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1、方药纵横DOI10 13192/j issn 1000-1719 2014 07 068杏苏散水提工艺研究丁建中1，张盛2，黄荣增2(1.长江大学医学院，湖北 荆州 434023;2.湖北中医药大学，湖北 武汉 430060)摘要:目的:探讨杏苏散的水提工艺条件。方法:以芦丁含量为指标，采用高效液相色谱法测定含量，运用正交试验法对水提的工艺条件进行优化。结果:水提最佳工艺为:第一次补足吸水量后加 10 倍量水浸泡 2 h，其余每次加 10 倍量水，提取 3 次，每次提取 1 h。结论:优选的工艺稳定、可行。关键词:杏苏散;工艺研究;芦丁;高效液相色谱法中图分类号:284 2文献标志码:A文章编
2、号:1000-1719(2014)07-1475-02Study on Water Extraction Process of XingsusanDING Jianzhong1，ZHANG Sheng2，HUANG ongzeng2(1 Medical School of Yangtze University，Jinzhou 434023，Hubei，China;2 Hubei College of TCM，Wuhan 430065，Hubei，China)Abstract:Objective:To optimize the water extraction conditions of Xin
3、gsusan Methods:An extraction procedure was optimizedby orthogonal test The content of utin which was used as the assessment index was determined by HPLC esults:The optimalwater extraction process was as follows:To use crude drugs in processed pieces with 10 times water，soak for 2 h，extraction 3times
4、 and each time lasts 1 h Conclusion:The optimal process is stable and feasibleKey words:Xingsusan;process study;utin;HPLC收稿日期:2014 01 08基金项目:国家自然科学基金项目(81173147)作者简介:丁建中(1955 )，男，湖北利川人，教授，硕士研究生导师，博士，研究方向:六淫病因病机研究。通讯作者:黄荣增(1972 )，男，副教授，博士，研究方向:中药复方物质基础及作用机理研究，E mail:hrz0909163 com。杏苏散出自吴鞠通的温病条辨中秋燥胜气论
5、 :“燥伤本脏，头微痛恶寒，咳嗽稀痰，鼻塞嗌塞，脉弦无汗，杏苏散主之”，药物组成为紫苏叶、半夏、茯苓、前胡、苦桔梗、枳壳、甘草、生姜、大枣、橘皮、杏仁。方中紫苏叶为君药，芦丁是其主要有效成分之一1，具有抗氧化、抗肿瘤、抗菌、抗病毒、免疫调节、降糖等多种作用2。故本文以芦丁含量为评价指标，采用正交试验法考察水提影响因素，优化水提工艺条件，为研究杏苏散治疗凉燥作用的物质基础、探讨其作用机制及其临床应用与开发奠定基础。1材料与仪器药材紫苏叶、杏仁、前胡等均购自湖北清大中药饮片有限责任公司，经湖北中医药大学鉴定教研室鉴定为合格药材;芦丁对照品，供含量测定用，中国药品生物检定所，批号:0080 9705
6、;Dionex P680 液相色谱仪，UVD170U检 测 器，四 元 低 压 梯 度 泵，HKZJZ2830171BAF 戴安变色龙高效液相数据处理系统，美国戴安公司;5200H 型超声波清洗器，上海科导超声仪器有限公司;E 52AA 旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂;SZ 97 自动三重纯水蒸馏器，上海亚荣生化仪器厂;AT 201 电子分析天平(d=0.01 mg，瑞士);甲醇为色谱纯，磷酸等均为分析纯，水为重蒸馏水(自制)。2方法与结果2.1吸水率考察按处方量十分之一比例取方中各味药材混合，加8 倍量水浸泡，每隔 30 min 观察一次浸泡透心情况，直至药材全部浸透，滤出全部未被吸收的水液
7、，计算吸水率为 155%167%，约为 1.6 倍。2.2水提正交试验设计3 4 影响水提工艺的因素主要是加水量、浸泡时间、提取时间、提取次数，故以上述影响因素作为正交试验的考察因素，各取三水平，以芦丁的含量作为评价指标，选用 L9(34)正交表安排试验方案，所选因素水平及正交试验方案见表 1。表 1水提工艺正交试验因素水平表水平因素加水量(倍)A浸泡时间(h)B提取时间(h)C提取次数(n)D1821121041.523126232.3芦丁的含量测定2.3.1谱条件5 6 色谱柱:Aglient TC C18柱(4.6mm 250 mm，5 m);流动相:甲醇 0.5%磷酸水溶5741辽宁中
8、医杂志 2014 年第 41 卷第 7 期液(36 64);流速:1.0 mL/min;柱温 30;检测波长为 358 nm。2.3.2溶液的配制对照品溶液的制备:精密称取经五氧化二磷减压干燥器中干燥 36 h 的芦丁对照品适量，加甲醇制成每 1 mL 含 50 g 的溶液，摇匀即得。供试品溶液的制备 按处方量 1/10 比例称取药材，按 L9(34)正交表设定方案进行煎煮(第 1 次加水时，全部按药材吸水率 1.6 倍，补足吸水量)，过滤，滤液合并，浓缩至一定体积，置 50 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，振摇均匀，用微孔滤膜(0.45 m)滤过，取续滤液，即得。2.3.3系统适用性试验取对照
9、品溶液、供试品溶液各 10 L 进样，按照上述色谱条件测定，记录色谱图。理论板数按芦丁峰计算不低于 4000，芦丁峰与其它杂质峰分离度均 1.5，峰形对称。对照品溶液、供试品溶液在此色谱条件下的色谱图见图 1 2。图 1对照品溶液色谱图图 2供试品溶液色谱图2.3.4芦丁的含量测定分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各 10 L，注入高效液相色谱仪，按照上述色谱条件进行测定。2.4杏苏散水提最佳工艺的确定杏苏散水提正交试验结果见表 2，方差分析结果见表 3。结果表明，以芦丁含量为评价指标，各因素对提取效果的影响大小顺序为 D C A B，其中 D(提取次数)对提取效果有显著性影响，其次是 C(提
10、取时间)。结合工业生产实践，故选择 A2B1C1D3作为杏苏散的最佳水提工艺，即第 1 次补足吸水量后加 10 倍量水浸泡 2 h，其余每次加 10 倍量水，提取 3 次，每次提取 1 h。2.5最佳工艺验证试验按优选的最佳工艺条件提取 3 批样品进行验证试验，测得芦丁平均含量为 0.3300 mg/g。结果见表 4。验证试验结果与正交试验结果基本一致，说明提取工艺条件稳定、可行。3讨论杏苏散为中药复方制剂，成分复杂，方中紫苏叶为君药，芦丁是其主要有效成分，故本文以芦丁含量为指标，采用正交试验法对水提工艺条件进行优化。试验还对杏苏散水提液中白花前胡乙素的含量进行了测定，分析得出的结果基本一致。
11、表 2水提工艺正交试验表与结果试验号因素ABCD评价指标芦丁的含量(mg/mL)111110.2152212220.1637313330.2186421230.3151522310.1820623120.2459731320.1459832130.3715933210.1926I10.59750.67620.83260.5898芦丁含量II20.74300.71720.67140.5555III30.71000.65710.54650.90520.14550.06010.28610.3497SSi0.00390.00060.01370.0248S0.00200.00030.00680.0124
12、表 3芦丁的含量方差分析表误差来源 离差平方和自由度均方F 值P 值A0.003920.00206.66670.05B0.000620.00031.00000.05C0.013720.006822.00000.05D0.024820.012441.33330.05注:F0.05(2，2)=19.00;F0.01(2，2)=99.00。表 4水提工艺验证试验结果方案编号芦丁含量(mg/mL)A3B1C1D110.325420.346030.3186平均0.3300关于芦丁的含量测定，参考相关文献，对多种流动相进行了考察，最后选择甲醇 0.5%磷酸水溶液(36 64)作为流动相，结果芦丁峰形对称，
13、分离良好。参考文献 1刘娟，雷焱霖，唐友红，等 紫苏的化学成分与生物活性研究进展J 时珍国医国药，2010，21(7):1768 1769 2陈秋荣 黄酮类化合物药理作用的分析J 中国实用医药，2012，7(21):254 255 3张铭，马丽颖，孟舒 消白颗粒提取工艺研究J 辽宁中医杂志，2009，36(11):1956 1957 4徐佳佳，陆兔林，马新飞，等 正交试验法优选健骨宝胶囊的水提工艺J 中成药，2008，30(9):1366 1368 5国家药典委员会 中华人民共和国药典:一部S 北京:中国医药科技出版社，2010:279 6党军，张兴旺，陶燕铎，等 高效液相色谱法测定野葱中黄酮类化合物J 化学研究与应用，2012，24(2):282 2866741辽宁中医杂志 2014 年第 41 卷第 7 期