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1、 实验一实验一 可溶性还原糖、脂肪、可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定蛋白质的鉴定一、实验原理一、实验原理v可溶性还原糖可溶性还原糖 v蛋白质蛋白质 v脂肪脂肪 斐林试剂斐林试剂双缩脲试剂双缩脲试剂砖红色沉淀砖红色沉淀苏丹苏丹染液染液苏丹苏丹染液染液橘黄色橘黄色红色红色紫色紫色颜颜色色反反应应二、几种重要的试剂二、几种重要的试剂v斐林斐林试剂试剂甲液（甲液（0.1g/mL0.1g/mL的的NaOHNaOH溶液）溶液）乙液（乙液（0.05g/mL0.05g/mL的的CuSOCuSO4 4溶液）溶液）现配现用现配现用混合均匀混合均匀v双缩脲双缩脲 试剂试剂A A液（液（0.1g/mL0.1g/mL的
2、的NaOHNaOH溶液）溶液）B B液（液（0.010.01g/mLg/mL的的CuSOCuSO4 4溶液）溶液）现配现用现配现用先加先加A A液液再加再加B B液液v苏丹苏丹（）染液：用来鉴定脂肪的存在）染液：用来鉴定脂肪的存在四、实验方法与步骤四、实验方法与步骤v1、可溶性还原糖的鉴定、可溶性还原糖的鉴定(1)(1)制备制备组织样液组织样液：苹果洗净、去皮、切：苹果洗净、去皮、切块块取取5g5g加少许石英砂研磨加少许石英砂研磨加加5mL5mL水再水再研磨研磨漏斗垫纱布后过滤，得到样液漏斗垫纱布后过滤，得到样液(2)2)鉴定鉴定样液：取样液：取2mL2mL样液于试管中样液于试管中注入注入 2
3、mL2mL刚配制的刚配制的斐林试剂斐林试剂，振荡混合振荡混合（淡蓝色）（淡蓝色）水浴煮沸水浴煮沸2min2min左右，观察溶液颜色变化左右，观察溶液颜色变化（先变为（先变为棕色棕色，再变为，再变为砖红色砖红色）制备生物制备生物组织样液组织样液取材、研磨、过滤取材、研磨、过滤取样取样取取2ml组织样液注入试管注入试管中组织样液注入试管注入试管中注入试剂注入试剂向试管中注入向试管中注入2 ml刚配制的斐林试剂刚配制的斐林试剂加热和观察加热和观察(将将45滴乙液滴入滴乙液滴入2ml甲液中甲液中)v2、脂肪的鉴定、脂肪的鉴定(1)(1)切片制作切片制作(2)(2)染色：在花生子叶切片上滴染色：在花生子
4、叶切片上滴2 23 3滴滴苏丹苏丹染液染液223min3min中后，吸去染液中后，吸去染液 滴体积分数滴体积分数为为5050的酒精的酒精洗去浮色洗去浮色吸去多余的酒精，再吸去多余的酒精，再滴滴12滴蒸馏水，盖上盖玻片滴蒸馏水，盖上盖玻片(3)(3)镜检鉴定：在低倍物镜下观察，找到花生镜检鉴定：在低倍物镜下观察，找到花生子叶切片的最薄处，移至视野中央子叶切片的最薄处，移至视野中央转动转换转动转换器，换用高倍物镜观察（脂肪滴器，换用高倍物镜观察（脂肪滴:橘黄色橘黄色的圆形的圆形小颗粒）小颗粒）制备实验制备实验材料材料去种皮、削平面、切片去种皮、削平面、切片染色染色滴滴23滴苏丹滴苏丹染液染色染液染
5、色23分钟分钟去浮色去浮色在玻片上滴在玻片上滴12滴体积分数为滴体积分数为50%酒精溶液，洗去浮色酒精溶液，洗去浮色制作临制作临时装片时装片放在显微镜下观察（先低倍后高倍）放在显微镜下观察（先低倍后高倍）v2、蛋白质的鉴定、蛋白质的鉴定(1)(1)制备制备组织样液组织样液：浸泡黄豆：浸泡黄豆1 12d2d去皮、切去皮、切成薄片，加少许石英砂及成薄片，加少许石英砂及5mL5mL水研磨水研磨漏斗垫漏斗垫纱布后过滤，得到样液（用蛋清要纱布后过滤，得到样液（用蛋清要稀释稀释1010倍倍以以上，否则实验后黏住试管壁不易洗净）上，否则实验后黏住试管壁不易洗净）(2)(2)鉴定鉴定样液：取样液：取2mL2m
6、L样液于试管样液于试管中中加入加入 2mL2mL双缩脲试剂双缩脲试剂A A液液摇匀摇匀（造成一个（造成一个碱性环境碱性环境）加入加入双缩脲试剂双缩脲试剂B B液液34滴滴，摇匀，注意颜，摇匀，注意颜色变化（溶液变为色变化（溶液变为紫色紫色）。另取）。另取 清水清水于试于试管管中中加入加入 摇匀摇匀 颜色变化，作为颜色变化，作为 。2mL2mL（A液、液、B液）液）无无对照对照制备生物制备生物组织样液组织样液取材研磨过滤或制备蛋清液取材研磨过滤或制备蛋清液注入组织注入组织样液样液取一支试管注入黄豆组织液（或蛋清液）取一支试管注入黄豆组织液（或蛋清液）2ml注入试剂注入试剂A加入加入2ml双缩尿试
7、剂双缩尿试剂A加入双加入双缩尿试缩尿试剂剂B观察颜观察颜色变化色变化五、注意事项五、注意事项1斐林试剂很不稳定，故应将组成斐林试剂斐林试剂很不稳定，故应将组成斐林试剂甲液（甲液（0.1g/ml的的NaOH溶液）和乙液（溶液）和乙液（0.05 g/ml 的硫酸铜溶液的硫酸铜溶液）分别配制、储存，使用）分别配制、储存，使用时再临时配制，将时再临时配制，将45滴乙液滴入滴乙液滴入2 ml 甲液甲液中，配完后立即使用。中，配完后立即使用。2 双缩尿试剂的使用，应先加双缩尿试剂的使用，应先加A（0.1g/ml的的NaOH溶液），造成碱性的反应环境，再加溶液），造成碱性的反应环境，再加B液（液（0.01g
8、/ml 的硫酸铜溶液的硫酸铜溶液）。）。5在鉴定脂肪的实验中，若用花生作实验在鉴定脂肪的实验中，若用花生作实验材料，必须提前浸泡材料，必须提前浸泡34个小时，浸泡时间短，个小时，浸泡时间短，不易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下的不易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下的薄片不易成型，染色时间不易过长。薄片不易成型，染色时间不易过长。4在蛋白质的鉴定试验中，若用蛋白质作实在蛋白质的鉴定试验中，若用蛋白质作实验材料，必须稀释，以免实验后粘住试管，不易验材料，必须稀释，以免实验后粘住试管，不易洗刷。洗刷。3在鉴定可溶性还原糖的实验中，对试管中在鉴定可溶性还原糖的实验中，对试管中的溶液进行加热时，
9、试管底部不要触及烧杯底部，的溶液进行加热时，试管底部不要触及烧杯底部，另外，试管口不要朝向实验者，以免沸腾的熔液冲另外，试管口不要朝向实验者，以免沸腾的熔液冲出试管，造成烫伤。出试管，造成烫伤。课堂练习课堂练习1、用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，、用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液颜色的变化过程是（溶液颜色的变化过程是（）A、无色无色砖红色（沉淀）砖红色（沉淀）B、浅浅蓝色蓝色砖红色（沉淀）砖红色（沉淀）C、浅蓝色浅蓝色蓝色蓝色砖红色（沉淀）砖红色（沉淀）D、浅蓝色、浅蓝色棕色棕色砖红色（沉淀）砖红色（沉淀）D2、在用双缩尿试剂鉴定蛋白质实验时，正确的操、在用双缩尿试剂鉴定蛋白质实验时，正确的操
10、作是（作是（）A、2ml蛋白质稀释液先加蛋白质稀释液先加0.1g/ml的的NaOH，再再加加34滴滴0.01 g/ml CuSO4溶液。溶液。B、2ml蛋白质稀释液先加蛋白质稀释液先加34滴滴0.01 g/ml CuSO4溶液，再加溶液，再加0.1g/ml的的NaOH C、2ml蛋白质稀释液，同时加蛋白质稀释液，同时加34滴滴0.01 g/ml CuSO4和和0.1g/ml的的NaOH 混合液。混合液。D、在在NaOH和和 CuSO4混合液中加入蛋白质稀释混合液中加入蛋白质稀释液。液。A3、用苏丹、用苏丹染液对脂肪组织进行染色时，染液对脂肪组织进行染色时，可用来冲洗浮色的药品是（可用来冲洗浮色
11、的药品是（）A、HCI；B、H2 O；C、50%的的酒精；酒精；D、无水酒精。无水酒精。4、下列哪个实验用到显微镜（、下列哪个实验用到显微镜（）A、可溶性还原糖的鉴定；可溶性还原糖的鉴定；B、蛋白质的蛋白质的鉴定；鉴定；C、脂肪的鉴定；脂肪的鉴定；D、淀粉的鉴定。淀粉的鉴定。CC5、下列哪种试剂在使用过程中，必须经过加、下列哪种试剂在使用过程中，必须经过加热（热（）A、斐林试剂鉴定可溶性还原糖的过程中；斐林试剂鉴定可溶性还原糖的过程中；B、苏丹苏丹 在鉴定动物组织中的脂肪时；在鉴定动物组织中的脂肪时；C、双缩尿试剂鉴定蛋白质时；双缩尿试剂鉴定蛋白质时；D、碘化钾溶液鉴定淀粉时。碘化钾溶液鉴定淀
12、粉时。6、下列糖中能与斐林试剂反应产生砖红色沉、下列糖中能与斐林试剂反应产生砖红色沉淀的是（淀的是（）A、淀粉；淀粉；B、果糖；果糖；C、蔗糖；蔗糖；D、纤维素。纤维素。AB在蛋白质鉴定实验中，必须先加在蛋白质鉴定实验中，必须先加A液再液再加加B液的原因是液的原因是:为什么加入为什么加入34滴滴B液而不能过量？液而不能过量？在碱性溶液中，蛋白质容易与在碱性溶液中，蛋白质容易与Cu2+发生紫发生紫色反应，否则就容易生成蓝色色反应，否则就容易生成蓝色Cu(OH)2沉沉淀对实验现象有遮蔽作用淀对实验现象有遮蔽作用加入过量的双缩尿试剂加入过量的双缩尿试剂 B液，液，CuSO4在在碱性溶液中生成大量的蓝色碱性溶液中生成大量的蓝色Cu(OH)2沉淀会遮蔽所产生的紫色。沉淀会遮蔽所产生的紫色。