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1、家兔血脂含量测定 从高脂饮食家兔血脂和血液流变学的动态变化探讨中医痰瘀证相关的生物学基础 摘要：目的 通过动态视察高脂饲料喂养家兔模型血脂和血液流变学各指标在造模过程中发生的改变及其相互关系，探讨中医“痰”“瘀”证相关的生物学基础。方法 新西兰家兔赐予高脂饲料喂养2周、4周、8周后分别用酶法测定血脂，旋转法测定血浆黏度，微孔滤过法测定红细胞变形性，磁珠法测定凝血酶时间(TT)、部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)等血液流变学指标，用Pearson法进行相关性分析。结果 与一般饮食组比较，高脂饮食家兔血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)在2周快速增高，4周、8周时持
2、在与2周相近的水平(P0.01)；高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)在2周起先增高，在8周增高更加明显(P0.01)；三酰甘油(TG)增高比较缓慢，在8周时明显增多(P0.01)。血浆黏度在高脂饮食2周、4周、8周时显著上升(P0.05或P0.01)；高切、中切、低切变率下红细胞变形指数在2周、4周、8周时均显著降低(P0.01)；TT在2周时降低(P0.05)，4周、8周时降低更加明显(P0.01)；APTT在4周时显著降低。相关性分析显示：TC和LDLC与血浆黏度呈正相关，与红细胞变形性及TT呈负相关。TG与血浆黏度呈正相关，与红细胞变形性呈负相关。HDLC与高切变率下的全血黏度、血浆黏度呈正
3、相关与红细胞变形性及TT呈负相关。结论 在高脂家兔造模过程中，血脂和血液流变学有相关性改变，这些可能反映了中医“痰浊证”与“血瘀证”相关的生物学基础。 关键词：高脂饮食；痰浊证；血瘀证；血脂；血液流变学；家兔 中图分类号：R285.5文献标识码：A文章编号：16721349(2007)10094603 高脂血症家兔动物模型以往多用于动脉粥样硬化相关领域的探讨，近年来，由于该模型同时存在高血脂和血循环障碍这两种病理机制，也被用于中医痰浊和血瘀证候的探讨。中医学认为，证候是对人体运动状态和方式的概括和描述，随时间而动态改变，即其“动态时空”的特征。在以往的报道中，只有关于该模型造模末期家兔血脂、血
4、液流变学改变，尚缺少在造模过程中对家兔血脂和血液流变学改变的动态的视察。探讨表明。血液流变学异样是血瘀证的重要生物学表现，血脂异样与中医痰浊也有亲密的关系。本试验拟通过视察高脂血症家兔血脂、血液流变学随高脂饲料喂养时间的延长而发生的动态改变及其各指标之间的相关关系，探讨痰浊、血瘀证候的动态演化规律的生物学基础。 1材料与方法 11材料 111动物 健康新西兰家兔21只，雌雄不拘，体重(2.03.5)k8，由北京开源兔业养殖场供应，许可证编号：Scxk(京)20060005，动物于宁静环境下单独分笼饲养，室温限制在(231)的范围内，相对湿度60，光线自动限制12 h明暗交替变换，赐予足够清洁饮
5、水。 112试剂 总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)及低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)试剂盒，由首都医科高校临床科技中心供应；凝血酶原时间(PT)测定试剂盒，部分凝血活酶时间(APTT)测定试剂盒，凝血酶时间(TT)测定试剂盒，由美德太平洋科学集团供应。聚乙烯吡咯烷酮(polyvinglpyrrolidone，PVP)，配制红细胞变形液，Sigma公司产品。 113仪器 BeckmanCoulterCX4 Pro全自动生化分析仪，美国Beckman公司生产。LBYN6B全自动清洗血流变仪及微量血浆测试装置，LBYBX3红细胞变形仪，C20002高性能血凝仪，由北京
6、普利生仪器有限公司生产。DL4000B冷冻离心机，由上海安亭科学仪器厂生产。 12方法 121动物分组及处理 将21只家兔随机分为一般饮食组6只，高脂饲料喂养2周、4周、8周组5只。高脂饮食组每只每天早、晚分别赐予高脂饲料30 g，待高脂饲料喂完后加一般饲料及少量青菜喂养。高脂饮食饲料配方为1胆固醇、15蛋黄粉、5猪油、79一般兔饲料。分组及喂养方法见表1。高脂饮食2周组有1只家兔在第2周时意外死亡。8周后自家兔耳中心动脉取血进行指标检测。 122 血脂检测 家兔空腹取血，待血液自凝后，取血清，用全自动生化分析仪测定血清中TC，TG，HDL-C，LDL-C。 123血液流变学指标检测 取血后分
7、别加入肝素抗凝试管，3.8枸橼酸钠抗凝试管。取肝素抗凝血0.8 mL用LBYN6B全自动清洗血流变仪测定全血黏度；肝素抗凝血离心3000r/min，10 min，取0.2 mL上层液用微量血浆测试装置测血浆黏度；取肝素抗凝血0.8 mL用LBYBX3红细胞变形仪测定红细胞变形实力；取枸橼酸钠抗凝血离心3 000 r/min，15 min，取上层液，按试剂盒说明书用C20002高性能血凝仪测定纤维蛋白原含量(FIB)、PT、APTT、TT等各项指标。 13统计学处理 试验数据用均数标准差(xs)表示，单因素方差分析比较组间差异，Pearson法分析相关关系。 2结 果 21高脂饮食对各组家兔血脂
8、水平的影响 与一般饮食组比较，高脂饮食2周组、4周、8周家兔的TC水平显著增高，达(1517)倍；高脂饮食2周组家兔的血清LDLC上升达40倍，8周组上升54倍，说明高脂饮食使家兔血清TC水平、LDLC在短期内快速增加到很高水平。高脂饮食2周和4周组家兔血清HDLC水平显著上升，8周组HDLC水平进一步增高。高脂饮食2周、4周组家兔血清TG上升40左右，与一般饮食组比较差异无统计学意义，8周组家兔TG水平上升4倍，表明高脂饮食对家兔血清TG影响比较缓慢。详见表2。 22高脂饮食对家兔血液流变学的影响 与一般饮食组比较，高脂饮食2周、4周、8周组家兔血浆黏度显著上升，表明高脂饮食在短期内可影响家
9、兔血浆黏度，并随喂养时间增长持续上升。全血黏度的改变有波动，在低切、高切变率状态下，高脂饮食2周组全血黏度呈上升趋势，随后又有降低趋势，但各组与一般饮食组比较均无统计学意义。与一般饮食组比较，高脂饮食2周、4周、8周组家兔高、中、低切变率下红细胞变形指数均显著降低，表明高脂饮食对红细胞变形性的影响较大。与一般饮食组比较，高脂饮食2周、4周、8周组家兔TT显著降低，APTT在高脂饮食4周组明显降低，PT随高脂饲料喂养时间延长有降低趋势。 23高脂饮食家兔血脂与血液流变学改变的相关性分析 用Pearson法进行分析，结果显示，TC和LDLC与血浆黏度呈正相关，与红细胞变形性及TT呈显著负相关。TG
10、与血浆黏度呈 正相关，与红细胞变形性呈负相关。HDLC与高切变率下的全血黏度，血浆黏度呈正相关，与红细胞变形性APTT呈负相关。提示TC，LDLC，7G和FIDLC的上升均可导致血浆黏度增高，红细胞变形性降低；TC，LDLC，HDLC可能导致血液纤溶活性降低。 3讨 论 以往的高脂血症家兔动物模型探讨中，大多只关注造模末期家兔血脂、血液流变学改变，尚缺少在造模过程中对家兔血脂和血液流变学改变的动态视察。本试验通过对2周、4周、8周高脂血症家兔造模过程中的血脂、血液流变学的动态视察发觉其各指标都有不同的改变特点，并且有肯定的相关关系。这些发觉对探讨中医的痰浊与血瘀证的相关关系的生物学基础供应了有
11、意义的资料。 本试验中，家兔血清TC，LDLC在高脂饮食2周即呈显著性上升，TG增高较为缓慢，在高脂饮食8周时增高才出现显著性差异。表明家兔对高脂饲料敏感性高，血浆中TC浓度上升快速，但TG增高较缓，推想这可能是由于家兔对胆固醇易汲取而代谢较慢，而对TG正相反。现代中西医结合探讨发觉，痰浊证病人的血清TC，TG，LDL-C含量明显高于非痰浊组病人和正常人，认为血脂水平与痰浊亲密相关，血清TC，TG，LDLC含量上升可以作为痰浊证微观辨证及判别治疗痰浊证药物疗效和病程进展的微观指标。 本试验中，家兔血浆黏度在高脂饮食2周即呈显著性上升，红细胞变形性和TT在高脂饮食2周呈显著性降低。TT反映机体纤
12、溶活性，TT降低，表明机体纤溶活性降低。在本试验中，APTT在高脂饮食4周一过性降低，PT也随高脂饲料喂养时间的延长有降低趋势。APTT，PT反映机体凝血机能，APTT，PT降低，则血液易凝。这种血液流变性变更，就反映在机体出现血瘀证候时，呈“浓”“黏”“凝”“聚”状态。血液流变学变更是血瘀证发生的重要病理基础，可作为血瘀证微观辨证的依据。在高脂血症家兔模型血脂，血液流变学都发生了异样变更，该模型体现了痰浊和血瘀两种证候的生物学改变。 在本试验的相关性探讨中发觉，高脂喂养家兔血清TC，TG，LDLC，HDLC与血浆黏度和红细胞变形性均有显著相关，TC，LDLC，HDLC与TT亲密相关。血液中T
13、C，HDLC，LDLC的增加会增加红细胞和血浆的流淌时间，降低红细胞膜的渗透性，特殊是血LDL的增加可以显著增加血液黏度，对红细胞的渗透性，流变学和流淌性有重要影响。红细胞变形性的降低可导致红细胞膜的变更并最终变更血液黏度。血脂异样引起的病理产物湿浊、痰凝、瘀血分别为高脂血症的早期、中期、后期病理产物，“湿浊”进入营血，循行经脉，流走全身，日久则可形成“痰凝”，阻于血脉，影响气血运行，导致血瘀，最终痰瘀同病，血液表现出“黏”“浓”“凝”“聚”的流变学变更。痰浊与血脂水平相关，而血瘀证表现的血液“黏”又反映为血液黏度、红细胞变形性变更，“凝”反映为纤溶活性降低，凝血酶时间缩短。本探讨显示TC，TG，LDLC，HDLC与血浆黏度和红细胞变形性均有显著相关性，TC，LDLC，HDLC与TT亲密相关，这在肯定程度上反映了中医“痰浊证”与“血瘀证”相关的生物学基础。 本文编辑郭怀印