《第九章-吸光光度法-工优秀PPT.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《第九章-吸光光度法-工优秀PPT.ppt（73页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、19.1 9.1 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理 一、概述：一、概述：比色法：比色法：比较溶液比较溶液颜色的深浅颜色的深浅确定组分含量的一种确定组分含量的一种 方法。方法。吸光光度法是基于被测物质的分子对光具有选择吸光光度法是基于被测物质的分子对光具有选择性吸取的特性而建立起来的分析方法。性吸取的特性而建立起来的分析方法。2经证明：不论溶液有无颜色，当确定波长的光通过经证明：不论溶液有无颜色，当确定波长的光通过该溶液时，总有确定程度的吸光作用。并且随单该溶液时，总有确定程度的吸光作用。并且随单位体积内溶液中该物质的质点数目增多，对光的位体积内溶液中该物质的质点数目增多，对光的吸取越强
2、。吸取越强。分光光度法：测量物质对确定波长光线的吸取程度分光光度法：测量物质对确定波长光线的吸取程度确定组分含量的方法。确定组分含量的方法。3特点：特点：灵敏度高：测定下限可达灵敏度高：测定下限可达105106molL-1,10-4%10-5%精确度能够满足微量组分的测定要求：精确度能够满足微量组分的测定要求：相对误差相对误差25 操作简便快速操作简便快速应用广泛应用广泛4化学分析与仪器分析方法比较化学分析与仪器分析方法比较化学分析：常量组分化学分析：常量组分(1%),Er 0.1%0.2%依据化学反应依据化学反应,运用玻璃仪器运用玻璃仪器 精确度高精确度高仪器分析：微量组分仪器分析：微量组分
3、(104104*选择性好选择性好 显色剂在测定波特长无明显吸取。显色剂在测定波特长无明显吸取。比照性好比照性好,max60 nm.max60 nm.*反应生成的有色化合物组成恒定，稳定。反应生成的有色化合物组成恒定，稳定。*显色条件易于限制，重现性好。显色条件易于限制，重现性好。491.显色剂用量（显色剂用量（c(M)、pH确定）确定）9.3.2 显色条件的确定显色条件的确定c(R)c(R)c(R)Fe(SCN)n3-nMo(SCN)32+浅红浅红Mo(SCN)5 橙红橙红Mo(SCN)6-浅红浅红502.显色反应酸度（显色反应酸度（c(M)、c(R)确定）确定）pHpH1pH63 吸光光度法
4、中，仪器测量不准也是误差的主吸光光度法中，仪器测量不准也是误差的主要来源。要来源。A=-lgT=bc A=-lgT=bc 透过率读数误差透过率读数误差DT基本是个常数，因为基本是个常数，因为T的标尺是匀整的，的标尺是匀整的，DT是由仪器刻度读数不行靠引起的误差，和是由仪器刻度读数不行靠引起的误差，和T的大小无关的大小无关 吸光度读数误差吸光度读数误差DA是随着是随着A的不同而变更，因为的不同而变更，因为A的刻的刻度标尺是不匀整的，度标尺是不匀整的，DA随着随着A的增大而增大的增大而增大64 不同的吸光度数值不同的吸光度数值A下，吸光度读数误差带来的测定浓下，吸光度读数误差带来的测定浓度误差度误
5、差dc/c是不同的是不同的65 假设假设T为为0.5%，绘制不同透过率下浓度相对，绘制不同透过率下浓度相对误差变更曲线如图误差变更曲线如图9-16（p254）：）：T过高或过低，过高或过低，dc/c都是很大的，都是很大的，T在适宜的范围内测量误差才是在适宜的范围内测量误差才是可以接受的可以接受的 利用（利用（9-5）公式令其导数为零，求出：）公式令其导数为零，求出：T=0.368（A=0.434）浓度误差最小，约为）浓度误差最小，约为1.4%。661086420204060800.70.40.20.1AT%Er(36.8)0.434浓度测浓度测量的相量的相对误差对误差与与T(或或A)的关的关系
6、系实际工作中，应限制实际工作中，应限制T T在在70 70 10 10,A A在在0.150.151.01.0之间之间 (调调c,b,c,b,)67调整比色皿厚度和取样量等达到调整比色皿厚度和取样量等达到浓度误差大小和浓度误差大小和T/AT/A的读数范围有关：的读数范围有关：T=70 T=7010%/A=0.1510%/A=0.151.01.0时，时，浓度测量误差为浓度测量误差为1.4-2.2%1.4-2.2%；假如要求精确度高些，假如要求精确度高些，68 吸光光度法的应用吸光光度法的应用1.单一组分测定单一组分测定（标准曲线法）（标准曲线法）1)金属离子金属离子:Fe-phen,Ni-丁二酮
7、肟丁二酮肟,Co-钴试剂钴试剂2)磷的测定磷的测定:DNA中含中含P9.2%,RNA中含中含P9.5%,可得核酸量可得核酸量.H3PO4+12(NH4)2MoO4+21HNO3=(NH4)3PO412MoO3+12NH4NO3+12H2O磷钼黄磷钼黄(小小)Sn2+磷钼磷钼(V)蓝蓝(大大)692.2.多组分的测定多组分的测定a)在 1处测组分处测组分x,在 2处测组分处测组分yb)在1处测组分x;在2处测总吸取,扣除x吸取,可求y c)x,y组分不能干脆测定 P254A1=xl1 bcx+yl1 bcy (在1处测得A1)A2=xl2 bcx+yl2 bcy (在2处测得A2)xl l1,y
8、l l1,xl l2,yl l2由由x,y纯液纯液 在在 1,2处分别测得处分别测得703)蛋白质测定蛋白质测定溴甲酚绿、考马司亮蓝等溴甲酚绿、考马司亮蓝等4)氨基酸测定氨基酸测定茚三酮茚三酮(紫色化合物紫色化合物)5)水质检测水质检测:NH4+、NO2-、Mn2+、Fe2+、SO42-、Hg2+-6)药物含量测定药物含量测定比吸光系数定量；荷移比吸光系数定量；荷移光谱法测定光谱法测定.7)紫外吸取紫外吸取(UV):NO2-、NO3-、SO42-、SO32-、CO32-、SCN-、酪氨酸、色氨酸、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋白质等。苯丙氨酸、蛋白质等。精品课件精品课件！精品课件精品课件！73 4.4.协作物组成的测定协作物组成的测定3.3.一元弱酸离解常数的测定一元弱酸离解常数的测定 5.双波长分光光度法消退干扰双波长分光光度法消退干扰 6.导数分光光度法导数分光光度法