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1、实验果蝇唾腺染色体实验果蝇唾腺染色体1 1现在学习的是第1页，共33页果蝇的染色体果蝇的染色体2 2现在学习的是第2页，共33页唾唾腺腺染染色色体体3 3现在学习的是第3页，共33页一、实验目的一、实验目的1.观察果蝇的唾腺染色体形态特征；观察果蝇的唾腺染色体形态特征；2.练习果蝇幼虫唾腺分离技术；练习果蝇幼虫唾腺分离技术；3.掌握果蝇唾腺染色体的制片方法。掌握果蝇唾腺染色体的制片方法。4 4现在学习的是第4页，共33页二、实验材料果蝇三龄幼虫果蝇三龄幼虫越肥越好：多加酵母膏，低温越肥越好：多加酵母膏，低温18培养培养5 5现在学习的是第5页，共33页三、仪器药品解剖镜解剖镜显微镜显微镜镊子、
2、解剖针镊子、解剖针载玻片、盖玻片载玻片、盖玻片吸水纸吸水纸生理盐水生理盐水(0.7)、1mol/L盐酸、改良苯酚品红盐酸、改良苯酚品红6 6现在学习的是第6页，共33页四、原理果蝇幼虫期唾腺的细胞核非常大，唾腺染色果蝇幼虫期唾腺的细胞核非常大，唾腺染色体比其他细胞染色体大体比其他细胞染色体大200多倍。多倍。它们是通过核内有丝分裂形成的多线染色体，它们是通过核内有丝分裂形成的多线染色体，是由于重复分裂后的众多染色线没有分开的结是由于重复分裂后的众多染色线没有分开的结果，一条染色体内含有染色体线多达千条以上。果，一条染色体内含有染色体线多达千条以上。一般来说，多线染色体是处于永久性前期中一般来说
3、，多线染色体是处于永久性前期中的一种体细胞染色体配对形式。它普遍存在于的一种体细胞染色体配对形式。它普遍存在于双翅目昆虫某些物种的幼虫唾腺细胞内，是研双翅目昆虫某些物种的幼虫唾腺细胞内，是研究唾腺染色体常用的材料。究唾腺染色体常用的材料。7 7现在学习的是第7页，共33页四、原理果蝇的体细胞中有果蝇的体细胞中有4对染色体。果蝇（三龄）对染色体。果蝇（三龄）幼虫唾腺细胞的染色体叫做唾腺染色体。这种幼虫唾腺细胞的染色体叫做唾腺染色体。这种染色体比正常的处于有丝分裂期的染色体大得染色体比正常的处于有丝分裂期的染色体大得多，因而又称为巨大（多线）染色体。多，因而又称为巨大（多线）染色体。巨大染色体上有
4、许多横纹，这些模纹的数目巨大染色体上有许多横纹，这些模纹的数目和位置是相对恒定的。和位置是相对恒定的。由于果蝇唾腺细胞中的同源染色体两两配对由于果蝇唾腺细胞中的同源染色体两两配对时总是紧密结合在一起，当其中一条染色体发时总是紧密结合在一起，当其中一条染色体发生结构变异时，就很容易被识别出来。因此，生结构变异时，就很容易被识别出来。因此，果蝇唾腺染色体是观察染色体形态、研究染色果蝇唾腺染色体是观察染色体形态、研究染色体结构变异的好材料。体结构变异的好材料。8 8现在学习的是第8页，共33页四、原理通常认为果蝇唾腺染色体处于体细胞同源染通常认为果蝇唾腺染色体处于体细胞同源染色体的配对状态，所以染色
5、体看上去只有半数色体的配对状态，所以染色体看上去只有半数(n)。它们的巨大性是染色体多次复制而不分开的它们的巨大性是染色体多次复制而不分开的结果。结果。每条染色体大约有每条染色体大约有1 0004 000条复制成的染条复制成的染色体细丝组成，因而又叫做多线染色体。色体细丝组成，因而又叫做多线染色体。9 9现在学习的是第9页，共33页果蝇唾腺染色体果蝇唾腺染色体果蝇唾腺染色体果蝇唾腺染色体1010现在学习的是第10页，共33页果蝇唾腺染色体果蝇唾腺染色体1111现在学习的是第11页，共33页五、实验步骤1.选取三龄幼虫选取三龄幼虫2.拉唾腺拉唾腺3.低渗水解低渗水解4.染色染色5.压片压片6.镜
6、检镜检7.永久片的制作永久片的制作 1212现在学习的是第12页，共33页五、实验步骤1、辨别头尾、辨别头尾 选取肥大的果蝇三龄幼虫作为实验材料。选取肥大的果蝇三龄幼虫作为实验材料。在一块洁净的载玻片的中央滴一滴在一块洁净的载玻片的中央滴一滴0.75%的的NaCl溶液，将爬到瓶壁上的肥大并行动迟缓溶液，将爬到瓶壁上的肥大并行动迟缓的三龄幼虫放在载玻片上的的三龄幼虫放在载玻片上的NaCl溶液中，在溶液中，在放大镜下辨认幼虫的头部和尾部，可以看到幼放大镜下辨认幼虫的头部和尾部，可以看到幼虫的头部有一个小黑点（神经节）。虫的头部有一个小黑点（神经节）。1313现在学习的是第13页，共33页五、实验步
7、骤1414现在学习的是第14页，共33页五、实验步骤2 2、幼虫的解剖、幼虫的解剖将幼虫置于生理盐水内，一手（左手）持解剖针按住幼虫末将幼虫置于生理盐水内，一手（左手）持解剖针按住幼虫末将幼虫置于生理盐水内，一手（左手）持解剖针按住幼虫末将幼虫置于生理盐水内，一手（左手）持解剖针按住幼虫末端的端的端的端的1/3处，以固定幼虫。另一手（右手）持针揿住幼虫头处，以固定幼虫。另一手（右手）持针揿住幼虫头处，以固定幼虫。另一手（右手）持针揿住幼虫头处，以固定幼虫。另一手（右手）持针揿住幼虫头部正中，用力向前拉，把头部从身体拉开，腺体即随之而部正中，用力向前拉，把头部从身体拉开，腺体即随之而部正中，用力
8、向前拉，把头部从身体拉开，腺体即随之而部正中，用力向前拉，把头部从身体拉开，腺体即随之而出。出。出。出。如果头部被拉断，腺体没有拉出，可以用右手持解剖针如果头部被拉断，腺体没有拉出，可以用右手持解剖针如果头部被拉断，腺体没有拉出，可以用右手持解剖针如果头部被拉断，腺体没有拉出，可以用右手持解剖针从左手的解剖针附近的腹部缓缓向头部挤压，这样也可从左手的解剖针附近的腹部缓缓向头部挤压，这样也可从左手的解剖针附近的腹部缓缓向头部挤压，这样也可从左手的解剖针附近的腹部缓缓向头部挤压，这样也可以压出唾液腺。以压出唾液腺。以压出唾液腺。以压出唾液腺。唾腺为半透明的小囊状，低倍镜下为两层规则排列的唾腺为半透
9、明的小囊状，低倍镜下为两层规则排列的细胞组成。其上附有白色的脂肪带，食道两侧各有一细胞组成。其上附有白色的脂肪带，食道两侧各有一个。找到唾腺后尽可能把腺体上的脂肪剔除。个。找到唾腺后尽可能把腺体上的脂肪剔除。1515现在学习的是第15页，共33页五、实验步骤1616现在学习的是第16页，共33页五、实验步骤1717现在学习的是第17页，共33页五、实验步骤 解剖针解剖针解剖针解剖针 解剖针解剖针解剖针解剖针1818现在学习的是第18页，共33页五、实验步骤1919现在学习的是第19页，共33页五、实验步骤3 3、染色前处理、染色前处理、染色前处理、染色前处理 清除残体，使载片上只留下唾腺。清除
10、残体，使载片上只留下唾腺。4 4、低渗处理、低渗处理、低渗处理、低渗处理往唾液腺上滴一滴往唾液腺上滴一滴往唾液腺上滴一滴往唾液腺上滴一滴0.4%的的NaClNaCl溶液，低渗处理溶液，低渗处理2 min，使唾液腺膨胀。使唾液腺膨胀。5 5、水解、水解、水解、水解 用小片吸水纸吸除水分及破碎组织（当心切勿将唾液腺用小片吸水纸吸除水分及破碎组织（当心切勿将唾液腺用小片吸水纸吸除水分及破碎组织（当心切勿将唾液腺用小片吸水纸吸除水分及破碎组织（当心切勿将唾液腺吸走）在唾液腺上滴两滴吸走）在唾液腺上滴两滴吸走）在唾液腺上滴两滴吸走）在唾液腺上滴两滴7%7%的盐酸（的盐酸（的盐酸（的盐酸（1mol/L H
11、Cl1mol/L HCl），水），水），水），水解解解解2 min2 min（不超过（不超过（不超过（不超过3 min3 min）。然后用清水反复滴洗几次）。然后用清水反复滴洗几次）。然后用清水反复滴洗几次）。然后用清水反复滴洗几次,洗去洗去洗去洗去盐酸（一边滴清水，一边用吸水纸从材料旁边吸水），盐酸（一边滴清水，一边用吸水纸从材料旁边吸水），盐酸（一边滴清水，一边用吸水纸从材料旁边吸水），盐酸（一边滴清水，一边用吸水纸从材料旁边吸水），再用吸水纸吸干周围的水分。再用吸水纸吸干周围的水分。再用吸水纸吸干周围的水分。再用吸水纸吸干周围的水分。2020现在学习的是第20页，共33页五、实验步骤21
12、21现在学习的是第21页，共33页五、实验步骤加入盐酸后的唾腺加入盐酸后的唾腺 2222现在学习的是第22页，共33页五、实验步骤6、染色、染色 滴上几滴改良苯酚品红于唾腺上，染色滴上几滴改良苯酚品红于唾腺上，染色812分钟。分钟。7、压片、压片 在载片上加盖玻片，盖片上覆盖一吸水纸，在载片上加盖玻片，盖片上覆盖一吸水纸，然后以母指适当用力压片，要求将唾腺细胞核然后以母指适当用力压片，要求将唾腺细胞核压破，染色体伸展开来而不破碎为好。压破，染色体伸展开来而不破碎为好。2323现在学习的是第23页，共33页五、实验步骤8、显微镜下观察、显微镜下观察 压好的玻片标本，用显微镜可以看到四对染压好的玻
13、片标本，用显微镜可以看到四对染色体，第一对染色体（色体，第一对染色体（X-）组成一个长条，第）组成一个长条，第二和第三对各自组成了具有左右两臂的染色体二和第三对各自组成了具有左右两臂的染色体对，它们都以中部的着丝区聚集，而第四对染对，它们都以中部的着丝区聚集，而第四对染色体很小，分布在着丝区呈点状或盘状。这样，色体很小，分布在着丝区呈点状或盘状。这样，从压好的较为模式的片子中便可看到五条弯曲从压好的较为模式的片子中便可看到五条弯曲展开的染色体臂（展开的染色体臂（X-、L、R、L、R），和一个点状的第四染色体对，它们在），和一个点状的第四染色体对，它们在着丝区构成染色中心并向四周伸开。着丝区构成
14、染色中心并向四周伸开。2424现在学习的是第24页，共33页果蝇唾腺染色体果蝇唾腺染色体2525现在学习的是第25页，共33页果蝇唾腺染色体果蝇唾腺染色体果蝇唾腺染色体果蝇唾腺染色体2626现在学习的是第26页，共33页五、实验步骤9、永久片的制作、永久片的制作（方法一）（方法一）（1）使盖片向下放入盛有）使盖片向下放入盛有45%醋酸醋酸+95%酒酒精（精（1:1）的培养皿中。一端垫上一玻棒，使）的培养皿中。一端垫上一玻棒，使玻片稍为倾斜，约过玻片稍为倾斜，约过510分钟，可见盖片与载分钟，可见盖片与载片分离。用镊子轻轻取出盖片于吸水纸上。片分离。用镊子轻轻取出盖片于吸水纸上。（2）有材料的一
15、面向上，放入盛有）有材料的一面向上，放入盛有95%酒精酒精+叔丁醇（叔丁醇（1:1）的培养皿中三分钟。）的培养皿中三分钟。（3）换入纯叔丁醇中三分钟。）换入纯叔丁醇中三分钟。（4）用中性树胶封片。）用中性树胶封片。2727现在学习的是第27页，共33页五、实验步骤9、永久片的制作（方法二）、永久片的制作（方法二）依此将具有叫好图象的片子移入下列染色缸依此将具有叫好图象的片子移入下列染色缸中：中：Carnoy固定液（在固定液中的时间以盖片脱固定液（在固定液中的时间以盖片脱下为标准）下为标准）100%乙醇，乙醇，1min100%乙醇，乙醇，1min二甲苯，二甲苯，5min加一滴加拿大树胶封片，封胶
16、干后观察，贴加一滴加拿大树胶封片，封胶干后观察，贴上标签。上标签。2828现在学习的是第28页，共33页六、注意事项1.1.在整个装片制作过程中应防止唾液腺干燥（加生理在整个装片制作过程中应防止唾液腺干燥（加生理盐水，但不可太多，否则幼虫会漂浮而且活跃，吸水盐水，但不可太多，否则幼虫会漂浮而且活跃，吸水时勿将唾腺一起吸走）。时勿将唾腺一起吸走）。2.为了得到更好的染色体标本，应在为了得到更好的染色体标本，应在为了得到更好的染色体标本，应在为了得到更好的染色体标本，应在2025和营养良好和营养良好和营养良好和营养良好的条件下饲养果蝇，这样可以得到较大的幼虫。的条件下饲养果蝇，这样可以得到较大的幼
17、虫。的条件下饲养果蝇，这样可以得到较大的幼虫。的条件下饲养果蝇，这样可以得到较大的幼虫。3.染色时间不可过长，否则背景也着色。染色时间不可过长，否则背景也着色。染色时间不可过长，否则背景也着色。染色时间不可过长，否则背景也着色。4.4.染色完以后，将旧的染色液吸去，加新的染色液，再染色完以后，将旧的染色液吸去，加新的染色液，再染色完以后，将旧的染色液吸去，加新的染色液，再染色完以后，将旧的染色液吸去，加新的染色液，再压片。压片。压片。压片。5.5.用摇蚊幼虫（即鱼饵红虫子）可以代替果蝇三龄幼虫做实用摇蚊幼虫（即鱼饵红虫子）可以代替果蝇三龄幼虫做实用摇蚊幼虫（即鱼饵红虫子）可以代替果蝇三龄幼虫做
18、实用摇蚊幼虫（即鱼饵红虫子）可以代替果蝇三龄幼虫做实验材料。验材料。验材料。验材料。2929现在学习的是第29页，共33页七、实验报告绘出你所观察到的唾腺和唾腺染色体图像绘出你所观察到的唾腺和唾腺染色体图像，注意绘出唾腺细胞排列及唾腺染色体显示的明注意绘出唾腺细胞排列及唾腺染色体显示的明暗带。暗带。3030现在学习的是第30页，共33页八、思考题唾腺染色体有哪些特点？为什么选用三龄虫唾腺染色体有哪些特点？为什么选用三龄虫？试分析。？试分析。3131现在学习的是第31页，共33页唾腺染色体唾腺染色体唾腺染色体唾腺染色体 salivary gland chromosomealivary chrom
19、osome 双翅类昆虫唾腺细胞的间期核中所看到的巨双翅类昆虫唾腺细胞的间期核中所看到的巨型染色体。型染色体。E.G.Balbiani（1881）首次看到了）首次看到了它的带状结构，但到后来，它的带状结构，但到后来，E.Heitz和和H.Bauer（1933）以及）以及T.S.Parnter（1933）才）才指出它在细胞学上的意义。指出它在细胞学上的意义。小知识小知识小知识小知识3232现在学习的是第32页，共33页唾腺染色体唾腺染色体唾腺染色体的显著特征是：唾腺染色体的显著特征是：唾腺染色体的显著特征是：唾腺染色体的显著特征是：（1 1）形状为带状，宽达）形状为带状，宽达）形状为带状，宽达）形
20、状为带状，宽达5 5毫微米，长达毫微米，长达毫微米，长达毫微米，长达400400毫微米它相当于普通染色体的毫微米它相当于普通染色体的毫微米它相当于普通染色体的毫微米它相当于普通染色体的100100150150倍；倍；倍；倍；（2 2）核不分裂，由于染色体不断复制，形成了多线性染色体，宽度）核不分裂，由于染色体不断复制，形成了多线性染色体，宽度）核不分裂，由于染色体不断复制，形成了多线性染色体，宽度）核不分裂，由于染色体不断复制，形成了多线性染色体，宽度增加，同时长度也增加，成为巨型染色体；增加，同时长度也增加，成为巨型染色体；增加，同时长度也增加，成为巨型染色体；增加，同时长度也增加，成为巨型
21、染色体；（3 3）带的全长几乎都有明显的嗜碱性的横纹，横纹的宽度有大有）带的全长几乎都有明显的嗜碱性的横纹，横纹的宽度有大有）带的全长几乎都有明显的嗜碱性的横纹，横纹的宽度有大有）带的全长几乎都有明显的嗜碱性的横纹，横纹的宽度有大有小，密度有疏有密，但是它的数目，位置等等对于同源染色体来说小，密度有疏有密，但是它的数目，位置等等对于同源染色体来说小，密度有疏有密，但是它的数目，位置等等对于同源染色体来说小，密度有疏有密，但是它的数目，位置等等对于同源染色体来说却都是同样的。唾腺染色体的却都是同样的。唾腺染色体的却都是同样的。唾腺染色体的却都是同样的。唾腺染色体的DNADNA含量达含量达含量达含
22、量达40008000c40008000c。横纹被认为。横纹被认为。横纹被认为。横纹被认为是染色小粒横向排列而成的。横纹是详细研究染色体的部分缺失、是染色小粒横向排列而成的。横纹是详细研究染色体的部分缺失、是染色小粒横向排列而成的。横纹是详细研究染色体的部分缺失、是染色小粒横向排列而成的。横纹是详细研究染色体的部分缺失、倒位、重复、反复、易位等现象的标记；倒位、重复、反复、易位等现象的标记；倒位、重复、反复、易位等现象的标记；倒位、重复、反复、易位等现象的标记；（4 4）由于）由于）由于）由于2 2条同源体细胞染色体联会，摇蚊（条同源体细胞染色体联会，摇蚊（条同源体细胞染色体联会，摇蚊（条同源体细胞染色体联会，摇蚊（2n=82n=8）中可认出四条）中可认出四条）中可认出四条）中可认出四条染色体。染色体。染色体。染色体。小知识小知识小知识小知识3333现在学习的是第33页，共33页