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1、试验六试验六 小白鼠骨髓细胞染色小白鼠骨髓细胞染色体制备及观察体制备及观察一实验目的一实验目的：1学习小鼠骨髓细胞染色体制备方法。学习小鼠骨髓细胞染色体制备方法。2观察骨髓细胞染色体，计数染色体。观察骨髓细胞染色体，计数染色体。二二原理原理：活跃增值的组织细胞内染色体可用于制片分活跃增值的组织细胞内染色体可用于制片分析，秋水仙素（或以对二氯苯代之）可使析，秋水仙素（或以对二氯苯代之）可使细胞分裂停滞于分裂中期，经染色处理，细胞分裂停滞于分裂中期，经染色处理，可得到清晰的中期染色体标本。可得到清晰的中期染色体标本。三材料试剂三材料试剂1材料：小白鼠；材料：小白鼠；2试剂：试剂：Giemsa染色液
2、，染色液，0.4KCl，2柠柠檬酸钠，固定液（甲醇：冰乙酸檬酸钠，固定液（甲醇：冰乙酸3：1）。）。四操作步骤四操作步骤1实验前实验前48h小鼠腹腔注射秋水仙素小鼠腹腔注射秋水仙素1ml（0.14mg/ml）,(据小鼠体重用量调整据小鼠体重用量调整)或或1ml饱和对二氯苯。饱和对二氯苯。2脱臼处死小鼠，取后肢胫骨和股骨，去两端。脱臼处死小鼠，取后肢胫骨和股骨，去两端。用细针头注射器吸取用细针头注射器吸取2柠檬酸钠柠檬酸钠1ml，反复冲洗，反复冲洗骨髓腔骨髓腔5次，将冲洗液（离心管中）加入次，将冲洗液（离心管中）加入0.4%KCl低渗低渗10min（8ml,37）。）。3离心（离心（1000rp
3、m，8min）,去上清液，加固定去上清液，加固定液液5ml（注意缓慢加入）。充分吹打，使沉淀块（注意缓慢加入）。充分吹打，使沉淀块分散，静置分散，静置10min，再离心，再离心10min，弃上清液，弃上清液，重复一次。重复一次。4用约用约2ml固定液悬浮骨髓细胞成悬液（依固定液悬浮骨髓细胞成悬液（依沉淀量定）。沉淀量定）。5取冷冻载片，距载片取冷冻载片，距载片15cm高度滴下悬液高度滴下悬液（取悬液前吸打均匀），单向吹气展开，（取悬液前吸打均匀），单向吹气展开，酒精灯上文火烘干。酒精灯上文火烘干。6加加Giemsa染液染色染液染色810min，流水冲去，流水冲去染液（注意水流不可急，细流冲去即可），染液（注意水流不可急，细流冲去即可），干燥（晾干），观察，可见分散良好的染干燥（晾干），观察，可见分散良好的染色体。色体。小白鼠的保定和注射小白鼠的保定和注射五结果与讨论五结果与讨论1结果：结果：（1）选取分散良好的染色体绘实物图，上）选取分散良好的染色体绘实物图，上传图片传图片1幅）。幅）。（2）染色体计数（）染色体计数（2n=40）。）。2讨论：讨论：（1）实验前注射秋水仙素的作用？不作此）实验前注射秋水仙素的作用？不作此步会怎样？步会怎样？（2）为何要用冷冻片？烘烤片的作用？）为何要用冷冻片？烘烤片的作用？小鼠骨髓细胞染色体小鼠骨髓细胞染色体