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1、遗传学实验二一、实验目的o1.练习练习剖取剖取果蝇三龄幼虫唾腺的方法；果蝇三龄幼虫唾腺的方法；o2.掌握制作果蝇唾腺染色体标本的技术；掌握制作果蝇唾腺染色体标本的技术；o3.观察果蝇唾腺染色体的形态特征。观察果蝇唾腺染色体的形态特征。二、实验原理o双翅类昆虫双翅类昆虫(摇蚊、果蝇等摇蚊、果蝇等)幼虫期的唾腺细幼虫期的唾腺细胞很大，其中的染色体称为胞很大，其中的染色体称为唾腺染色体唾腺染色体(salivary chromosome)；o这种染色体比普通染色体大得多，宽约这种染色体比普通染色体大得多，宽约5m，长约，长约400m，相当于普通染色体的，相当于普通染色体的100-150倍，因而又称为倍
2、，因而又称为巨大染色体巨大染色体；o唾腺染色体经过多次复制而并不分开，大约唾腺染色体经过多次复制而并不分开，大约有有1000-4000根染色体丝的拷贝，所以又称根染色体丝的拷贝，所以又称多线染色体多线染色体(polytene chromosome)；o唾腺细胞中同源染色体互相靠拢呈现联会状唾腺细胞中同源染色体互相靠拢呈现联会状态态体联会体联会；o各染色体的异染色质多的着丝粒部分互相靠各染色体的异染色质多的着丝粒部分互相靠拢形成拢形成染色中心染色中心(chromocenter)；o唾腺染色体经染色后，出现深浅不同、密疏唾腺染色体经染色后，出现深浅不同、密疏各别的各别的横纹横纹(band)，其数目
3、和位置是恒定的，其数目和位置是恒定的，代表着种的特征；代表着种的特征；o如果染色体有缺失、重复、倒位、易位等畸如果染色体有缺失、重复、倒位、易位等畸变，很容易在唾腺染色体上识别出来，因此变，很容易在唾腺染色体上识别出来，因此唾腺染色体是唾腺染色体是研究染色体畸变的好材料研究染色体畸变的好材料。三、实验材料o黑腹果蝇的三龄幼虫黑腹果蝇的三龄幼虫 为了得到更好的染色体标本，需要为了得到更好的染色体标本，需要在在2025和营养良好的条件下饲养幼和营养良好的条件下饲养幼虫。选择行动迟缓、肥大，爬上管壁的虫。选择行动迟缓、肥大，爬上管壁的三龄幼虫（化蛹之前）做标本最佳。三龄幼虫（化蛹之前）做标本最佳。三
4、龄幼虫照片三龄幼虫照片四、实验仪器与试剂 .器具：器具：双筒体视解剖镜、显微镜、镊子、双筒体视解剖镜、显微镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、培养皿、吸水纸等。解剖针、载玻片、盖玻片、培养皿、吸水纸等。.试剂：试剂：改良苯酚品红溶液、生理盐水、改良苯酚品红溶液、生理盐水、1N盐酸。盐酸。五、实验步骤o实验前知识准备：实验前知识准备：果蝇三龄幼虫的唾腺位于幼虫的头部附近，果蝇三龄幼虫的唾腺位于幼虫的头部附近，可以看看显微照片中的位置可以看看显微照片中的位置（点击图片观察放大图）（点击图片观察放大图）o实验开始实验开始1.唾腺剖取唾腺剖取 把载玻片置于双筒镜下。载玻片上滴把载玻片置于双筒镜下。载玻片
5、上滴加生理盐水加生理盐水1-2滴，取三龄幼虫放在其中，滴，取三龄幼虫放在其中，操作者两手各握一枚解剖针，左手的解剖针操作者两手各握一枚解剖针，左手的解剖针压住幼虫后端压住幼虫后端1/3处，固定幼虫。右手的解处，固定幼虫。右手的解剖针按住幼虫头部，用力向右拉，把头部从剖针按住幼虫头部，用力向右拉，把头部从身体拉开，唾腺随之而出，唾腺是一对透明身体拉开，唾腺随之而出，唾腺是一对透明的棒状腺体的棒状腺体。用针剔除脂肪组织。用针剔除脂肪组织。图示图示2.解离：解离：在载玻片上除去幼虫其它部分，用吸水在载玻片上除去幼虫其它部分，用吸水纸吸去生理盐水，然后在腺体上加纸吸去生理盐水，然后在腺体上加 1-2滴
6、滴1NHCl溶液，作用溶液，作用5-10 min。3.冲洗：冲洗：用吸水纸吸去用吸水纸吸去HCl，滴加蒸馏水于腺体滴加蒸馏水于腺体上进行冲洗（两次）。上进行冲洗（两次）。4.染色：染色：吸去蒸馏水，加吸去蒸馏水，加1-2滴苯酚品红溶液，滴苯酚品红溶液，染色染色10min。5.压片观察：用镊子加盖玻片，压片。镜检。压片观察：用镊子加盖玻片，压片。镜检。六、实验结果1.1.先用低倍物镜观察，找到好的染色体图像后，先用低倍物镜观察，找到好的染色体图像后，放到视野中心，再用高倍镜观察。放到视野中心，再用高倍镜观察。2.黑腹果蝇染色体是黑腹果蝇染色体是2n=24=8（图一图一），但由，但由于体细胞配对，
7、又因短小的第于体细胞配对，又因短小的第4染色体和染色体和X染色染色体的着丝粒在端部，所以染色体的一端在染色体的着丝粒在端部，所以染色体的一端在染色中心上，看上去，各自只形成一条线状和点状中心上，看上去，各自只形成一条线状和点状染色体。只有第染色体。只有第2和第和第3染色体的着丝粒在中央，染色体的着丝粒在中央，它们从染色中心以它们从染色中心以V字形向外伸出（字形向外伸出（2L，2R，3L，3R），因此共有），因此共有6条条（图二图二）。在显微镜下，短小的第在显微镜下，短小的第4染色体有时不易观染色体有时不易观察到，所以最容易识别的是察到，所以最容易识别的是5条条（图三图三）。雄果蝇的雄果蝇的Y
8、Y染色体几乎包含在染色中心里，因为染色体几乎包含在染色中心里，因为是异染色质，看起来染色可能深些。有经验的是异染色质，看起来染色可能深些。有经验的人可以发现雄果蝇的人可以发现雄果蝇的X X染色体比雌果蝇染色体比雌果蝇X X染色体染色体要细些，因为雄性只有一条要细些，因为雄性只有一条X X染色体。染色体。3.唾腺染色体上的横纹宽窄、深浅是一定的，唾腺染色体上的横纹宽窄、深浅是一定的，但在果蝇的特定发育时期，它们会出现不但在果蝇的特定发育时期，它们会出现不连续的膨胀，这称为疏松区（连续的膨胀，这称为疏松区（puff），目前），目前人们认为这是这部分基因被激活的标志。人们认为这是这部分基因被激活的标
9、志。七、绘图 绘制你所观察到的清晰绘制你所观察到的清晰的果蝇唾腺染色体的图像。的果蝇唾腺染色体的图像。八、实验分析与讨论1、根据实验的观察可以确定果蝇的染色体数目吗？2、制备果蝇唾腺染色体需注意哪几个关键步骤？3、利用果蝇唾腺染色体可以进行哪些遗传学研究？九、参考文献o张贵友，普通遗传学实验指导，张贵友，普通遗传学实验指导，北京：清华大学出版社，北京：清华大学出版社，2003o卢龙斗、常重杰，遗传学实验技术，卢龙斗、常重杰，遗传学实验技术，合肥：中国科学技术大学出版社，合肥：中国科学技术大学出版社，1996o刘祖洞、江绍慧，遗传学实验，刘祖洞、江绍慧，遗传学实验，北京：高等教育出版社，北京：高等教育出版社，1987