的方法是（ ） A限制性核酸内切酶 BDNA连接酶 C反转录酶 TaqDNA聚合酶 E碱性磷酸酶 4识别DNA回文结构并对其双链进行切割的是（ ）5用于聚合酶链反应的酶是（ ）6将目的基因与载体DNA进行拼接的酶是（ ）A支原体 B衣原体 C噬菌体 D细菌 E酵母7常用作原核表达体系的是（ ）8常用作真核表达体系的是（ ）A基因组文库 BcDNA文库 CmRNA文库 DtRNA文库 ErRNA文库9分离细胞染色体DNA可制备（ ）10分离细胞总
15、mRNA可制备（ ）A转染 B转化 C感染 D转导 E转位11以质粒为载体，细菌为宿主的导人方式是（ ）12以噬菌体为载体，细菌为宿主的导人方式是（ ）13以病毒为载体，哺乳动物细胞株为宿主的导人方式是（ ）A抗药性选择 BRNA反转录 C免疫化学方法 D体外翻译 EPCR14对重组体进行直接选择的方法是( )15通过鉴定基因表达产物筛选重组体的方法是( )ARNA聚合酶 B末端转移酶 C碱性磷酸酶 D反转录酶 E核苷酸酶16切除DNA末端磷酸基用( )17在DNA3羟基末端进行同聚物加尾用( )18合成cDNA用( )三、X型题 可用作克隆载体的DNA分子有( )A染色体DNA B病毒DNA
16、 C细菌染色体DNA D噬菌体DNA E特殊的蛋白质2重组DNA基本过程包括( )A目的基因的获取 B克隆载体的构建 C目的基因与载体的拼接 D重组分子导入受体菌 E转化菌的筛选3基因克隆又称(BC)重组RNA B重组DNA CDNA克隆 DRNA克隆 E蛋白质克隆4组成PCR反应体系的通常有( )ADNA引物 B耐热的DNA聚合酶 C dNTP DDNA模板 EMg2+5对于重组体的筛选，属直接选择法的有( )A 免疫化学法 BSouthern 印迹 C酶联免疫法 D标志补救 EWesthern 印迹6对于重组体的筛选，属非直接选择法的有( )A免疫化学法 B Southern 印迹 C酶联
17、免疫法 D标志补救 EWestthern 印迹7限制性核酸内切酶切割DNA时，通常产生( )A5突出黏端 B平末端 C 3磷酸末端 D 3突出黏端 E 5磷酸末端8基因工程中目的基因的来源可以是( )A 化学合成 BPCR合成 CLCR合成 DcDNA文库 E 基因组中直接获得9重组DNA时，外源基因又称( )A目的基因 B目的RNA C目的DNA D外源RNA E 载体基因10可作为重组DNA的目的基因有( )AmRNA BcRNA CcDNA DDNA ErRNAB 四、填空题1通过自动获取或人为地供给外源_，使细胞或培养的受体细胞获得新的_，这就是转化作用。2由_和_介导的基因移位或重排
18、，称为转座。3一个完整的基因克隆过程应包括：目的基因的获取，_的选择与改造，_和_连接为重组DNA，重组DNA分子导入_，筛选出含感兴趣基因的重组DNA转化细胞。4限制性核酸内切酶是一类识别并水解_的核酸_酶。5科学家感兴趣的外源基因又称_，其来源有几种途径：化学合成，酶促合成cDNA，制备的基因组DNA及_技术。6外源DNA离开染色体是不能复制的。将_与_连接，构建成重组DNA分子，外源DNA则可被复制。 7根据克隆载体性质不同，将重组DNA分子导人细菌的方法有_、_及感染。五、名词解释题1质粒 2限制性核酸内切酶 3载体 4DNA克隆 5目的基因 6同源重组 7cDNA文库 8基因组DNA
19、文库 9转座 六、简答题1简述基因位点特异的重组和同源重组的差别。 （4分）2何谓限制性核酸内切酶?写出大多数限制性核酸内切酶识别DNA序列的结构特点。（3分）3解释质粒，为什么质粒可作为基因载体。 （4分）七、论述题1何谓基因克隆?简述基因克隆的基本过程。 （7分）2何谓目的基因?写出其主要来源或途径。 （6分） 3 何谓基因载体，说出哪些DNA可作为基因的载体。（5分）C一、A型题1“Sourthem、Blotting指的是( )A将DNA转移到膜上，用DNA做探针杂交 B将RNA转移到膜上，用DNA做探针杂交 C将DNA转移到膜上，用蛋白质做探针杂交 D将RNA转移到膜上，用RNA做探针
20、杂交 E将DNA转移到膜上，用RNA做探针杂交2以下那种不是核酸分子杂交( )A单链DNA分子之间的杂交B单链DNA与RNA分子之间的杂交C抗原与抗体分子之间的结合 D DNA与寡核苷酸之间的杂交 ERNA与RNA之间的杂交3探针是经过什么标记的核酸分子( ) A用放射性同位素标记 B用生物素标记 C用地高辛标记 DA、B、C都对 E用抗体标记4用于核酸杂交的探针至少应符合下列哪条( ) A必须是双链DNA B必须是双链RNA C必须是单链DNA D必须是100bp以上的大分子DNA E必须是蛋白质5核酸斑点杂交试验中可省略的步骤是( ) A电泳 B核酸样品固定于NC膜 C杂交信号检测 D标记
21、探针 E制备样本核酸6原位杂交是指( )A在硝酸纤维素膜上进行杂交操作B在组织切片或细胞涂片上进行杂交操作 C直接将核酸点在NC膜上的杂交D在PVDF膜上进行杂交操作 E在凝胶电泳中进行的杂交7有关DNA链末端终止法的不正确说法是( ) A需要ddNMP B需要ddNTP CdNTP和ddNTP的比例要合适 D需要放射性同位素或荧光染料 E需要dNTP8免疫印渍技术指的是( ) A结合在膜上的蛋白质分子与抗体分子结合 B结合在膜上的DNA分子与抗体结合 C结合在膜上的RNA分子与抗体结合 D结合在膜上的DNA分子与RNA分子结合 E结合在膜上的免疫分子与DNA的结合9同位素标记探针检测NC膜上
22、的RNA分子( ) A叫做Northern Blotting B叫做Southem Blotting C叫做Western Blotting D蛋白分子杂交 E免疫印渍杂交10用做探针的DNA分子必须( ) A在杂交前变性 B在杂交前复性 C长于30个核苷酸D短于30个核苷酸 E是双链分子二、B型题（每小题1分）ANorthern Blotting BSouthem Blotting CWestern BlottingD在组织切片或涂片杂交 E将样品直接点在滤膜上与探针杂交1DNA印渍术 ( )2蛋白质印渍术 ( )3RNA印渍术 ( )4斑点杂交 ( )5原位杂交 ( )三、X型题1关于分子
23、杂交正确说法是 ( ) A源于对DNA变性与复性现象的理解B只有DNA与RNA之间才能杂交C杂交的分子双方必须都是单链 D杂交的分子双方碱基配对E不同来源的核酸分子之间才能杂交2生物大分子印渍技术包括( ) ADNA blotting BRNA blotting C蛋白质印渍术 D糖类分子的印渍术 E脂类印渍术 3Western blotting杂交的操作包括( ) A裂解细胞制备样品 B胺凝胶电泳 C将样品转移到膜上 D封闭无关位点 E 膜上的RNA与探针杂交三、填空题1只要DNA或RNA的单链分子之间存在着一定程度的_,就可以在不同的分子间形成_。2存在于NC膜上的生物分子可以放到杂交液中
24、，与_进行_。3蛋白质的印渍分析，也称为_。4探针的种类有_ ，_，_等。四、名词解释题1DNA印渍技术 2RNA印渍技术 3蛋白质印渍技术 4探针（Probe） 五、问答题1 PCR技术的工作原理是什么？(5分)六、论述题1印渍杂交的主要实验方法有哪些?主要用途是什么?（6分）2核酸分子杂交的主要实验方法有哪些?主要用途是什么?（8分）D一、选择题 1、某蛋白质pI为7.5，在pH6.0的缓冲液中进行自由界面电泳，其泳动方向为（ ） A、向负极移动 B、向正极移动 C、不运动 D、同时向正极和负极移动2、进行酶活力测定时：（ ） A、底物浓度必须极大于酶浓度 B、酶浓度必须极大于底物浓度，
25、D、酶能提高反应的平衡点 C、与底物浓度无关 3、不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳比一般电泳的分辨率高，是因为具有下列哪种效应？（ ） A、浓缩效应 B、电荷效应 C、分子筛效应 D、粘度效应 4、分离鉴定氨基酸的纸层析属于（ ） A、亲和层析 B、吸附层析 C、离子交换层析 D、分配层析 二、是非题（在题后括号内打或） 1、蛋白质在小于等电点的pH溶液中，向阳极移动，而在大于等电点的pH溶液中，将向阴极移动。（ ） 2、酶的比活力可表示酶纯度，因此比活力可用每克酶制剂或每ml酶制剂含有多少活力单位表示。（ ）3、提纯酶时，只需求其总活力，就可以知其纯度是否提高了。（ ）三、问答题： 1、盐析法沉淀蛋
26、白质时，往往需要将pH调到蛋白质等电点附近，为什么？2、试分别阐述分配层析和吸附层析法分离鉴定氨基酸的原理和操作步骤。3、什么是同工酶？说明用电泳法分离同工酶的原理。4、电泳现象的产生与蛋白质的分子结构有何关系？5、在pH6.5的谷氨酸和丙酮酸混合液中，加入适量的新鲜猪肝匀浆后于37水浴中保温30分钟，煮沸后蛋白质沉淀，将上清液点在层析滤纸上，用酚水饱和液进行层析，层析结束后用茚三酮显色出现两条带，这两条带各是什么物质：说明原因？6、测定酶活力时，应注意哪些事项？为什么？7、聚丙烯酰胺凝胶电泳有什么特点？试述聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质的基本原理和主要操作步骤。8、以DNA的分离纯化为例，
27、阐述生物大分子分离纯化的基本原则原理和注意事项。四、名词解释吸附层析 分配层析 分子筛层析 离子交换层析 亲和层析浓缩效应 PAGE 盐析 透析参考答案A一.单项选择题1.D.2.A.3.C.4.A.5.C.6.A.7.B.8.C.9.C10.D.11.B.12.D.13.B.14.B.15.D.16.D.二.填空题1.DNA, 遗传表型2.插入序列, 转座子3.位点特异的重组,同源重组，转座重组。4.特异位点间,位点特异的重5.同源重组,基本重组.6.克隆基因载体,目的基因与载体7.DNA特异序列,内切 8.目的基因,PCR9.外源基因,载体10.转化,转染三.名词解释1.plasmid（质
28、粒）：是存在于细菌染色体外的小型环状双链DNA分子。质粒分子本身是含有复制功能的遗传结构,能在宿主细胞独立自主地进行复制,并在细胞分裂时恒定地传给子代细胞。质粒带有某些遗传信息,所以会赋予宿主细胞一些遗传性状。因为质粒DNA有自我复制功能及所携带的遗传信息等特性,故可作为重组DNA操作的载体。2.restriction endonuclease（限制性核酸内切酶）：就是识别DNA的特异序列,并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类核酸内切酶。限制性核酸内切酶存在于细菌体内,与相伴存在的甲基化酶共同构成细菌的限制性修饰体系,限制外源DNA、保护自身DNA,对细菌遗传性状的稳定遗传具有重要意义。限
29、制性核酸内切酶分为三类。重组DNA技术中常用的限制性内切核酸酶为类酶。3.vector（载体）：即基因载体,或称克隆载体,是在基因工程中为携带感兴趣的外源DNA、实现外源DNA的无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子,具有自我复制和表达功能。其中,为使插入的外源DNA序列可转录、进而翻译成多肽链而特意设计的克隆载体又称表达载体。克隆载体有质粒DNA、噬菌体DNA和病毒DNA,它们经适当改造后仍具有自我复制能力,或兼有表达外源基因的能力。4.DNA cloning （DNA克隆）：就是应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA与载体
30、DNA结合 成一具有自我复制能力的DNA分子复制子,继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化细胞,再进行扩增、提取获得大量同一DNA分子,即DNA克隆,又称基因克隆、重组DNA或基因工程。5.目的基因：应用重组DNA技术有时是为分离、获得某一感兴趣的基因或DNA序列,或是为获得感兴趣基因的表达产物蛋白质。这些感兴趣的基因或DNA序列就是目的基因,又称目的DNA。目的DNA有两种类型,即cDNA和基因组DNA。6.同源重组：发生在同源序列间的重组称为同源重组,又称基本重组。同源重组的发生依赖两分子之间序列的相同或类似性。如果通过转化或转导获得的外源DNA与宿主DNA同源,那么外源DN
31、A就可以通过同源重组方式整合进宿主染色体。7.cDNA文库：以mRNA为模板,利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA,即cDNA,再复制成双链cDNA片段,与适当载体连接后转入受体菌。不同细菌包含了不同mRNA为模板的cDNA分子或片段,这样生长的全部细菌所携带的各种cDNA分子或片段就代表了整个组织或细胞表达的各种mRNA信息,即cDNA文库。8.基因组DNA文库：利用限制性核酸内切酶将染色体DNA切割成一定基因水平的许多片段,其中即含有人们感兴趣的基因片段。将这些片段分子与适当的克隆载体拼接成重组DNA分子,继而转入受体菌,使每个细菌内都携带一种重组DNA分子。不同细菌所包含的重组DNA分
32、子可能为不同的染色体DNA片段,这样全部转化细菌所携带的各种染色体片段就代表了染色体的整个基因组。存在于转化细菌内、由克隆载体所携带的所有基因组DNA片段的集合称基因组DNA文库。基因组DNA文库涵盖了基因组全部基因信息。9.回文结构：大部分限制性核酸内切酶为II类酶,识别DNA位点的核苷酸序列呈二元旋转对称,通常称这种特殊的结构顺序为回文结构。10.转座：在基因组内有些基因可以从一个位置移动到另一位置。这些可移动的DNA序列包括插人序列和转座子。由插入序列和转座子介导的基因移位或重排现象称为转座。四.问答题1.位点特异的重组需要整合酶、发生在两个DNA序列的特异位点间；同源重组不需要特异DN
33、A序列,而是依赖两分子之间序列的相同或类似性,但也需要特异酶催化。2.以质粒为载体进行DNA克隆的过程(为例)包括：目的基因的获取,基因载体的选择与构建,目的基因与载体的拼接,重组DNA分子导人受体细胞,筛选并无性繁殖含重组分子的受体细胞。3.限制性核酸内切酶分为三类。重组DNA技术中常用的限制性内切核酸酶为类酶。其特点为：（1）识别DNA位点的核苷酸序列呈回文结构：（2）一些酶切割后产生粘性末端，另一些酶切割后产生平端或钝性末端；（3）不同的限制性内切核酸酶识别DNA中核苷酸长短不一，为4、6或8个。（4）有些限制性内切核酸酶识别不同序列但切割后产生相同类型的粘性末端，可进行相互连接。4.获
34、取目的基因的途径或来源如下：化学合成法、基因组DNA中筛选、cDNA文库中筛选、利用聚合酶链反应获取。BA.1A.2.D3.E4.D5.B6.A7.B8.C9.A10.E11.D12.C13.E14.D15.B16.D17.A18.B19.C20.E21.E22.B23.C24.D25.B26.A27.C28.C29.A30.E31.C32.E33.DB .1.A2.B3.D4.A5.D6.B7.D8.E9.A10.B11.B12.A13.C14.A15.C16.C17.B18.DX.1.BD2.ABCDE3.BC4.ABCDE5.BD6.ACE7.ABD8.ABDE9.AC10.CD四、填空
35、题1【DNA；遗传表型】2【插入序列；转座子】3【克隆载体；目的基因；载体DNA；受体细胞】4【双链DNA特异序列；内切】5【目的基因；PCR】6【外源基因；载体DNA】7【转化；转染】五、名词解释题1质粒 【是存在于细菌染色体外的小型环状双链DNA分子。质粒分子本身是含有复制功能的遗传结构，能在宿主细胞独立自主地进行复制，并在细胞分裂时恒定地传给子代细胞。质粒带有某些遗传信息，所以会赋予宿主细胞一些遗传性状。因为质粒DNA有自我复制功能及所携带的遗传信息等特性，故可作为重组DNA操作的载体。】2限制性核酸内切酶 【就是识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类核酸内切酶。
36、限制性核酸内切酶存在于细菌体内，与相伴存在的甲基化酶共同构成细菌的限制修饰体系，限制外源DNA、保护自身DNA，对细菌遗传性状的稳定遗传具有重要意义。限制性核酸内切酶分为三类。重组DNA技术中常用的限制性内切核酸酶为类酶。】3载体 【即基因载体，或称克隆载体，是在基因工程中为“携带”感兴趣的外源DNA、实现外源DNA的无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子，具有自我复制和表达功能。其中，为使插入的外源DNA序列可转录,进而翻译成多肽链而特意设计的克隆载体又称表达载体。克隆载体有质粒DNA、噬菌体DNA和病毒DNA，它们经适当改造后仍具有自我复制能力，或兼有表达外源基因的能力。】 4
37、DNA克隆 【就是应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA与载体DNA结合成一个具有自我复制能力的DNA分子复制子，继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化细胞，再进行扩增、提取获得大量同一DNA分子，即DNA克隆，又称基因克隆、重组DNA或基因工程。】5目的基因 【应用重组DNA技术有时是为分离、获得某一感兴趣的基因或DNA序列，或是为获得感兴趣基因的表达产物蛋白质。这些感兴趣的基因或DNA序列就是目的基因，又称目的DNA。目的DNA有两种类型，即cDNA和基因组DNA。】 6同源重组 【发生在同源序列间的重组称为同源重组，又
38、称基本重组。同源重组的发生依赖两分子之间序列的相同或类似性。如果通过转化或转导获得的外源DNA与宿主DNA同源，那么外源DNA就可以通过同源重组方式整合进宿主染色体。】7cDNA文库 【以mRNA为模板，利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA，即cDNA，再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后转入受体菌。不同细菌包含了不同mRNA为模板的cDNA分子或片段，这样生长的全部细菌所携带的各种cDNA分子或片段就代表了整个组织或细胞表达的各种mRNA信息，即cDNA文库。】8基因组DNA文库 【利用限制性核酸内切酶将染色体DNA切割成一定基因水平的许多片段，其中即含有人们感兴趣的基因片段。将这些
39、片段分于与适当的克隆载体拼接成重组DNA分子，继而转入受体菌，使每个细菌内都携带一种重组DNA分子。不同细菌所包含的重组DNA分子可能为不同的染色体DNA片段，这样全部转化细菌所携带的各种染色体片段就代表了染色体的整个基因组。存在于转化细菌内、由克隆载体所携带的所有基因组DNA片段的集合称基因组DNA文库。基因组DNA文库涵盖了基因组全部基因信息。】9转座 【在基因组内有些基因可以从一个位置移动到另一位置。这些可移动的DNA序列包括插入序列和转座子。由插入序列和转座子介导的基因移位或重排现象称为转座。】 六、简答题1简述基因位点特异的重组和同源重组的差别。 （4分）【位点特异的重组和同源重组概
40、念；前者需要整合酶，发生在两个DNA序列的特异位点间；后者不需要特异DNA序列，而是依赖两分子之间序列的相同或类似性，但也需要特异酶催化。】2何谓限制性核酸内切酶?写出大多数限制性核酸内切酶识别DNA序列的结构特点。（3分）【解释限制性内切核酸酶；酶识别DNA位点的核苷酸序列呈回文结构】3解释质粒，为什么质粒可作为基因载体。 （4分）【参见“质粒”名词解释；质粒的复制及表达功能、选择标志基因。】七、论述题1何谓基因克隆?简述基因克隆的基本过程。 （7分）【以质粒为载体进行DNA克隆的过程(为例)包括：目的基因的获取，基因载体的选择与构建，目的基因与载体的拼接，重组DNA分子导人受体细胞，筛选并无性繁殖含重组分子的受体细胞。】2何谓目的基因?写出其主要来源或途径。 （6分） 【参见“目的基因”名词解释。】3 何谓基因载体