《现代生物学实验(精品).ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《现代生物学实验(精品).ppt（14页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、现代生物学实验现代生物学实验实验一、实验一、TEM样品包埋块的制备样品包埋块的制备实验步骤实验步骤切取切取1mm3左右大小的组织块，立即放入左右大小的组织块，立即放入PBS（pH7.2)配制的配制的2.5%戊二醛中固定戊二醛中固定1小时。小时。用用0.1molPBS缓冲液冲洗三次每次缓冲液冲洗三次每次510分钟。分钟。1锇酸固定锇酸固定1小时，然后用缓冲液冲洗三次每次小时，然后用缓冲液冲洗三次每次510分钟。分钟。丙酮脱水：丙酮脱水：3050708090100100 每级每级510分钟分钟浸透：脱水剂：包埋剂浸透：脱水剂：包埋剂=3：1 1小时小时 脱水剂：包埋剂脱水剂：包埋剂=1：3 过过
2、夜夜包埋包埋聚合：聚合：45 oC 12h 60 oC 24h磷酸缓冲液磷酸缓冲液（Phosphate Buffer Saline,PBS）0.2molL-1 PBS 配制配制A液：液：Na2HPO4.2H2O 35.61g 加加DDW 至至 1000mlB液：液：NaH2PO4.H2O 27.6g 加加DDW 至至 1000ml不同不同pH磷酸缓冲液的配制磷酸缓冲液的配制pH 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6A液液 18.8 24.5 30.5 36.0 40.5 43.5(ml)B液液 31.2 25.5 19.5 14.0 9.5 6.5(ml)Epon812包埋液的配制包
3、埋液的配制 Epon812树脂树脂 20ml DDSA 4.6ml MNA 15.3ml DMP-30 0.8ml实验二、支持膜与胶体金的制备实验二、支持膜与胶体金的制备胶体金的制备胶体金的制备柠檬酸三钠法柠檬酸三钠法 0.01%氯金酸（氯金酸（HAuCl4)水溶液水溶液100ml加热至沸加热至沸腾，加腾，加1.5ml 1%柠檬酸三钠水溶液，出现橙红色。柠檬酸三钠水溶液，出现橙红色。金颗粒大小与柠檬酸三钠的关系金颗粒大小与柠檬酸三钠的关系柠檬酸三钠（柠檬酸三钠（ml)4 1.5 1.0 0.75金颗粒的直径（金颗粒的直径（nm)15 30 50 60胶体金与标记蛋白的配比胶体金与标记蛋白的配比
4、胶体金胶体金pH的调节：用的调节：用0.1mol K2CO3调到调到pH9.0取取7支支2ml离心管分别加入离心管分别加入1ml胶体金胶体金再向每支管中加入再向每支管中加入1ml不同浓度的牛血清白蛋白不同浓度的牛血清白蛋白混合均匀后分别加入混合均匀后分别加入0.1ml10%NaCl混合均匀后按照下图观察颜色的变化混合均匀后按照下图观察颜色的变化确定出包裹胶体金蛋白的量确定出包裹胶体金蛋白的量胶体金与标记蛋白的比例胶体金与标记蛋白的比例 40 35 30 25 20 15 10 蛋白含量蛋白含量mg试验三、试验三、TEM、SEM观察观察实验四、超速离心、紫外分光光度仪演示实验四、超速离心、紫外分光光度仪演示试验五、气相、液相色谱演示试验五、气相、液相色谱演示