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1、 一、验证鉴定类实验一、验证鉴定类实验1实验目的实验目的针对已知的生物学事实进行验证，巩固和加强针对已知的生物学事实进行验证，巩固和加强有关知识内容，培养实验操作能力。有关知识内容，培养实验操作能力。2常用方法和技术常用方法和技术(1)研磨、过滤：研磨、过滤：如生物组织样液制备。如生物组织样液制备。(2)颜色反应：颜色反应：如生物组织中有机物的鉴定。如生物组织中有机物的鉴定。(3)纸层析法：纸层析法：如叶绿体中色素的分离。如叶绿体中色素的分离。(4)同位素示踪法：同位素示踪法：如噬菌体侵染细菌实验。如噬菌体侵染细菌实验。12/6/202223特定化学物质的检测方法特定化学物质的检测方法常用指示
2、常用指示剂剂或指示物或指示物作用作用现现象象碘液碘液检测检测淀粉淀粉变蓝变蓝斐林斐林试剂试剂检测还检测还原糖原糖砖红砖红色沉淀色沉淀双双缩脲试剂缩脲试剂检测检测蛋白蛋白质质紫色紫色苏苏丹丹/染液染液检测检测脂肪脂肪橘黄色橘黄色/红红色色Ca(OH)2溶液溶液检测检测CO2石灰水石灰水变浑浊变浑浊二苯胺二苯胺鉴鉴定定DNA蓝蓝色色余烬木条余烬木条检测检测O2木条复燃木条复燃12/6/20223二、还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定二、还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定基础梳理基础梳理1 1、实验原理、实验原理 某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生物产生特定的
3、颜色反应特定的颜色反应。还原糖还原糖+斐林试剂斐林试剂 砖红色沉淀砖红色沉淀脂肪脂肪+苏丹苏丹染液染液橘黄色橘黄色苏丹苏丹染液染液红色红色蛋白质蛋白质+双缩脲试剂双缩脲试剂紫色紫色沸水浴沸水浴12/6/202242 2实验流程实验流程(1)(1)还原糖的鉴定还原糖的鉴定甲液和乙液甲液和乙液等量混合等量混合均匀均匀后使用后使用12/6/20225（2）脂肪的鉴定）脂肪的鉴定取材：花生种子浸泡取材：花生种子浸泡3 34h4h，去皮，将子叶削成薄片，去皮，将子叶削成薄片 制片制片（1）取最理想的薄片）取最理想的薄片（2）在薄片上滴）在薄片上滴23滴苏丹滴苏丹染色染色23 min（3）去浮色（体积分数
4、为）去浮色（体积分数为50%的酒精）的酒精）（4）制成临时装片）制成临时装片观察：在低倍镜下寻找到已着色的圆形小颗粒观察：在低倍镜下寻找到已着色的圆形小颗粒 然后用高倍镜观察，可观察到橘黄色颗粒然后用高倍镜观察，可观察到橘黄色颗粒结论：花生种子中含有脂肪结论：花生种子中含有脂肪12/6/20226（3）蛋白质的鉴定）蛋白质的鉴定组织样液中有蛋白质。组织样液中有蛋白质。12/6/20227升华提高升华提高一、实验材料的选择一、实验材料的选择（1）还原糖的鉴定实验中，最理想的实验材料是）还原糖的鉴定实验中，最理想的实验材料是含还原糖量较高含还原糖量较高的生物组织（或器官），而且组的生物组织（或器官
5、），而且组织的织的颜色较浅颜色较浅，易于观察。可选用，易于观察。可选用苹果、梨苹果、梨、白、白色甘蓝叶、白萝卜等。色甘蓝叶、白萝卜等。不能选用甜菜、甘蔗，因为它们所含的蔗糖是一种非还不能选用甜菜、甘蔗，因为它们所含的蔗糖是一种非还原糖原糖;马铃薯因含淀粉较多也不能做实验材料；不能选西马铃薯因含淀粉较多也不能做实验材料；不能选西瓜、血液（含葡萄糖）、含还原糖的绿色叶片等做实验瓜、血液（含葡萄糖）、含还原糖的绿色叶片等做实验材料材料,以避免颜色的干扰。以避免颜色的干扰。思考：能不能选用甜菜、甘蔗、马铃薯、西瓜、血液、思考：能不能选用甜菜、甘蔗、马铃薯、西瓜、血液、韭菜？韭菜？12/6/20228（
6、2）脂肪的鉴定实验中，实验材料最好选）脂肪的鉴定实验中，实验材料最好选富含脂肪且体富含脂肪且体积比较大积比较大的种子，才有利于徒手切片，如花生种子。的种子，才有利于徒手切片，如花生种子。课堂练习课堂练习1：（2007年江苏生物，年江苏生物，19）若以鸡蛋蛋白液为）若以鸡蛋蛋白液为材料进行蛋白质鉴定实验，发现蛋白液与双缩脲试剂发生材料进行蛋白质鉴定实验，发现蛋白液与双缩脲试剂发生反应后会粘固在试管壁上。下列关于这一现象形成原因的反应后会粘固在试管壁上。下列关于这一现象形成原因的描述中，正确的是（描述中，正确的是（）A.鸡蛋蛋白液稀释不够，搅拌不匀鸡蛋蛋白液稀释不够，搅拌不匀 B.只添加了双缩脲试
7、剂只添加了双缩脲试剂A，未添加双缩脲试剂，未添加双缩脲试剂B C.鸡蛋蛋白液不是合适的实验材料鸡蛋蛋白液不是合适的实验材料 D.蛋白液与双缩脲试剂的反应时间不够长蛋白液与双缩脲试剂的反应时间不够长A（3）蛋白质的鉴定实验中，最好选用）蛋白质的鉴定实验中，最好选用富含蛋白质富含蛋白质的生物的生物组织，植物材料常用的是大豆，动物材料常用的是鸡蛋的组织，植物材料常用的是大豆，动物材料常用的是鸡蛋的蛋清（蛋清（一定要稀释一定要稀释）。）。12/6/20229思考：思考：斐林试剂与双缩脲试剂在使用时能相互替代吗？为斐林试剂与双缩脲试剂在使用时能相互替代吗？为什么？什么？12/6/202210二、斐林试剂
8、与双缩脲试剂的比较分析二、斐林试剂与双缩脲试剂的比较分析 比较项目比较项目 斐林试剂斐林试剂 双缩脲试剂双缩脲试剂不不同同点点浓度浓度 反应原理反应原理使用方法使用方法呈色反应条件呈色反应条件颜色颜色 相同点相同点乙液乙液CuSO4CuSO4浓度浓度0.05g/mL0.05g/mLB B液液CuSO4CuSO4浓度为浓度为0.01g/mL0.01g/mL还原糖中的醛基被还原糖中的醛基被CuCu（OHOH）2 2氧化，氧化，CuCu（OHOH）2 2被还原为被还原为CuCu2 2O O具有两个上肽键的化具有两个上肽键的化合物在碱性条件下与合物在碱性条件下与CuCu2+2+反应生成络合物反应生成络
9、合物甲液和乙液甲液和乙液混合均匀后方混合均匀后方可使用，且现配现用可使用，且现配现用使用时使用时先加先加A A液摇匀液摇匀后，再加后，再加B B液液需加热煮沸需加热煮沸不需加热即可反应不需加热即可反应砖红色砖红色紫色紫色都含有都含有NaOHNaOH、CuSO4CuSO4两种成分，且所用两种成分，且所用NaOHNaOH浓度浓度都是都是0.1 0.1 g/mLg/mL12/6/202211、鉴定蛋白质时，向匀浆中加入、鉴定蛋白质时，向匀浆中加入2mL双缩脲试双缩脲试剂剂A时摇匀，再加入时摇匀，再加入34滴双缩脲试剂滴双缩脲试剂B摇匀。其摇匀。其中中双缩脲试剂双缩脲试剂B的量不能过量的量不能过量，因
10、为过量的双缩，因为过量的双缩脲试剂脲试剂B会与试剂会与试剂A反应，使溶液呈蓝色，从而掩反应，使溶液呈蓝色，从而掩盖生成的紫色。盖生成的紫色。12/6/202212课堂练习课堂练习2：A12/6/202213课堂练习课堂练习3、下列关于实验操作步骤的叙述中，正下列关于实验操作步骤的叙述中，正确的是确的是()()A.A.用于鉴定还原糖的斐林试剂甲液和乙液，可直接用于鉴定还原糖的斐林试剂甲液和乙液，可直接用于蛋白质的鉴定用于蛋白质的鉴定B.B.脂肪的鉴定需要用显微镜才能看到被染成橘黄色脂肪的鉴定需要用显微镜才能看到被染成橘黄色的圆形小颗粒的圆形小颗粒C.C.用于鉴定蛋白质的双缩脲试剂用于鉴定蛋白质的
11、双缩脲试剂A A液与液与B B液要混合均液要混合均匀后，再加入到含样品的试管中，且必须现配现用匀后，再加入到含样品的试管中，且必须现配现用D.D.在鉴定脂肪的实验中，苏丹在鉴定脂肪的实验中，苏丹染液染色的时间比染液染色的时间比苏丹苏丹染液染色的时间长染液染色的时间长B12/6/202214课堂练习课堂练习4 4.（20092009西安模拟）在下列四支试管中分别加西安模拟）在下列四支试管中分别加入一些物质。甲试管：豆浆；乙试管：氨基酸溶液；丙试入一些物质。甲试管：豆浆；乙试管：氨基酸溶液；丙试管：牛奶和蛋白酶；丁试管：人血液中的红细胞和蒸馏水。管：牛奶和蛋白酶；丁试管：人血液中的红细胞和蒸馏水。
12、上述四支试管中加入双缩脲试剂振荡后，有紫色反应的是上述四支试管中加入双缩脲试剂振荡后，有紫色反应的是()()A.A.乙、丙、丁乙、丙、丁 B.B.甲、乙、丁甲、乙、丁C.C.甲、乙、丙甲、乙、丙 D.D.甲、丙、丁甲、丙、丁【解析解析】。双缩脲试剂能与蛋白质或多肽发生紫色反应，。双缩脲试剂能与蛋白质或多肽发生紫色反应，甲试管中有豆浆，丙中有牛奶和蛋白酶，故甲、丙两试管甲试管中有豆浆，丙中有牛奶和蛋白酶，故甲、丙两试管均出现紫色，丁试管中红细胞在蒸馏水中会吸水涨破流出均出现紫色，丁试管中红细胞在蒸馏水中会吸水涨破流出血红蛋白，血红蛋白也是蛋白质，故丁试管也出现紫色，血红蛋白，血红蛋白也是蛋白质，
13、故丁试管也出现紫色，而乙试管中是氨基酸，不发生紫色反应，故能发生紫色反而乙试管中是氨基酸，不发生紫色反应，故能发生紫色反应的试管是甲、丙、丁。应的试管是甲、丙、丁。D12/6/202215课堂练习课堂练习5：（20082008重庆重庆T T3030）在对大豆萌发）在对大豆萌发种子进行定量测定之前，进行了蛋白质含量变化的种子进行定量测定之前，进行了蛋白质含量变化的预测实验，请填充实验原理；判断实验步骤中划线预测实验，请填充实验原理；判断实验步骤中划线部分是否正确，并更正错误之处；写出实验结果。部分是否正确，并更正错误之处；写出实验结果。（1 1）实验原理：蛋白质）实验原理：蛋白质_，其颜色深，其
14、颜色深浅与蛋白质含量成正比。浅与蛋白质含量成正比。（2 2）实验步骤：）实验步骤：将三份等量大豆种子分别萌发将三份等量大豆种子分别萌发1 1、5 5、9 9天后取出，天后取出，各加入适量蒸馏水，研碎、提取，定容后离心得到各加入适量蒸馏水，研碎、提取，定容后离心得到蛋白质制备液；蛋白质制备液；取取3 3支试管，编号支试管，编号1 1、2 2、3 3，分别加入等量的萌发，分别加入等量的萌发1 1、5 5、9 9天的蛋白质制备液；天的蛋白质制备液；与双缩脲试剂作与双缩脲试剂作用产生紫色反应用产生紫色反应12/6/202216在上述试管中各加入等量的在上述试管中各加入等量的a.a.双缩脲试剂双缩脲试剂A A和和B B(按比例配制按比例配制)的混合液的混合液，振荡均匀后，振荡均匀后，b.b.在沸水浴中加热观察在沸水浴中加热观察颜色变化。颜色变化。a:_a:_。b:_b:_。(3)(3)实验结果：实验结果：_。更正：先加入双缩脲试剂更正：先加入双缩脲试剂A混合均匀后，再混合均匀后，再 加入双缩脲试剂加入双缩脲试剂B 更正：不加热或直接观察更正：不加热或直接观察1、2、3号试管中颜色依次加深号试管中颜色依次加深12/6/202217