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1、土壤中分解尿素的细菌的土壤中分解尿素的细菌的分离与计数分离与计数课题背景课题背景1.尿素尿素的利用的利用尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。2.细菌细菌利用尿素的原因利用尿素的原因土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶CO(NH2)脲酶脲酶+CO2NH3+H2O研究思路研究思路1.筛选菌株筛选菌株在微生物学中，将允许特定微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择则培养基。研究思路研究思路2.统计菌落数目统计菌落数目（1）显微镜直接计数显微镜直接计数 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。（
2、2）稀释涂布平板法稀释涂布平板法 在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由 一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。优点优点：能准确统计微生物的实际数目。缺点缺点：不能区分死菌与活菌；研究思路研究思路P22实例：你认为哪位同学的结果更接近真实值？你认为这两位同学的实验需要实例：你认为哪位同学的结果更接近真实值？你认为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？改进吗？如果需要，如何改进？第一位同学：没有重复实验（至少涂布3个平板）。第二位同学：A组结果误差过大，不应用于计算平均值。研究思路研究思路稀释涂布平板法计算注意事项稀释涂布平板法计算注意事项为了保证结
3、果准确，一般选择菌落数在30300的平板上进行计数。为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。统计的菌落往往比活菌的实际数目低。这是因为当两个或两个细胞连 在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌 落数而不是用活菌数来表示。研究思路研究思路3.设置对照设置对照P23实例：你能通过设置对照，帮助实例：你能通过设置对照，帮助A A同学排除上述两个可能影响实验结果的因素吗？同学排除上述两个可能影响实验结果的因素吗？方案一：方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验 结果预测：结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不
4、同，则证明A同学 存在操作失误或培养基的配制有问题。方案二：方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。小结：小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高 实验结果的可信度。实验设计实验设计1.土壤取样土壤取样从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。注：注：取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。2.制备培养基制备培养基制备以尿素为唯一氮源的选择培养基实验设计实验设计3.样品的稀释与涂布样品的稀
5、释与涂布在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行；实验设计实验设计注：注：在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。4.微生物的培养、观察和计数微生物的培养、观察和计数实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。结果分析与评价结果分析与评价结合对照，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。结合对照，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。对照培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的菌落数明显大于选择培养基的数目，说明
6、选择培养基已经筛选出一些菌落。课题延伸课题延伸在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨。氨会使培养基的碱性增强，pH升高。因此，我们可以通过检测培养基pH变化来判断该化学反应是否发生。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。本堂小结本堂小结一、一、选择培养基的成分选择培养基的成分 尿素作为唯一的氮源二、二、鉴定方法鉴定方法 在培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，说明细菌能分解尿素。三、三、统计菌落数目的方法统计菌落数目的方法（1）显微镜直接计数法显微镜直接计数法（2）间接计数法间接计数法（稀释涂布平板计数法）（稀释涂布平板计数法）设置重复组，选择菌落数30300的平板进行计数。（3）设置对照设置对照证明培养基未被污染，用空白培养基作对照。证明选择培养基的选择作用，用牛肉膏蛋白胨培养基接种等量同种菌液作对照。