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1、实验步骤切取1mm3左右大小的组织块，立即放入PBS（pH7.2)配制的2.5%戊二醛中固定1小时。用0.1molPBS缓冲液冲洗三次每次510分钟。1锇酸固定1小时，然后用缓冲液冲洗三次每次510分钟。丙酮脱水：3050708090100100 每级510分钟浸透：脱水剂：包埋剂=3：1 1小时 脱水剂：包埋剂=1：3 过 夜第1页/共13页包埋聚合：聚合：45 oC 12h 60 oC 24h第2页/共13页磷酸缓冲液（Phosphate Buffer Saline,PBS）0.2molL-1 PBS 配制A液：Na2HPO4.2H2O 35.61g 加DDW 至 1000mlB液：NaH
2、2PO4.H2O 27.6g 加DDW 至 1000ml第3页/共13页不同pH磷酸缓冲液的配制pH 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6A液 18.8 24.5 30.5 36.0 40.5 43.5(ml)B液 31.2 25.5 19.5 14.0 9.5 6.5(ml)第4页/共13页Epon812包埋液的配制 Epon812树脂 20ml DDSA 4.6ml MNA 15.3ml DMP-30 0.8ml第5页/共13页实验二、支持膜与胶体金的制备第6页/共13页胶体金的制备柠檬酸三钠法 0.01%氯金酸（HAuCl4)水溶液100ml加热至沸腾，加1.5ml 1%柠檬酸
3、三钠水溶液，出现橙红色。金颗粒大小与柠檬酸三钠的关系柠檬酸三钠（ml)4 1.5 1.0 0.75金颗粒的直径（nm)15 30 50 60第7页/共13页胶体金与标记蛋白的配比胶体金pH的调节：用0.1mol K2CO3调到pH9.0取7支2ml离心管分别加入1ml胶体金再向每支管中加入1ml不同浓度的牛血清白蛋白混合均匀后分别加入0.1ml10%NaCl混合均匀后按照下图观察颜色的变化确定出包裹胶体金蛋白的量第8页/共13页胶体金与标记蛋白的比例 40 35 30 25 20 15 10 蛋白含量mg第9页/共13页试验三、TEM、SEM观察第10页/共13页实验四、超速离心、紫外分光光度仪演示第11页/共13页试验五、气相、液相色谱演示第12页/共13页感谢您的观看！第13页/共13页